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凋亡抑制基因survivin在大肠癌组织的表达情况及RNA干扰的初步研究

Survivin是凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)家族中的一员,编码142个氨基酸,定位于17q25;它具有抑制细胞凋亡和调节细胞分裂的双重功能。本课题旨在分析大肠癌与survivin以及其与血管生成的关系;应用RNAi技术,通过构建survivin封闭载体,转染大肠癌细胞SW620,观察体外大肠癌细胞凋亡、蛋白和基因表达情况,初步探讨大肠癌的生物治疗前景;通过survivin的RNA封闭载体治疗大肠癌裸鼠移植瘤模型建立,计算其肿瘤大小,重量分析其治疗和毒性作用。第一部分 大肠癌Survivin的表达与血管生成的关系目的 观察Survivin在大肠癌中的表达情况及其与微血管密度(micro vessel density,MVD)的关系。方法 采用免疫组化S-P法检测30例大肠癌组织Survivin、CD34的表达,以CD34标记肿瘤微血管,并在显微镜下计数微血管密度(MVD  (本文共140页) 本文目录 | 阅读全文>>

中南大学
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人大肠癌组织蛋白质组二维凝胶电泳技术的建立及应用

第一部分:人大肠癌组织二维凝胶电泳技术的建立目的 应用二维凝胶电泳技术研究人大肠癌组织的蛋白质组比研究细胞系或动物的蛋白质组更为重要,但是目前国外应用二维凝胶电泳技术研究人大肠癌组织的报道较少,国内尚无报告。本部分旨在建立分辨率高、重复性好的大肠癌组织二维凝胶电泳实验技术,为进一步研究大肠癌组织的蛋白质组提供基础。方法 样品的处理中比较分析组织和裂解液的不同体积比例关系、不同的裂解液(添加和不添加2M硫脲、2%TritonX-100)、不同的蛋白上样量(200μg、400μg、600μg)所产生的结果;第一向电泳采用固相pH梯度等电聚胶,并比较确定时间-电压程序;在第二向电泳中采用垂直的十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术。对各程序进行了比较分析后,采用优化的程序进行二维电泳,并用ImageMaster 2D Elite专业软件分析优化程序后获得的图谱,进行图象质量分析。结果 在组织和裂解液的体积比例关系以...  (本文共69页) 本文目录 | 阅读全文>>

浙江大学
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启动子区去甲基化对肠癌RKO细胞CKIs基因转录表达的研究

大肠癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,近年来其发病率仍呈上升趋势,至今,对大肠癌的分子机制研究已经取得了很大的进展,众多依据表明,大肠痛是一种复杂的多阶段变化过程,是细胞内多种调控细胞生长和分化基因的累积变化导致肿瘤的表型变化。肠上皮细胞作为肿瘤的起始,经历了异形增生、早期腺瘤、中期腺瘤、晚期腺瘤、腺癌和转移腺癌的变化过程,其中,癌基因突变包括促细胞生长基因的激活、肿瘤抑癌基因的失活及细胞增殖负调节的综合效应,在大肠癌的发生发展过程中起重要作用。总之,大肠癌的形成至少包括5q染色体上的多发性结肠腺癌抑制基因(adenomatous polyposis coli,APC)、5q染色体上突变的MCC基因、18q染色体上的肠癌缺失的DCC基因、12p染色体上的K-ras基因和在17p染色体上的p53基因,这些基因变化的累积对肠癌的起始(突变)、促癌和/或增殖起着重要功能。然而,近年来的研究资料发现,如10-15%的散发性结肠癌尽管无错配修...  (本文共105页) 本文目录 | 阅读全文>>

浙江大学
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大肠癌相关基因ST13功能研究

大肠癌是常见的恶性肿瘤,占所有癌症的9%—15%。大肠癌的发病过程一般较长,从正常上皮、增生、腺瘤、原位癌到转移,有明显的阶段性。大肠癌发生发展的多基因参与、多步骤及多阶段的分子事件模式已明确包括癌基因、抑癌基因、错配修复基因以及细胞周期调控相关因子突变等。但这些仍不能完全解释大肠癌从正常上皮到癌转移的整个过程中的所有分子变化。为寻找与大肠癌相关的新因素和分子事件,1993年本研究所应用减式探针从正常人的cDNA文库中筛选到正常人肠粘膜组织和肠癌组织中差异表达的新基因ST13,对ST13基因的结构、染色体定位、核酸和蛋白表达及功能所作一系列的研究表明:ST13基因组序列为32017bp,有12个外显子、11个内含子;核酸外显子为3127bp,内含子为28890bp;ST13基因定位于染色体22q13区带;其cDNA全长为3145bp,ORF编码一个由369个氨基酸组成的蛋白质;ST13基因在不同肿瘤细胞系及组织中表达不一,大肠癌...  (本文共123页) 本文目录 | 阅读全文>>

中南大学
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大鼠大肠粘膜不典型增生及各期大肠癌组织自体荧光光谱特征分析及机制研究

目的:(1)建立大鼠大肠癌动物模型;(2)分析激光诱导大鼠大肠正常组织、不典型增生组织、早期及进展期大肠癌组织自体荧光光谱特征差异,探讨其区分方法;(3)探讨大鼠大肠正常组织、不典型增生组织、早期大肠癌和进展期癌组织中Ⅳ胶原和组织蛋白酶B的表达差异和相关性。方法:6~7周龄Sprague-Dawley(SD)大鼠60只,采用二甲肼(DMH)腹腔注射,25 mg/kg,每周1次,共18周。分别于第4周、8周、12周、16周各解剖3只大鼠结肠和直肠,用370nm激发波长的调Q式钛宝石激光器激发大肠正常组织、可疑病变组织和肿块组织产生自体荧光,收集在体和离体组织的自体荧光光谱。留取部分组织置入液氮中保存,剩余组织行病理切片检查。余下大鼠在第20周后行相同处理。根据病理诊断分为正常组、不典型增生组、早期癌组和进展期癌组,比较分析各组组织自体荧光光谱特征和差异。用免疫组化染色的方法检测正常组、不典型增生组、早期癌组和进展期癌组各25例组织...  (本文共111页) 本文目录 | 阅读全文>>

吉林大学
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应用蛋白质组学及噬菌体抗体库技术筛选大肠癌特异性抗原及抗体方法的建立

寻找大肠癌相关特异性抗原以及高特异性,高亲和性抗体一直备受学者关注。80年代中后期发展起来的噬菌体抗体库技术,使抗体技术进入第三代—基因工程阶段,它具有人源性基因工程抗体异源性弱;克服了杂交瘤技术制备人源性mAb遇到的困难;半衰期延长;能够模拟天然抗体库而无须免疫人和动物;能够模拟体内抗体亲和力成熟过程,获得不同亲和力抗体等优势和特点。构建足够库容的抗体库是筛选目的抗体的基础。90年代发展起来的蛋白质组学及相关技术为有效分离和鉴定蛋白提供了技术平台。噬菌体抗体库技术和蛋白质组学相关技术是目前唯一的在数量,速度及所产生的信息流上能够相互匹配的生物学技术。鉴于蛋白质组学技术具有能够分离,纯化和鉴定特殊蛋白的优势和特点以及现有的筛选肿瘤噬菌体抗体库方法上的不足。我们想到尝试通过Western-Blot免疫印记实验的桥梁,将蛋白质组学相关技术应用到肿瘤抗体库的筛选,这样不仅可以发现和鉴定肿瘤特异性抗原,同时还可以筛选和富集制备与之相应的...  (本文共125页) 本文目录 | 阅读全文>>