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人β_2防御素的重组表达、纯化与活性分析及其mRNA在牙龈上皮的表达

应用基因工程技术重组表达人β-防御素2(HBD-2),并检测了牙龈上皮细胞中HBD-2 mRNA的表达。建立了从获得基因、载体构建,到表达优化,直至产物分离纯化、生物活性测定等整套工艺。本研究的主要创新之处在于构建了TrxA、His?Tag、肠激酶和HBD-2融合蛋白表达,使对宿主有危害的表达产物在细胞内作用被掩蔽而得以表达,同时使得纯化蛋白的程序减少,提高目的蛋白的回收率,在国内尚未见到与本研究相同的报道。HBD-2在慢性牙周炎牙龈上皮中的表达,证实HBD-2在牙龈组织中既有固有表达又有诱导性表达,可以其双重作用来辅助传统抗生素预防和治疗口腔微生物感染。由于防御素具有高效、广谱的抗微生物活性和潜在的抗肿瘤活性等,可望作为一类新型的多肽抗生素在临床上应用。  (本文共108页) 本文目录 | 阅读全文>>

吉林大学
吉林大学

防御素Defcr4和Mcp-1基因在牛乳腺中表达的研究

哺乳动物防御素是近年来发现的广泛存在于哺乳动物体内的一类阳离子多肽,不仅具有广谱抗微生物作用,而且还能杀伤多种肿瘤细胞,其潜在的药用价值巨大。本研究利用基因工程原理及现代分子生物学实验技术,通过合成和反转录分别克隆了鼠小肠隐窝防御素Defcr4 cDNA 和兔巨噬细胞防御素Mcp-1 cDNA,构建了防御素牛乳腺特异性表达载体pBC1-neo-Defcr4 和pBC1-neo-Mcp-1,并分别在牛乳腺中进行了表达实验。结果显示pBC1-neo-Defcr4 质粒在牛乳腺中得到正确表达,经反相高效液相色谱法分离,在牛乳汁中纯化出具有抗菌活性的Defcr4,并经质谱分析确认其分子量与理论值相符。证明本实验构建的牛乳腺特异性表达载体pBC1-neo-Defcr4 是合理有效的,为进一步构建防御素牛乳腺生物反应器和防御素的研究与应用奠定了基础。  (本文共136页) 本文目录 | 阅读全文>>

第四军医大学
第四军医大学

防御素的制备及其抗胃癌的体内外实验研究

胃癌不仅是消化道最常见的恶性肿瘤,而且也是我国恶性肿瘤中致死人数最多者。除了手术及放疗外,化疗是公认的三大疗法之一,但是由于缺乏对肿瘤的选择性,其疗效有限。导向治疗虽然克服了这一问题,但是由于存在耐药与多药耐药机制,所以作为“弹头”的化疗药物,其杀伤效果也不令人满意。因此,必须寻找新的、有效的抗癌毒素及药物(弹头)。防御素(defensins)是指富含于哺乳动物吞噬细胞中的一组同源肽类,包括人中性粒细胞多肽(human neutrophil peptides,HNP),具有细胞毒活性。如果选用这种细胞毒因子作为杀伤肿瘤的“弹头”,再加上特异的载体,对于肿瘤的治疗可能具有重要意义。本研究进行防御素对胃癌杀伤的体内外实验,为进一步将其引入肿瘤的治疗奠定基础。主要内容包括:1.HNP的制备应用细胞分离技术,从人外周静脉血中分离、纯化出中性粒细胞,然后应用蛋白质制备技术提取HNP,再用液相色谱法进行纯化并对其进行鉴定。结果表明,制备的H...  (本文共133页) 本文目录 | 阅读全文>>

四川大学
四川大学

防御素在炎症性肠病发病机制中的作用及其分子机制研究

目的炎症性肠病(IBD)的发病机制涉及遗传、环境、免疫反应等,但真正的致病元凶尚不清楚。肠粘膜可直接产生免疫效应分子对抗肠腔内微生物,或通过信号传导启动粘膜获得性免疫反应,介导直接的粘膜保护反应。防御素是一类非常重要的免疫效应分子。β防御素-2诱导性表达于上皮细胞,发挥抗微生物活性。以往研究发现UC患者结肠粘膜β防御素-2表达增强,但其确切意义尚无合理解释。本课题利用恶唑酮小鼠结肠炎模型研究结肠粘膜组织中β防御素-2与促炎症细胞因子TNF-α、IL-1β的表达以及相互关系,探讨β防御素-2表达的调控机制,旨在探索结肠炎炎症反应扩大的原因,为今后治疗干预炎症反应提供理论依据。材料与方法1.建立小鼠恶唑酮结肠炎模型,进行大体和组织病理学评价将6-8周龄Balb/c小鼠分为两组:A组(空白对照组,n=8):3%恶  (本文共163页) 本文目录 | 阅读全文>>

四川大学
四川大学

Beta防御素2抗肿瘤作用实验研究

目的:防御素是天然免疫的重要分子,Beta防御素2是防御素家族的重要成员,在天然免疫和获得性免疫中具有桥梁作用。本课题利用Beta防御素2促进主动免疫产生的能力,对其在肿瘤治疗中的作用进行研究。方法:从BALB/c小鼠肾脏中提取RNA,RT-PCR得到小鼠beta防御素2片断(MBD2,murine beta defensin 2)。构建beta防御素2的Lentivirus病毒载体。用所得病毒感染间充质干细胞(MSC,mesenchymal stem cell)和CT26肿瘤细胞,经筛选得到稳定表达小鼠beta防御素2的间充质干细胞(MBD2-MSC)、CT26肿瘤细胞。趋化实验研究beta防御素2对树突状细胞的作用。观察表达小鼠beta防御素2的CT26肿瘤细胞皮下成瘤情况以及生存情况。以表达小鼠beta防御素2的间充质干细胞瘤内注射,治疗小鼠皮下MethA肿瘤;腹腔注射治疗MethA肿瘤恶性腹水。构建beta防御素2融合V...  (本文共70页) 本文目录 | 阅读全文>>

北京协和医学院
北京协和医学院

基于宿主防御素基因表达谱判别细菌病毒感染的研究

感染是指病毒、细菌、真菌或寄生虫等病原体侵入宿主所引起的局部组织或全身性炎症反应。临床上不同类型的病原体感染可以针对性的采用不同的治疗策略,如细菌感染可以给予抗生素治疗、真菌感染可以给予抗真菌药物治疗等。因此,准确的病原体感染类型的判别对于感染性疾病的临床治疗具有重要意义。尽管传统的基于形态学、免疫学、分子生物学等的病原体检测方法已经在临床感染类型的判别方面得到广泛应用,近年来基于宿主基因表达谱并利用机器学习方法发现区分不同类型病原体感染的生物标记物从而区分感染类型的研究成为一个新兴的发展方向。这类基于生物信息学的间接诊断方法可以为传统的直接检测手段提供辅助和补充。防御素是有助于宿主防御细菌、真菌和病毒感染的内源性抗微生物多肽。不同的防御素已被证实在先天免疫中对宿主抵御细菌或病毒的感染发挥着重要作用。因此,本研究尝试通过分析防御素及其相关基因在感染过程中的表达来区分病毒感染和细菌感染。首先,我们在国际基因表达数据库(GEO)中筛...  (本文共71页) 本文目录 | 阅读全文>>