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小鼠角膜创伤修复的分子机制

目的:创建小鼠角膜创伤修复的动物模型;研究小鼠角膜创伤修复过程中基因表达谱的变迁;观察细胞增殖和纤维化调节因子在创伤修复早期的动态变化。方法:1.创建动物模型以三种创伤方式制作小鼠角膜穿通伤动物模型,临床评分确定重复性高,再现性好的动物模型。行HE染色和免疫组化评价角膜创伤修复的过程。2.应用基因表达芯片研究小鼠角膜创伤修复过程中基因表达谱的变迁收集伤后3d和14d的小鼠角膜,分别与正常角膜进行芯片杂交。读取数据后,分析差异表达基因的表达谱和特点。3.观察细胞增殖和纤维化调节因子在小鼠角膜创伤修复早期的动态变化收集正常时及伤后6h,24h,72h的小鼠角膜,行RT-PCR,观察TGF-β2、CTGF、G0/G1开关基因2的变化,该实验同时是对基因芯片数据的验证。结果:1.三种创伤方式中三棱针角膜中央穿刺是重复性和再现性最好。2.角膜创伤后3d和15d差异性表达基因共297个,以下调基因为主。细胞骨架/细胞外基质是主要的差异性表达  (本文共69页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国医科大学
中国医科大学

小鼠角膜上皮细胞的长期培养及组织工程化角膜上皮构建

角膜上皮细胞为可快速再生的复层扁平上皮,角膜上皮的稳态对于维持眼表的完整性以及正常的视功能具有重要意义,而拥有强大增生潜力的上皮祖细胞(包括角膜缘上皮干细胞及瞬时扩增细胞)对于维持角膜上皮的稳态起着关键性作用。Schofield等首次提出了干细胞龛的概念,假设角膜缘局部微环境中的内源性和外源性因子可以调控角膜上皮干细胞,从而促进细胞增生、并抑制其终末分化。关于角膜上皮干细胞和干细胞龛的研究已成为眼科学的热点研究领域。目前,人及兔角膜上皮细胞的培养方法已比较成熟完善,但小鼠角膜上皮细胞的培养仍为世界性难题。迄今为止,仅Hazlett等曾使用组织块培养法培养小鼠角膜上皮细胞,但仅可传至第3代,有限的生命周期、不足的细胞产量、以及迅速的细胞分化,在很大程度上阻碍了该方法在实际研究中的应用。除Hazlett外,仅最近Kawakita等采用悬浮细胞培养法成功建立一小鼠角膜上皮细胞系,但他们使用了超过200只鼠眼。据我们所知,目前仅有的两种...  (本文共77页) 本文目录 | 阅读全文>>

郑州大学
郑州大学

小鼠神经营养性角膜炎的初步研究

目的建立小鼠三叉神经损伤的动物模型,模拟神经营养性角膜炎的发病过程和转归;观察去三叉神经小鼠角膜的临床改变和修复过程;探讨去神经支配对小鼠角膜神经密度、角膜上皮完整性和功能的影响。材料与方法选取成年雄性C57BL/6小鼠70只,按随机数字表分为正常对照组、Id、3d、1w、2w、3w、4w,共7组,每组各10只小鼠。选取左侧为实验侧,无水乙醇法去除小鼠左侧三叉神经第一支眼神经。分别对正常对照组和不同时间点的实验组进行泪液分泌实验检查、角膜荧光素染色检查和活体共焦显微镜检查,采集照片并记录结果。然后,过量戊巴比妥钠腹腔注射处死小鼠,分别取小鼠左侧角膜和颅内三叉神经眼支。小鼠角膜神经采用Tubulinβ-Ⅲ抗体标记,离体共聚焦显微镜观察,拍摄并保存图片;三叉神经采用丽春红—亮绿法染色,免疫荧光显微镜下观察,拍摄并保存图片。对所得的结果和图片进行统计和分析。结果1.小鼠角膜荧光素染色并裂隙灯显微镜下钴蓝光观察显示,损毁三叉神经后小鼠角...  (本文共71页) 本文目录 | 阅读全文>>

南方医科大学
南方医科大学

普萘洛尔对小鼠角膜碱烧伤模型中新生血管抑制作用的实验研究

研究背景:p-肾上腺素受体阻滞剂(p-受体阻滞剂)自1960年代以来广泛应用于以心血管疾病为主的临床医学各领域。在眼科方面,其家族中噻吗心安等亦普遍应用于青光眼疾病的治疗。近年来,非选择性p-受体阻滞剂普萘洛尔被证实对血管内皮细胞具有明显的抑制作用,并且可以进一步下调VEGF、bFGF等与血管瘤生成密切相关的血管生成因子,因此在血管瘤的临床治疗方面获得了有效地推广,有望取代传统的治疗方法成为一线药物。随后,有报道将普萘洛尔抑制新生血管以治疗血管瘤的作用运用于小鼠高氧诱导早产儿视网膜病变模型中新生血管的治疗,亦达到了一定的抑制作用。正常角膜无血管、无淋巴管的特性,是维持其透明度及免疫赦免的必要条件。当感染、外伤、免疫反应等病理因素破坏这一无血管的平衡状态时,新生血管便会从角膜缘血管网侵入角膜,破坏角膜微环境,导致其正常结构和功能的受损,严重情况下甚至造成视功能丧失。角膜新生血管作为最常见的致盲原因之一,及角膜移植术后发生排斥反应的...  (本文共102页) 本文目录 | 阅读全文>>

浙江大学
浙江大学

生物信息学筛选的合成小肽抑制VEGF诱导小鼠角膜新生血管实验研究

血管新生,即在预先存在的血管中长出新生毛细血管的过程。它是多种致盲性新生血管性眼病的共同病理生理基础。血管新生严格地受到促血管因子和抑血管因子平衡的调控。这种平衡的打破,能够促发血管新生的细胞转导信号,引起血管内皮细胞的增生、迁移和存活,从而导致病理性的血管新生。血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),作为复杂的血管新生瀑布反应的中心介质和强大的通透性因子,是迄今为止唯一被证实仅对内皮细胞特异性作用的促血管因子,并在血管形成中发挥关键作用。Kringle结构域是一种由约80个氨基酸组成的保守结构,包含三对二硫键,是行使生物学功能的独立折叠单元。现已证实,Kringle结构域存在于包括生长因子、蛋白酶和凝血因子等多种不同功能的蛋白质,如纤溶酶原中。Kringle结构域被认为是首个特异性抑制血管生长的保守结构的组成部分,许多Kringle结构域能够抑制血管新生,如纤溶酶...  (本文共80页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国人民解放军军医进修学院
中国人民解放军军医进修学院

小分子化合物J2抑制小鼠角膜移植排斥反应的实验研究

目的:研究同种异基因小鼠角膜移植后植片的生存时间及J2的抗角膜排斥反应的作用;研究J2对正常小鼠及同种异基因角膜移植小鼠的免疫系统的影响,从而探讨新型药物J2对于角膜移植排斥反应的作用机制。方法:1.建立以C57BL/6小鼠为供体,BALB/c小鼠为受体的角膜移植实验模型,随机分为A、B、C、D四组,每组16只。A组为BALB/c小鼠自体原位角膜移植,B、C、D组均采用C57BL/6-BALB/c同种异体角膜移植,术后采用腹腔注射给药,自手术当日开始,A组、B组给予安慰剂,C组给予CsA10mg/kg,D组给予J215mg/kg,每天1次,连续给药12d。观察各组植片生存指数变化,腿染色及冰冻切片免疫组化观察角膜植片病理改变。2.BALB/c小鼠随机分为3组,并分别以安慰剂、CsA、J2连续腹腔注射12d。取脾细胞分别给予ConA和抗CD3mAb刺激细胞增殖,采用ELISA法测定细胞上清中IL-2、IFN-γ、IL-4及IL-1...  (本文共99页) 本文目录 | 阅读全文>>