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沙眼衣原体E型DNA疫苗的构建及其免疫效果的研究

沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis, C. t)所致的泌尿生殖道感染近几年迅速增多,无症状和慢性C.t感染所致的前列腺炎、不孕不育、异位妊娠、慢性盆腔炎等严重危害着患者的身心健康。目前,C.t泌尿生殖道感染的迁延难治、易于复发和耗资巨大已成为共识,对C.t感染的研究已成为当今国内外研究的热点之一,C.t的预防和控制方法亟待改进。沙眼衣原体疫苗的研究便是预防措施中的重点之一。在众多研究的C.t疫苗中,DNA疫苗凭借其不可比拟的优势成为发展的方向。遗憾的是到目前为止仍然没有成功的疫苗问世。目的:构建感染泌尿生殖道的C.t优势型—E型的DNA疫苗,并选择小鼠白细胞介素2(mouse interleukin-2,mIL-2)真核表达质粒作为免疫佐剂,研究DNA疫苗单独免疫及联合佐剂共同免疫在小鼠体内诱发的免疫应答和免疫保护作用。方法:C.t E型经细胞培养后提取染色体DNA作为模板,设计引物扩增出完整的ompl基因,  (本文共111页) 本文目录 | 阅读全文>>

山东大学
山东大学

优化密码沙眼衣原体主要外膜蛋白DNA疫苗免疫效果的研究

沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)泌尿生殖道感染是一种常见的性传播疾病(STD),近年来在世界范围内发病率呈上升趋势。女性生殖道Ct感染可引起宫颈炎、子宫内膜炎、输卵管炎等严重后遗症从而造成不孕和异位妊娠,同时Ct的感染还能提高HIV传播的机率。虽然抗生素对沙眼衣原体早期泌尿生殖道感染有很好疗效,但由于无症状性衣原体感染普遍存在,给预防Ct的感染和并发症带来很大困难。因而有效地控制沙眼衣原体性传播疾病需依赖安全有效的疫苗的开发与应用。沙眼衣原体是一类专性细胞内寄生的原核细胞型微生物,具有独特的生活周期,有两种形态和代谢差别很大的生活形式:其感染形式是原体(elementarybody,EB),繁殖形式是始体(reticulate body,RB)。EB的外膜成分是衣原体致病性的决定因素,也是宿主免疫系统的主要靶分子。其中衣原体主要外膜蛋白(majorouter membrane protein,MOM...  (本文共165页) 本文目录 | 阅读全文>>

第四军医大学
第四军医大学

异种同源钙激活Cl~-通道DNA疫苗对小鼠哮喘模型的防治作用

【研究背景】支气管哮喘(哮喘)是一个严重危害人类健康的疾病,目前尚缺少有效的防治方法。哮喘的发病机制复杂,涉及多种效应细胞及其分泌的炎症介质。气道上皮细胞就是其中具有重要作用的效应细胞之一,它位于外界刺激与机体内环境接触的第一环节,在哮喘中处于持续损伤与异常修复的状态,能够分泌多种炎症介质,影响周围组织及炎性细胞的结构与功能,被认为是哮喘发生的始动部位之一。近年的研究表明,上皮中杯状细胞特有的一种钙激活Cl~-通道(CLCA)是上皮杯状细胞参与哮喘发生的主要功能单位,阻断CLCA是防治哮喘具有潜在前景的措施。这种功能独特的CLCA已知基因序列有:人hCLCA1、小鼠mCLCA3。以CLCA为作用靶位的哮喘防治疫苗尚无研究。【目的】1、利用hCLCA1和mCLCA3的异种同源性,构建人源hCLCA1 DNA疫苗,肌注法接种给小鼠,试图突破小鼠自我的免疫耐受屏障,诱导其产生针对自身mCLCA3胞外肽段的交叉抗体,以期达到阻断气道mC...  (本文共106页) 本文目录 | 阅读全文>>

第四军医大学
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热休克蛋白70与MAGE-3融合蛋白疫苗和DNA疫苗的构建及抑瘤效应的研究

肿瘤严重威胁着人类生命健康。肿瘤疫苗能诱导抗原特异性的抗肿瘤免疫反应,在肿瘤防治上已经显示出一定的效果,被认为是最具前景的肿瘤治疗方法。但因缺乏肿瘤特异性抗原及高效的抗原递呈等,疫苗的效果远不能令人满意。黑色素瘤抗原(Melanoma Antigen,MAGE)是首先被发现的人类肿瘤特异性抗原,MAGE-3是MAGE家族重要的成员之一,广泛表达于多种组织的肿瘤,而在除睾丸和胎盘外的正常组织中均不表达,是肿瘤特异性免疫治疗理想的靶分子。基于MAGE-3的肿瘤疫苗能诱导MAGE-3特异性CTL的产生,在肿瘤免疫治疗方面倍受重视,但仍需提高疫苗的免疫原性以提高疫苗效能。热休克蛋白(Heat Shock Protein,HSP)具有分子伴侣作用,参与肿瘤抗原的加工递呈,在诱导肿瘤免疫反应中发挥重要作用。最近研究表明,将结核杆菌HSP70与目的抗原融合是提高疫苗效能的有效方法。本研究拟克隆人MAGE-3基因,制备HSP70-MAGE-3融...  (本文共127页) 本文目录 | 阅读全文>>

第二军医大学
第二军医大学

猪带绦虫囊虫病DNA疫苗的中试及免疫效力研究

猪带绦虫囊虫病是重要的人畜共患病之一,在拉美、非洲及亚洲多国有广泛的分布。在中国西北、西南地区,该病的流行不仅对人体健康带来危害而且产生巨大的经济损失。虽然近年该病的流行呈现一定的下降趋势,但远未被控制。有效疫苗的研制和应用是预防该病流行的重要手段之一,这对保护人民身体健康,减少经济损失具有重要意义。本课题在已有的猪带绦虫囊尾蚴DNA疫苗pcDNA3—cC1的基础上,对该疫苗的中试工艺、效力试验和安全性的若干关键问题进行了较为系统的研究。具体包括:(1) 制备工艺和质检标准的确立:采用流加补料和变温法为基础的50L发酵罐发酵方法:在传统的碱法抽提质粒的基础上建立了疫苗质粒中试规模的质粒制备工艺;制定了相应的质量检测标准。(2)疫苗有效性的中间试验:以囊虫卵攻击疫苗接种后的仔猪,结果显示接种DNA疫苗后仔猪的减虫率达到80%以上。DNA疫苗的免疫期试验结果显示免疫4个月后进行攻击的3批疫苗与免疫后3周攻击的对应批次的疫苗产生的保护...  (本文共97页) 本文目录 | 阅读全文>>

南京农业大学
南京农业大学

鸡柔嫩艾美尔球虫(E.tenella)MZ5-7基因免疫调节型DNA疫苗的构建及其免疫保护性试验

鸡球虫病是一种病原寄生在细胞内的原虫疾病,给养禽业所带来的经济损失极为严重。实践证明,激发宿主细胞免疫反应来防治鸡球虫病是更有效的途径之一。DNA疫苗的一个显著优势是刺激机体产生广泛的细胞免疫反应和持久的免疫记忆,尤其是联合应用一些细胞因子,构建调节型DNA疫苗,更有诱人的应用前景。为此我们选择球虫的表面抗原以及特定的细胞因子基因,通过DNA重组技术将几种目的基因串联为一体,插入到相关真核表达载体当中,并检测它们对鸡抵抗球虫攻击的免疫保护作用。用RT-PCR的方法,从感染柔嫩艾美尔球虫(Eimeria tenella)第5天的鸡盲肠分离的第二代裂殖子中克隆出MZ5-7基因,并进行抗原表位分析和原核表达。结果表明,MZ5-7基因ORF为945bp,与GenBank里已知序列(登录号为L08257)比较,核甘酸和氨基酸同源性均为99.9%。应用DNAStar软件对该基因的抗原表位进行了分析,发现其B细胞表位广泛分布在80-300区域...  (本文共138页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国医科大学
中国医科大学

口服DNA疫苗防治实验性脉络膜血管新生

前言脉络膜血管新生(choroidal neovascularization,CNV)与许多眼病有关,如年龄相关性黄斑变性(age related macular degeneration,AMD)、组织胞浆菌病、病理性近视及眼部外伤等,常引起严重的视力障碍,其中AMD是发达地区老年人视力障碍的最主要原因。目前,对于伴有CNV的AMD治疗方法或是由于非选择性地损伤周围正常组织,或是由于未能消除根本病因而容易引起CNV的复发,都不能使患者视力恢复到较好的水平。近年来许多学者尝试采用生物学方法治疗血管新生,如拮抗血管新生促进因子的作用,或加强血管新生抑制因子的作用,从CNV发生的分子基础着手,阻断新生血管发生、发展的中间环节,提出了防治新生血管的新思路。虽然关于CNV确切的发生机制尚未完全阐明,但是与体内其它部位的血管新生一样,CNV的产生也是由于某些原因致使局部血管新生促进因子与血管新生抑制因子之间的平衡被打破的结果。随着研究的深...  (本文共58页) 本文目录 | 阅读全文>>