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拟南芥抗灰葡萄孢相关基因的克隆和功能分析

灰霉病是一种世界性的重要病害,病原为灰葡萄孢(Botrytis cinerea),其寄主范围广,常造成严重的经济损失。本论文在研究拟南芥不同生态型对不同病原菌抗性反应的基础上,探讨了拟南芥抗灰葡萄孢侵染的表型特征、细胞学证据和生化机制,对拟南芥抗灰葡萄孢基因进行了连锁分析和定位,应用抑制性消减杂交(SSH)和mRNA差异显示—PCR(DDRT-PCR)技术获得了大量拟南芥抗灰葡萄孢的相关基因片段,克隆了2个拟南芥抗灰葡萄孢相关基因,同时通过原核基因的表达初步验证其中1个抗病相关基因对灰葡萄孢的生长有一定的抑制作用。为更好地利用模式植物拟南芥的遗传资源和信息,促进植物抗病基因的克隆和相关作物的遗传改良奠定了良好的基础。1.通过对拟南芥11个生态型对不同植物病原菌的抗病性反应测定,筛选出了具有抗/感差异表现的拟南芥—病原菌组合。供试40个菌株中,有19个菌株对拟南芥的11个生态型都表现抗/感差异,其中10株为灰葡萄孢菌株。试验选择灰  (本文共150页) 本文目录 | 阅读全文>>

河北农业大学
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拟南芥抗灰葡萄孢相关基因的克隆与体外表达

为了获得拟南芥抗灰葡萄孢相关基因,在拟南芥Col-0生态型可以抵抗灰葡萄孢侵染的基础上,将51,600个此生态型的T-DNA插入突变体接种该病菌以后,选定单拷贝的感病突变体△bosA(Botrytis susceptible mutant)为进一步的试验材料,提取其DNA,利用TAIL-PCR技术获得了插入片段的侧翼序列,在http://www.arabidopsis.org/和www.ncbi.nih.gov网站上,对得到的侧翼序列运用BLAST软件分析,发现T-DNA插入位点在AT1g01800基因(命名为bosA)的第4个外显子处,AT1G01800属SDR(short-chain dehydrogenase/reductase)家族蛋白,将该基因进行原核表达后,提取活性蛋白发现对灰葡萄孢没有直接的抑制作用。经过生物和非生物胁迫发现该基因在诱导抗病中起作用。试验从51,600个拟南芥T-DNA插入突变体中筛选到12个灰葡萄...  (本文共62页) 本文目录 | 阅读全文>>

西北农林科技大学
西北农林科技大学

灰葡萄孢生物活性代谢产物的研究

灰葡萄孢是一种分布广、致病性强的植物病原真菌。对其致病性的研究较多,但涉及应用的报道甚少。从开发利用真菌资源,创制环境和谐农药的目的出发,本研究选灰葡萄孢为目标真菌,在筛选菌株及其培养条件的基础上,测定了高活性菌株代谢产物的农药活性和安全性,进而对活性成分进行分离和结构鉴定。 1. 从 11 种菌株中筛选出 BC4 菌株为高活性菌株,反枝苋为其敏感植物。同时确定了在 pH 3-4 的改良-Fries 培养基中,在 25℃黑暗条件下静止培养 15-35d 得到的培养滤液活性最高。 2. 分别用生长速率法和抑菌圈法测定培养滤液对部分植物病原真菌和细菌的抑菌活性,用浸渍法测定其杀虫活性,以杂草种子萌发和幼苗生长受阻为指标测定其除草活性。结果表明稀释 3 倍的灰葡萄孢培养滤液对小麦纹枯病菌、小麦根腐病菌和小麦赤霉病菌的抑制率分别为 66.2%、61.6%和 56.4%;对黄瓜角斑病菌、马铃薯环腐病菌和白菜软腐烂病菌的抑菌圈直径分别为 1...  (本文共123页) 本文目录 | 阅读全文>>

《植物保护学报》1987年04期
植物保护学报

紫外光诱导灰葡萄孢产生抗多菌灵菌株的研究

灰葡萄抱(Bofryt沁。‘nere。)是一种寄生范围很广的植物病原菌,在多种果树、蔬菜、花卉、草毒等植物上引起病害,并能造成一定的经济损失。近年来,随着草萄、花卉等园艺作物的广泛种植,以及大棚蔬菜生产的发展,灰霉病的问题也日趋突出。化学防治也将在这些作物上较多地使用。但灰霉病菌(B.“nerea)对杀菌剂很容易产生抗药性〔“〕,尤其是对一些内吸杀菌剂如苯来特、甲基托布津、多菌灵、噬菌灵等〔6〕。因此,作者以梅果上分离到的灰霉病菌作材料,测定它对多菌灵的敏感性基线,并以紫外光照射诱导抗性菌株进行研究,结果整理如下。 材料与方法 1.试验菌株准备,采集未施用过杀菌剂的催病梅果,由混合抱子分离到Bofrytfsci解rea纯菌株B:。在马铃薯蔗糖琼脂(PSA)培养基平板上培养5天,在菌落边缘制取5毫米直径菌丝块,分别移到含多菌灵0.1、0.3、0.5、1.0、10、looppm和对照(无药)培养基平板中央,每处理重复3皿,25℃下培...  (本文共5页) 阅读全文>>

华中农业大学
华中农业大学

植物病原真菌灰葡萄孢与蓖麻葡萄孢中真菌病毒研究

灰葡萄孢(Botrytis cinerea Pers.)和蓖麻葡萄孢(Amphobotrysricini(Buchw.)Hennebert)是许多重要经济作物和园艺作物的病原真菌。灰葡萄孢可以侵染1400多种植物,蓖麻葡萄孢主要侵染大戟科植物,二者均引起植物灰霉病,造成巨大经济损失。本文从真菌病毒的角度出发,从119个灰葡萄孢菌株和180个蓖麻葡萄孢菌株中筛选RNA病毒,发现1种新的与灰葡萄孢弱毒相关的dsRNA病毒Botrytis cinereaRNAvirus1(BcRV1)和1种新的在蓖麻葡萄孢中普遍存在的+ssRNA病毒Amphobotrysricinihypovirus 1(ArHV1)。取得的主要研究结果包括:本研究明确了 BcRV1的生物学和分子特性。BcRV1的基因组全长8952 bp,其正链RNA序列含有2个重叠的开放阅读框,ORF1和ORF2,分别编码1个假定多肽(P1)和依赖于RNA的RNA复制酶(RdRp...  (本文共142页) 本文目录 | 阅读全文>>

吉林大学
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乙醇脱氢酶在灰葡萄孢生长发育、环境适应及致病等过程中的功能研究

由灰葡萄孢(Botrytis cinerea)侵染引起的植物灰霉病是一种世界性的植物真菌病害。该菌能侵染几乎所有的果蔬作物,全球每年因各种作物灰霉病的发生导致的经济损失高达上千亿美元。防治植物灰霉病传统的方式是施用大量的化学农药,这不仅花费巨大,污染环境,而且在长期使用农药后会导致灰葡萄孢抗药性的产生并使农药失效。因此,在分子水平研究灰葡萄孢的致病分子机理,可为寻找有效和环境友好的防治灰霉病的方法提供科学依据。两株灰葡萄孢模式菌株全基因组测序的发表,使从基因水平研究灰葡萄孢的致病分子机理变为容易。我们实验室前期从灰葡萄孢与番茄寄主早期互作的转录组学研究中发现了灰葡萄孢中编码乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase)的三个基因BcADH1,BcADH2和BcADH3在该菌侵染寄主早期其转录水平急剧提升,可能参与了该菌的致病过程。本研究在此基础上,利用同源重组的方法进行了灰葡萄孢BcADH的基因敲除和对基因敲除突变体进...  (本文共124页) 本文目录 | 阅读全文>>

华中农业大学
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中国湖北省草莓和番茄灰葡萄孢对二甲酰亚胺类和苯甲酰胺类杀菌剂的抗药性研究

灰葡萄孢(Botrytis cinerea)是包括番茄和草莓在内的超过200种寄主植物的病原菌,其引起的灰霉病是世界范围的严重病害。本研究调查了采自番茄和草莓的灰葡萄孢对二甲酰亚胺类和苯甲酰胺类杀菌剂的抗性发生情况,同时对抗性菌株进行了抗性分子检测和适合度测定。主要结果如下:1)草莓和番茄是世界上种植的重要经济作物。中国作为重要的草莓种植国和最大的番茄生产国,深受灰霉病的困扰。本研究测定了从湖北省不同地区番茄和草莓保护地采集的灰葡萄孢对杀菌剂腐霉利的敏感性。腐霉利敏感和抗性菌株的平均EC50值(抑制50%生长时的有效浓度)分别为0.25μg/ml和3.02μg/ml。抗性菌株(Pro R)的频率为16%,最高的频率发生在荆门。腐霉利抗性菌株对其他二甲酰亚胺类杀菌剂存在正交互抗性,但对苯吡咯类杀菌剂没有交互抗性。敏感菌株和抗性菌株的适合度,比如菌丝生长、渗透压敏感性和致病力,两者之间存在显著差异。比对Bc Os1基因的氨基酸序列发...  (本文共105页) 本文目录 | 阅读全文>>