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nm23-H_1基因转染人膀胱癌T-24细胞株的实验研究

目的:探讨电穿孔基因技术将肿瘤转移抑制基因nm23-H_1导入人膀胱癌T-24细胞株的方法和合适条件,建立稳定、高效的基因转移方法。研究nm23-H_1对膀胱癌T-24细胞株侵袭能力、粘附能力和趋化运动能力等肿瘤侵袭转移特性的影响。探讨nm23-H_1转染对膀胱癌T-24细胞株化疗敏感性的影响。方法:利用电穿孔介导的基因转移技术,完成转染方法的建立。利用免疫组化技术和流式细胞术,检测转染前后细胞中nm23-H_1的蛋白产物核苷二磷酸激酶A(NDPKA)的表达。利用Transwell小室和冲刷实验,观察转染前后细胞的侵袭、粘附、趋化运动能力的变化。采用MTT法观察nm23-H_1转染对膀胱癌T-24细胞化疗敏感性的影响。结果:使用重组的pCMV-Neo-Bam真核表达载体,将nm23-H_1转染膀胱癌细胞,G418筛选并获得稳定表达。膀胱癌T-24细胞株转染nm23-H_1基因前后蛋白表达水平有明显差异,转染后T-24细胞侵袭、粘  (本文共83页) 本文目录 | 阅读全文>>

复旦大学
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环氧化酶2在膀胱癌发生发展以及治疗中的作用

环氧化酶2在膀胱癌发生发展以及治疗中的作用研究目的:膀胱癌的发病机制尚不十分清楚。已知环氧化酶2(COX-2)可能与肿瘤的发生有关。本研究旨在探讨环氧化酶2在膀胱癌发生发展中的作用,以及选择性COX-2抑制剂对膀胱癌细胞生长的影响。研究方法:1. 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化技术,检测膀胱移行细胞癌、癌旁组织、正常膀胱粘膜、膀胱炎症组织以及膀胱癌细胞系中COX-1、COX-2 mRNA和蛋白的表达,并将癌组织中COX-2的表达强度与肿瘤各项病理参数相比较。2. 检测人膀胱癌细胞T24和5637在不同浓度的重组人表皮生长因子(rhEGF)作用下COX的表达,以及选择性COX-2抑制剂SC-58125或核转录因子κB(NF-κB)抑制剂PDTC与rhEGF一起作用时细胞COX表达的变化。3. 用四唑氮蓝还原法(MTT)研究选择性COX-2抑制剂SC-58125、celecoxib和非选择性COX抑制剂吲哚美辛(I...  (本文共76页) 本文目录 | 阅读全文>>

重庆医科大学
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c-myc和mad1对膀胱癌中人端粒酶逆转录酶的作用及机理研究

膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤,发病率和复发率高。约95%的膀胱癌为膀胱移行细胞癌(transitional carcinoma cell of the bladder, TCCB)。膀胱镜检是传统的检测方法,但毕竟属于创伤性检查且不能发现早期病变;对TCCB的治疗多采用手术切除结合膀胱内化疗灌注,但化疗毒副作用大,复发率较高。因此,提高患者生存率的有效办法是寻找其无创性、灵敏和特异的早期诊断指标和应用高效、低毒的新型治疗手段。与多数恶性肿瘤类似,TCCB细胞的永生化和染色体末端的端粒和端粒酶密切相关。研究表明,端粒酶(telomerase)是由人端粒RNA(human telomerase RNA,hTR)、端粒相关蛋白1(telomerase related protein 1,TLP1/TP1)和人端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)三部分组成,其中h...  (本文共125页) 本文目录 | 阅读全文>>

第三军医大学
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核基质蛋白22、细胞角质素20和存活素在膀胱癌诊断和复发预测中的价值

膀胱肿瘤是泌尿系最常见的肿瘤。90%以上是移行上皮细胞癌,其中80%以上是无浸润的浅表性癌。初次治疗后5年复发率高达50%-90%,其中10%-20%转变成浸润性癌[1]。早期诊断和对复发的早期预测显得极为重要。长期以来,尿细胞学和膀胱镜检一直是膀胱癌的主要检查方法,但前者敏感性太低,后者是有创检查,频繁检查使病人感到十分痛苦。寻找新的瘤标,以早期检测出临床隐匿性膀胱癌并延长膀胱镜检的间隔时间,即寻找特异性和敏感性均佳的瘤标是提高膀胱癌诊断水平,降低死亡率的关键,具有重要的临床价值。浅表性膀胱癌90%分级为G1和G2,其生物学行为差异较大,不同病理专家的病理分级结果相差30%~40%,寻找比较客观的指标指导术后随访和化疗药物/卡介苗膀胱灌注具有重要价值。近年来的研究发现NMP22,CK20,Survivin是有潜力的膀胱癌瘤标。研究认为尿NMP22检测具有较高的敏感性,但也有人持不同意见。应用尿脱落细胞CK20 mRNA的检测诊...  (本文共85页) 本文目录 | 阅读全文>>

复旦大学
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Survivin在膀胱癌的表达及其反义基因联合重组融合蛋白治疗膀胱癌的实验研究

背景与目的 在中国,膀胱癌是最常见的泌尿系恶性肿瘤,近年来发病率明显上升。膀胱癌多数以浸润方式生长,复发非常普遍(50%-70%),虽然可以用局部治疗来控制,但仍有10%-15%的表浅性膀胱癌最终发展成肌肉浸润性膀胱癌或者发生转移,特别是晚期膀胱肿瘤患者缺乏有效的治疗方法。膀胱肿瘤的发生、发展涉及多方面机制,比如癌基因激活、抑癌基因失活、肿瘤血管生成、细胞周期调控与信号转导异常、抗凋亡增强、侵袭与转移因子激活、端粒酶激活等。本课题从凋亡的机制来探讨膀胱肿瘤的发生、发展,并试图采用重组融合蛋白联合反义基因措施对膀胱肿瘤细胞进行体外杀伤作用的实验研究。抗凋亡因子survivin是迄今发现的最强的凋亡抑制因子。近年来的研究表明,survivin可能参与了肿瘤的发生机制,采取措施下调survivin表达可达到抑制肿瘤生长的作用。目前国内外涉及survivin与膀胱肿瘤的研究较少,有待进一步深入探讨。肿瘤EGFR阳性表达被认为是不良分化的...  (本文共77页) 本文目录 | 阅读全文>>

河北医科大学
河北医科大学

人端粒酶逆转录酶启动子调控的单纯疱疹病毒-胸苷激酶基因重组腺病毒的构建及治疗膀胱癌的实验研究

恶性肿瘤是当前危害人类健康的主要疾病之一,发病率逐年升高,且治疗困难。全世界每年死于恶性肿瘤的人数超过一千万,其中中国超过100 万人。膀胱癌是泌尿系统肿瘤发病率最高的一种恶性肿瘤,占全身恶性肿瘤发病率的第八位。目前膀胱肿瘤的治疗手段主要包括手术治疗、化学治疗和放射治疗。膀胱癌最主要的特点就是容易复发,转移机会也很高,对于处理小的膀胱肿瘤己经有了确定有效而且相对简单的手段,对于大多数中晚期肿瘤,尤其伴有局部扩散或远处转移者,目前的治疗方法还不能令人满意。随着分子生物学技术及基因工程的发展,肿瘤的分子生物学机制得到进一步的阐明,肿瘤的基因治疗技术也随之迅速发展,为膀胱癌的治疗提供了一种新的有希望的手段。肿瘤的基因治疗是指在基因水平上通过载体系统将治疗基因导入肿瘤及其相关组织并有效表达从而达到治疗目的。目前已逐渐成为继药物疗法、手术疗法和放射疗法发展起来治疗肿瘤的第四大疗法,有较好的应用前景。肿瘤的基因治疗根据治疗机理不同,目前可以...  (本文共108页) 本文目录 | 阅读全文>>