分享到:

Bcl-xl基因在膀胱癌中表达与RNA干扰的实验研究

膀胱肿瘤是泌尿外科最常见的恶性肿瘤,其临床特点主要是高发病率、高复发率和低度恶性。目前认为膀胱肿瘤是一基因病,由多通路及多靶位调控,但其确切病因、发病机制及复发机制不清楚。近年来有关膀胱肿瘤发病的分子机制一直是研究的热点,其中包括基因突变、原癌基因激活、抑癌基因失活及凋亡失衡等多种发病机制。凋亡即细胞的程序性死亡,其调节机制的紊乱将导致肿瘤的发生。研究表明,肿瘤细胞凋亡的减少与肿瘤的发生、发展的密切相关。并且使细胞耐受放疗、化疗的刺激。因而,诱导肿瘤细胞凋亡成为了一种新的杀伤肿瘤细胞的治疗策略。Bcl-xl作为一种抗凋亡蛋白基因,可保护细胞免于病毒、氧化剂等刺激诱导的细胞凋亡。Bcl-xl蛋白的高表达是肿瘤发生和产生耐药性的重要原因之一。因此,利用RNA干扰技术,通过抑制Bcl-xl蛋白基因的表达,达到促进肿瘤细胞凋亡的目的,是目前正积极探索的一条新的肿瘤治疗途径。Bcl-xl属Bcl-2抗凋亡家族成员,其在多数恶性肿瘤组织中表  (本文共71页) 本文目录 | 阅读全文>>

重庆医科大学
重庆医科大学

Dnmt1基因shRNA干扰重组体介导的胃癌基因治疗

DNA甲基转移酶(DNA methyltransferase,dnmt)基因主要参与DNA甲基化过程(在基因组 DNA 胞嘧啶上添加甲基基团的过程),其中DNMT1 在成人细胞基因组 DNA 甲基化维护中有着举足轻重的作用。正常组织细胞中,广泛表达的基因启动子区域 CpG 岛常处于非甲基化状态;肿瘤细胞中,这些 CpG 岛常变为甲基化状态,其相关基因的表达亦被关闭。这一观点在对许多基因的研究中也得到了证实,如:肿瘤抑制基因、细胞周期凋亡调节基因、DNA 修复基因、激素受体基因和抑制血管形成基因等。由此可见,DNA 甲基化和肿瘤形成有着密不可分得关系。 RNA 干扰(RNA interfering,RNAi)技术是最近广泛用于抑制基因表达的新技术,主要用于基因功能和基因治疗学等方面的研究。本课题应用 RNAi 技术,研究在人胃癌细胞株 AGS 中转染靶向 dnmt1 基因的 RNAi 重组体后 dnmt1 基因转录水平和 DNMT...  (本文共98页) 本文目录 | 阅读全文>>

武汉大学
武汉大学

成对盒基因Pax9的亚细胞定位及对细胞生物学行为的调控研究

本研究的目的在于探讨成对盒基因Pax9的功能,实验从Pax9的亚细胞定位入手研究了Pax9表达改变对细胞生物学行为的影响及可能调控机制。实验以PCR-重组的方法构建了GFP-Pax9融合蛋白真核表达载体pEGFP-Pax9(GenBank~(TM)检索号:DQ022572),重组质粒转染不同物种来源的哺乳动物细胞CHO、Cos7后在核酸水平(RT-PCR)和蛋白质水平(Western Blot和免疫组织化学)检测细胞与亚细胞水平Pax9的表达,证实了GFP-Pax9融合蛋白的形成;研究用直接荧光(GFP-Pax9融合蛋白)和间接荧光(荧光标记Pax9抗体)两种方式明确标明Pax9在细胞中的作用位置为细胞核;以不同物种来源的细胞进行研究未发现差异结果表明Pax9的作用极为保守。在不表达Pax9的细胞系Cos7中瞬时表达Pax9,以CellTiter 96~(?)Aqueous one solution cell prol ifer...  (本文共151页) 本文目录 | 阅读全文>>

中南大学
中南大学

宫颈癌PEI-磁性纳米粒E1A基因放化疗增敏及其相关作用机制的实验研究

目的 探讨PEI-Fe_3O_4纳米粒基因载体的转运活性、E1A基因对人宫颈癌细胞生长的抑制作用和对放化疗的增敏作用及其相关的作用机制,为宫颈癌E1A基因治疗的可行性提供实验依据。方法 ①E1A基因经PEI-Fe_3O_4纳米粒介导转染人宫颈癌细胞(Hela细胞),通过细胞计数法测绘生长曲线、计算倍增时间和软琼脂集落形成数目,观察E1A基因对该细胞体外增殖的影响。②用顺铂、5-氟尿嘧啶和紫杉醇处理细胞,观察E1A基因对顺铂、5-氟尿嘧啶和紫杉醇等化疗药物敏感性的影响。③将未经转染的Hela细胞、转染空载体纳米粒的Hela细胞(Hela-vect)及转染E1A基因的Hela细胞(Hela-E1A),分别给予0、2、4、6、8、10Gy的6MV-X线照射,通过测绘细胞存活曲线,观察E1A基因对宫颈癌细胞放射敏感性的影响。④通过裸鼠致癌实验,观察了E1A基因对裸鼠移植癌生长的抑制作用。通过模拟E1A基因治疗的裸鼠实验,观察E1A基因对...  (本文共90页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国医科大学
中国医科大学

异常甲基化灭活的胃癌转移抑制相关基因的研究

前言近年来,早期胃癌术后5年生存率已有了很大提高。但进展期胃癌的术后5年生存率却一直没有得到进一步提高,其原因主要是由于进展期胃癌术后转移和复发。胃癌的转移是一个复杂的病理生理过程,目前虽作了大量的研究,但仍没有明确其机制。总的来说,胃癌转移在遗传因素层面上是由于一些转移抑制相关基因的突变和缺失所造成的,而在表遗传因素层面则是由于转移抑制基因的低表达所造成的。而造成这些基因低表达的众多因素中,基因的高甲基化是一个重要机制。CpG岛甲基化的基因组多伴有此区域的基因失活,反之则多伴有此区域基因的活跃表达。胃癌相关的一些转移抑制基因转录调控区CpG岛的异常高甲基化,致使这些基因转录沉默,从而促进了胃癌的转移。以往甲基化分析方法大都只能分析一种已知基因的甲基化状况,不能研究整个基因组中甲基化的情况。甲基化CpG岛扩增(MCA)结合代表性差异显示分析(RDA)技术,可以较为全面地分析整个基因组的甲基化状况,特别是对未知甲基化基因片段的检测...  (本文共71页) 本文目录 | 阅读全文>>

吉林大学
吉林大学

腺病毒5型E1A基因绿色荧光蛋白真核表达载体的构建及其对大肠癌治疗作用的研究

大肠癌是我国常见的恶性肿瘤之一,常用的手术、化疗、放疗等传统的治疗方式均未能使其疗效得到明显的提高。自九十年代以来,肿瘤基因治疗已成为最引人瞩目的研究领域,是继手术、放疗、化疗、免疫治疗之后的第5种模式。人类腺病毒5型E1A基因(Ad5.E1A)是近年来新发现的一个抑癌基因。它能双向调控多种基因的表达,通过依赖及非依赖p53的途径诱导细胞程序化死亡,调控细胞周期,使细胞滞留在G1及G2期。ElA蛋白是多功能转录因子,它能从正、负两种途径调控多种基因的转录。目前,E1A基因抗肿瘤作用的研究,对大肠癌作为对象研究的较少。本研究通过构建真核表达质粒pEGFP-E1A,脂质体介导转染大肠癌细胞系LoVo细胞,经G418筛选获得稳定表达ElA基因的转染细胞LoVo-ElA,在体外探讨了ElA基因对大肠癌细胞系LoVo细胞体外生长的抑制作用和化疗增敏作用,对比LoVo-E1A、LoVo-vect、LoVo细胞在生长速度、倍增时间、软琼脂集落...  (本文共125页) 本文目录 | 阅读全文>>