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线粒体DNA多态的变性高效液相色谱分析及其法医学应用研究

目的 建立新的mtDNA多态遗传标记的变性高效液相色谱检测技术,为法医学疑难检材的检测提供新的技术手段;利用变性高效液相色谱技术,寻找适合作为法医遗传标记的mtDNA编码区多态遗传标记,以期提高mtDNA在法医学检测中的应用价值。方法 应用primer3引物设计软件,对mtDNA控制区和编码区分别设计引物,用以进行PCR扩增。通过构建DNA池及样本间两两比较的方法,确定DHPLC发现异源双链的效能,从而建立mtDNA多态分析的DHPLC方法。用建立的方法,在成都汉族群体120名无关个体中,对mtDNA编码区各基因座进行多态性研究,获得等位基因及单倍型频率、变异度及标准误,并进行种属特异性、组织同一性以及陈旧骨骼、毛干等法医学疑难检材的DHPLC分析。结果 应用DHPLC技术,对两个mtDNA控制区基因座的扩增产物成功进行了异源双链分析,建立了适合法医学快速检测的DHPLC方法。针对mtDNA编码区总计1435bp范围,成功建立了  (本文共127页) 本文目录 | 阅读全文>>

山西医科大学
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混合DNA分型结果的解释及法医学应用

目的:通过制备不同混合比例的模拟混合DNA,利用混合DNA分型中的峰高或峰面积信息,采用一定的参数标准对建立在峰高或峰面积基础上各基因座的表型组合进行分析,筛选出合理的表型组合,建立限制性组合分析法对混合DNA分型的结果进行解释,从而对男/女两人混合DNA分型的组分来源进行认定。并通过实际案例的验证,对建立的分析法在法医学应用中的适用范围进行探索,为解决法医学应用中男/女两人混合DNA分型结果的解释提供科学合理的途径。方法:选择AB-YfilerTM试剂盒中007阳性对照品作为已知男性DNA,选择AB-IdentifilerTM试剂盒中9947A阳性对照品作为已知女性DNA(两者浓度均为0.1ng/μl)。制备8个梯度比例的25例常量和不同混合比例不同混合DNA总模板量的19例低拷贝男/女两人模拟混合DNA(每个梯度比例同时做三次平行试验),应用杂合型均衡比和混合比两个参数,通过性别基因座估计男/女两人混合DNA中男性DNA所占...  (本文共181页) 本文目录 | 阅读全文>>

河北医科大学
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混合DNA分析中混合比例推断的研究

目的:混合DNA分析是法医学中一个具有挑战性的难题。由于混合DNA中各种组分难以分离,混合DNA的基因分型结果表现为各组分的等位基因相互并存、相互重叠的现象,导致结果的分析异常复杂。对于法医实践中常见的混合DNA的短串联重复序列(shorttandem repeats,STR)分型图谱,首先判断是否为混合DNA,其次判断是几个个体混合,然后推断各组分的混合比例,在此基础上,进一步推断各成分可能的基因型。混合比例推断的正确与否直接影响各组分基因型的推断结果,因此,混合比例推断是混合DNA分析中的一个关键问题。本课题拟从两方面研究影响混合DNA分析中混合比例推断的因素:1)Quantifile rDuo Quantification试剂盒初始DNA定量结果,2)Identifiler试剂盒基因分型图谱中各等位基因的峰型信息,旨在为准确推断混合比例提供有价值的指导和建议。方法:1单一样本杂合型均衡比(Heterozygote bala...  (本文共73页) 本文目录 | 阅读全文>>

河北医科大学
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核小体在DNA降解过程中的作用及其法医学应用研究

目的:高度降解DNA的分型问题一直是法医DNA检验的难点。大规模灾难性事件、命案现场、恐怖袭击后的个人识别工作,多涉及高度腐败降解检材的检测与分析。高温、潮湿、紫外辐射、土壤微生物、强酸和强碱等因素都会使检材中的DNA分子被损坏,从而发生断裂,分子变小,大片段丢失,碱基缺失,碱基修饰,因此减少了生物检材中完整的目标片段含量,导致PCR扩增不良,甚至扩增失败或目标基因座错误分型。目莉常用检测降解DNA策略有:①通过增加循环次数和模板量等方法提高PCR反应灵敏度。②用减小扩增片段长度的方法来分析降解检材。如分析MiniSTR和SNP两种遗传标记。③利用mtDNA模板高拷贝数提高分析成功率。但是染色质DNA固有结构性质常被忽略。核小体作为真核染色质最基本的重复结构单元,由DNA和组蛋白两个部分构成。核小体)NA长200bp,分为核心DNA和连接DNA两个部分。核心DNA包绕在组蛋白八聚体上,长度为147bp左右。有多方面证据表明核小体...  (本文共133页) 本文目录 | 阅读全文>>

河北医科大学
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轮奸案混合DNA分析的关键技术基础研究及分离软件研发

混合DNA(mixed DNA,DNA mixture)包含多名来源个体的DNA信息,如何对混合斑生物检材DNA进行正确分型检验并对其结果进行科学解释是法医DNA鉴定领域中亟待解决的理论技术难题。本研究通过构建批量轮奸案混合DNA的实验模型,将通过科学性验证的实验数据用于混合DNA的参数评估和约束性条件的挖掘;进而构建基于STR分型数据的混合DNA分离模型,并将分离模型与国外的数学模型(如:mixsepsoftware package)进行比较分析;将构建的混合DNA分离模型进行软件转化,并通过模拟混合DNA分型数据完成研发软件的效能分析和应用验证;从而为DNA鉴定人员解决轮奸案混合DNA的个人识别提供初步的自动化专家系统。本研究构建的方法和模型不受混合样本的来源种类(如:混合精斑、混合血痕、混合脱落上皮细胞等)限制,故对不同案件类型的混合DNA均适用。第一部分:构建轮奸案混合DNA的实验模型目的:以两男混合DNA和三人混合DN...  (本文共355页) 本文目录 | 阅读全文>>

《延边大学医学学报》2017年02期
延边大学医学学报

延边地区朝鲜族和汉族快速突变型Y-STR基因座DYS449和DYF404S1序列及遗传多态性分析

Y染色体STR基因座为男性所特有,具有父系连锁遗传特点,它在性犯罪及父系关系鉴定等中具有特殊法医学应用价值[1].快速突变型Y染色体STR基因座(RM Y-STR)具有高突变率特点,这一特点显著提高了它的单倍型多态性(HD)和个人识别能力(DP).本研究选择延边地区朝鲜族和汉族男性各200名进行了RM Y-STR基因座DYS449和DYF404S1序列及遗传多态性分析.1材料与方法1.1样本及DNA提取依据知情同意原则选择延边地区朝鲜族和汉族无关男性个体各200名,由延边大学附属医院采集并提供抗凝血样本.采用小量全血基因组DNA快速提取试剂盒(北京艾德莱生物技术有限公司)提取基因组DNA.1.2 PCR扩增1.2.1 RM Y-STR基因座DYS449和DYF404S1引物序列DYS449F:5′-TGGAGTCTCTCAAGC-CTGTTCTA-3′,DYS449R:5′-CCTGGAAGTG-GAGTTTGCTCT-3′;D...  (本文共3页) 阅读全文>>