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人骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞诱导分化的实验研究及差异表达基因的微阵列分析

人骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞诱导分化的实验研究及差异表达基因的微阵列分析骨髓间充质干细胞是多能干细胞,已有实验证明在体内和体外细胞因子作用下,可分化为骨、软骨和脂肪细胞,在体内参与组织更新、损伤的修复和重建。本研究探讨人骨髓间充质干细胞诱导分化为内皮细胞的可能性。1.材料和方法1.1 人骨髓间充质干细胞的分离培养人骨髓标本来源于39岁男性健康志愿者。按骨髓穿刺的常规方法,抽取骨髓液5ml。肝素抗凝。DMEM+F12培养液稀释后,用人淋巴细胞分离液Ficoll(比重为1.077)密度梯度离心法,分离出单个核细胞。用DMEM+F12洗涤后,加入DMEM+F12与MCBD的混合培养液(3:2,V/V),并加入10%胎牛血清(FCS)、2ng/ml碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、10ng/ml表皮生长因子(EGF)、10ng/ml胰岛素样生长因子(IGF)和双抗。24小时后,吸取培养液,连同未贴壁细胞弃去。贴壁细胞继续培养,每四  (本文共123页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国协和医科大学
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胎盘脐带源间充质干细胞的分离、生物学特性及其内皮分化的研究

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是来源于中胚层的具有高度自我更新能力和多向分化潜能的成体干细胞,广泛存在于全身结缔组织和器官间质中。由于MSCs具有多向分化的潜能,而且体外容易扩增,很快成为组织工程的理想的种子细胞。胎盘和脐带都属于胎儿附属物,出生后即被遗弃。二者都具有胚外中胚层来源的结构,因此,如果从胎盘和脐带获取间充质干细胞,将为组织工程提供巨大的种子细胞库。本研究体外分离和培养胎盘脐带MSCs,比较两种MSCs与骨髓来源的MSCs在形态、生长特性、表面标志、分化潜能等生物学特征的区别,进而对它们在组织工程中的应用以及向内皮分化时基因的差异表达做了进一步的研究。第一部分研究体外分离和培养胎盘脐带单克隆MSCs,比较两种MSCs与骨髓来源的MSCs在形态、生长特性、表面标志、分化潜能等生物学特征的区别,取上述所得的单克隆来源MSCs分别向脂肪、成骨、内皮定向诱导。结果提示,可以获得性状稳定...  (本文共78页) 本文目录 | 阅读全文>>

吉林大学
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VEGF在骨髓间充质干细胞向内皮细胞诱导分化中的作用及分化机制研究

骨髓中的间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)在不同的诱导条件下,具有向中胚层和神经外胚层组织细胞分化的能力,已成为组织工程的种子细胞。目前,许多文献报道了关于MSCs的分离、鉴定、生物学性状及定向诱导分化.。随着组织细胞工程学和基因工程学的发展,利用MSCs的多向分化潜能,在组织工程、基因治疗以及器官移植等方面的应用研究已成为研究热点。然而MSCs在血管组织工程中的作用及其与血管内皮细胞之间的关系的研究尚少。MSCs具有内皮细胞的某些表型,因此研究和分析MSCs生长、发育、分化和表型特征,不仅对研究血管内皮细胞相关疾病的治疗有着重要的指导意义,而且给血管组织工程学带来了一次革命性转变。MSCs作为血管组织工程的种子细胞,具有其他细胞所不可比拟的优越性:①取材方便,损伤轻微,不必通过手术从病人身上得到自身成熟细胞,避免对病人造成不必要的二次创伤;②从患者本人骨髓血培养扩增的MSCs诱导为血管内皮...  (本文共120页) 本文目录 | 阅读全文>>

西北农林科技大学
西北农林科技大学

骨髓与脂肪间质干细胞分离与诱导分化为成骨细胞的研究

由疾病、外伤等原因造成的骨缺损及功能丧失的修复至今仍是骨外科领域尚待解决的重大课题。组织工程这门新兴学科的兴起使骨缺损的修复和重建迈向了一个新的时代。组织工程一个首要解决的关键问题是寻找来源丰富、易于操作的的种子细胞。目前己发现人和动物骨髓中存在间质干细胞(Mesenchyma1 stemcells,MSCs),它们是一群具有多向分化潜能的均质性细胞,在特定的诱导条件下可分化为多种间质组织细胞,如骨、软骨、脂肪等细胞,以及多种非间质组织细胞,如肌肉细胞、神经细胞等细胞类型。发育生物学家Verfaillie认为骨髓MSCs在分化潜能上似乎可以与胚胎干细胞相媲美。在体外长期培养过程中,骨髓MSCs始终保持其多向分化潜能,且遗传背景相当稳定,体内植入反应较弱,采用特定诱导分化技术,将其定向诱导分化为成骨细胞,可以理想地解决骨组织工程中的种子细胞问题。脂肪MSCs表现出与骨髓MSCs相似的、广泛的分化潜能等生物学特性,而脂肪组织的获取比...  (本文共121页) 本文目录 | 阅读全文>>

西北农林科技大学
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人nthESC向HSC诱导分化和胚胎造血标志物表达研究

造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)是近年来研究较多的一类组织干细胞,目前发现卵黄囊、胎肝、主动脉-性腺-中肾区(AGM)、胎儿血液以及胎盘中均存在具有高度扩增能力的HSC。本论文主要进行了具有课题组专利的人自体基因胚胎干细胞(nthESC)向造血干细胞的诱导分化、人胚胎发育过程中卵黄囊、胎肝和胎盘中的造血发育以及胎盘贴壁细胞的分离培养、向神经细胞诱导分化的研究,为nthESC 和HSC的临床应用提供了理论依据和技术方法。1. 探讨了人胚骨髓间充质干细胞(MSC)的体外分离、扩增、冻存、复苏、转GFP基因和向成骨和神经细胞的诱导分化条件,结果发现MSC有60%可转染GFP基因,表达CD29、CD13、CD59,而CD34、CD45和CD38表达阴性。Vimentin染色阳性,mallory染色显示胶原存在,分离的细胞可在神经诱导体系和成骨诱导体系下进一步向神经细胞和成骨细胞分化。表明MSC在体外能...  (本文共175页) 本文目录 | 阅读全文>>

山东大学
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骨髓间充质干细胞诱导分化和心肌内移植的实验研究

背景骨髓间充质干细胞是一类可进行自我复制和更新的细胞,在一定条件下能够跨胚层向骨、软骨、脂肪、神经、肌肉等多种谱系分化。多项研究证明,间充质干细胞移植入缺血心脏后可以分化形成新生心肌细胞、血管内皮细胞和神经细胞等,还可通过分泌多种生长因子,促进微循环建立,增加血液灌注,提高梗死后心脏功能。将间充质干细胞的多向分化特性应用于临床治疗,可能为心肌梗死后的慢性心力衰竭患者带来新希望。间充质干细胞可在体外培养中被诱导分化为心肌样细胞,具备心肌细胞的部分表型,表达心肌特异物质,甚至产生自发跳动。但是有关人间充质干细胞在体外诱导分化为心肌样细胞的实验较少,诱导后的干细胞在形态学、组织学以及分子生物学方面会有何种改变尚缺乏相关实验证据。干细胞分化是外界刺激和细胞内特异性信号转录调控的共同作用结果。研究发现,成体干细胞分化为心肌样细胞的过程类似胚胎时期的表现,某些心肌发育调控基因在这一过程中再次被激活,但其表达规律如何尚未被阐明。Cripto-...  (本文共166页) 本文目录 | 阅读全文>>

中南大学
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大鼠骨髓细胞CD34~+β_2m~-CD90~+亚群体外培养诱导分化和肝内移植的研究

肝纤维化是肝脏疾病转变为肝硬化、肝癌的一个极其重要的过程。当肝病发展到纤维化期,即使病因被消除和/或得到了及时治疗,仍基本呈现一种不可逆的病理改变。所以如能在肝纤维化时找到一种较好的治疗方法,无疑对阻止其继续进展和改善预后有非常重要的意义。近年来,骨髓造血干细胞(HSCs)的可塑性研究取得了巨大进展,HSCs移植后在体内能分化成具有白蛋白分泌功能的肝细胞,为肝细胞移植治疗肝疾病提供了新的供体来源。与成熟肝细胞相比,HSCs具备较高的增殖能力及较低的免疫原性,作为肝细胞移植的供体来源有一定优势,临床应用前景非常突出。通过移植少量细胞来实现受体肝细胞结构和功能的替代,使阻断肝纤维化向肝硬化、肝癌转化成为现实。HSCs没有明确的形态学特征,都表现为淋巴细胞样的单个核母细胞,CD34~+β_2m~-CD90~+表型为HSCs抗原标志被广泛接受,利用免疫磁性分离方法(MACS)可从骨髓细胞中分离出CD34~+β_2m~-CD90~+细胞。...  (本文共84页) 本文目录 | 阅读全文>>