分享到:

Mdr1真核表达载体的构建及肝癌耐药细胞株HepG2/mdr1的筛选

肝细胞癌(Hepatocellar cancinoma,HCC)的发病率呈逐年上升趋势,目前已占所有恶性肿瘤5%以上,全球每年死于肝癌的病人超过500万人。在我国肝癌已成为恶性肿瘤的第二大病因,每年死于肝癌的病人列全球第一位。根治性手术治疗是肝癌治疗的首选方法,但临床上适合于根治性治疗的患者只占全部肝癌患者的30%~40%,因此,化疗是是当今肝癌治疗的重要方法之一。在肿瘤化疗过程中,多药耐药(Multidrug resistance,MDR)的产生一直是影响其疗效的首要因素,是肿瘤化疗急需解决的难题和研究的热点。多药耐药细胞株是研究MDR现象的主要工具之一,目前建立多药耐药细胞系的方法主要是在体外用抗癌药物逐渐诱导的方法。但此方法建立的MDR细胞系,诱导时间长,诱导后细胞的生物特性和敏感性发生差异,当处于无化疗药物培养时,稳定性较差,耐药性往往发生丢失。另外,由该方法建立的细胞株产生MDR的机制复杂,至少有Pgp和MRP等两种机  (本文共107页) 本文目录 | 阅读全文>>

四川大学
四川大学

单基因转入人肝癌耐药细胞株的建立及RNA干扰靶向MRP1逆转多药耐药的实验研究

背景与目的:肝癌是我国常见恶性肿瘤之一,其死亡率在消化系统肿瘤中列举第三位,我国每年约有11万人死于肝癌,占全球肝癌死亡数的45%,疗效差、复发率高是死亡率高居不下的主要原因。化疗是目前肝癌治疗和预防复发的主要方法之一,多药耐药现象是肝癌化疗的主要障碍,它是通过多种相关蛋白质的过度表达而导致肝癌细胞对多种抗肿瘤药产生抗药性。多药耐药相关蛋白是主要蛋白之一。本实验设想构建多药耐药基因(mrp1)真核表达载体pCI-neo-mrp1,将人多药耐药相关蛋白基因转入人肝癌细胞,以使其过度表达多药耐药性关蛋白,建立稳定的单因素人肝癌多药耐药细胞株HepG2/mrp1细胞。观察其生物学特性,再利用RNA干扰技术抑制多药耐药相关蛋白的表达,逆转其多药耐药性,探讨其耐药机理,为进一步研究肝癌多药耐药机制和逆转多药耐药的方法提供理论基础。方法:利用限制性核酸内切酶双酶切含人全长mrp1 cDNA片段的克隆质粒pGEM-mrp1,得到人全长多药耐药...  (本文共86页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中华肝脏病杂志》2004年08期
中华肝脏病杂志

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对肝癌耐药细胞株阿霉素化疗敏感性的影响

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necro溢sfaetor related aPoptosis一indueing五gand,TRAIL)可选择性杀伤肿瘤细胞,其抗肿瘤作用为p53非依赖型,具有高效、快速,良好的安全性及抗瘤谱广的特J点卜4]。在前期的研究中发现:肝细胞癌(HCC)中存在TRAIL耐受,化疗药物可部分逆转TRAIL耐受(5,“l。多药耐药(multidrug resistance,MDR)是肿瘤对化疗药物不敏感的重要原因之一。MDR是否参与肿瘤细胞株对TRAIL的耐受机制?是否能通过调控MDR来中华肝脏病杂志2004年8月第12卷第8期Chin J Hepatol,August 2004,Vol 12,No.8增强TRAIL的杀癌作用抑或通过TRAIL逆转肿瘤多药耐药?本研究采用通过检测H CC中TRAIL及TRAILR的表达,采用阿霉素(adriamyCin,ADM)逐步诱导H印GZ细胞,建立稳定表达M...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国普外基础与临床杂志》2003年02期
中国普外基础与临床杂志

携带反义多药耐药相关蛋白的重组腺病毒的构建及其应用的初步研究

多药耐药 (MDR)是导致肝癌化疗失败的重要原因 ,对肝癌MDR的机理和逆转方法的研究是急待解决的问题。多药耐药相关蛋白 (MRP)是新近发现的ABC(ATP bindingcassette ,ABC)跨膜转运蛋白超家族的成员之一 ,相对分子质量为 190× 10 3 ,由MRP基因编码 ,除小细胞肺癌分离出的细胞株H6 9AR外 ,尚在多种不同组织来源的耐药细胞系中有过度表达[1,2 ] 。并且在对化疗不敏感的肝癌等多种恶性肿瘤患者体内及体外培养的肝癌细胞中 ,也已检测到MRP基因或蛋白的表达增高[3 ,4] 。反义RNA技术为肝癌MDR表型逆转提供了新的途径[5] 。本研究采用新的、简便易行的重组腺病毒AdEasy系统[6] ,构建了携带反义MRP基因片断的重组腺病毒 ,并转染阿霉素诱导的人肝癌耐药细胞株SMMC 772 1/ADM ,为肝癌耐药机理及其逆转方式的研究提供了实验研究基础。1 材料与方法1.1 腺病毒载体系统、...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中国癌症防治杂志》2012年02期
中国癌症防治杂志

肝癌耐药细胞株的建立及癌干细胞的特性

目前研究认为癌干细胞(cancer stem cell,CSC)是一类具有自我更新、增殖和分化的癌细胞,在肿瘤组织中存在数量极少,以类似干细胞的角色在肿瘤形成和生长中起着决定性的作用。近年研究表明CSC多表达ABCG1、ABCG2和BCRP等耐药相关分子,可将药物泵出细胞,表现出耐药特性;CSC极有可能是造成肿瘤耐药的最根本原因之一;还有学者通过拒染Hoechst3334荧光染料,采用流式细胞术分离出SP(sidepopulation)细胞,以此作为富集和纯化CSC的方式及重要模式,是研究CSC的重要基本技术[1,2]。因此,基于CSC耐药特性进行CSC纯化与富集模式研究的不断深入,本研究以体外建立耐药细胞系干预模式为基础,建立BEL-7404人肝癌细胞株,并观察耐药细胞株的癌干细胞的相关生物学特性,为建立富集CSC体外模式进行实验探索研究。1材料与方法1.1细胞株人肝癌细胞株BEL-7404购于中山大学细胞库。1.2主要试剂与...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中华普通外科杂志》2004年03期
中华普通外科杂志

转染核因子κB decoy寡核苷酸在肝癌耐药细胞株的定位及对其活性的影响

本研究我们通过阿霉素逐步诱导肝癌HepG2 细胞 ,建立稳定表达MDR1的肝癌耐药细胞株HepG2 /ADM ,转染核因子 (NF κB)decoy寡核苷酸 ,观察NF κB在肝癌耐药细胞株转染前后的动态变化。材料与方法1.材料 :NF κB双链寡核苷酸序列为 :5′ AGTTGAGGGGACTTTCCCAGGC 3′ ,3′ TCAACTCCCCTGAAAGGGTCCG 5′ ,针对NF κB设计的NF κBdecoy寡核苷酸序列如下 5′ CCTTGAAGGGATTTCCCTCC 3′ ,经过全硫代磷酸化修饰 ,同时合成带有荧光FITC标记的NF κBdecoy寡核苷酸及错义链 5′ TTGCCGTACCTGACTTAGCC 3′作为对照 ,由大连宝生物公司合成。2 .耐药细胞HepG2 /ADM的建立 :细胞用含 10 %的小牛血清DMEM培养基中常规培养 ,用阿霉素逐倍诱导肝癌细胞系HepG2 ,至细胞能在含 1...  (本文共2页) 阅读全文>>