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乙型肝炎病毒对细胞色素P450同工酶3A4表达的影响

目的 探讨慢性HBV感染对人肝脏CYP3A4的影响,同时在细胞和分子水平对临床研究结果进行机制研究。方法 收集慢性HBV感染患者和正常人的肝组织标本,用HPLC方法检测CYP3A4代谢活性。以Western印迹法测定CYP3A4蛋白的表达差异。选取1a,25-(OH)_2D_3为诱导剂,观察其在mRNA和蛋白水平对HepG2细胞CYP3A4的诱导,并瞬时转染pcDNA_3-X质粒,观察HBx对诱导的影响。结果 慢性HBV感染组CYP3A4酶蛋白代谢活性和蛋白表达均低于正常组(P<0.05)。1a,25-(OH)_2D_3作为诱导剂可在mRNA和蛋白水平对HepG2细胞CYP3A4表达有较好的诱导作用,HBx干扰1a,25-(OH)_2D_3对HepG2细胞CYP3A4的诱导。结论 慢性HBV感染可降低肝组织中CYP3A4的酶蛋白表达和酶活性,对CYP3A4活性的影响不涉及Km;HBx可抑制CYP3A4表达调控。  (本文共92页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国人民解放军军事医学科学院
中国人民解放军军事医学科学院

乙型肝炎病毒e抗原相互作用蛋白基因的克隆化及功能的初步研究

乙型肝炎病毒(HBV)感染致肝细胞损伤的机制,与病毒蛋白和肝细胞蛋白间的相互作用密切相关。而乙型肝炎e抗原(HBeAg)是由HBV DNA前-C基因区编码的一种非颗粒性的分泌蛋白,随HBV复制而增加,临床上将其作为判断HBV活动性复制的指标之一。因此研究HBeAg与肝细胞内蛋白的相互作用及其机理,能在一定程度上对HBV的致病机制做出解释,并为寻找有效防治方法提供新线索。酵母双杂交技术是一种研究蛋白-蛋白间相互作用的比较快速、可靠并可大规模筛选的方法。本实验所采用酵母双杂交系统-3,基于两种单倍体酵母a和α型可以配合形成二倍体,而其中表达的外源蛋白仍能相互作用的机理,免去了低效率文库质粒与诱饵质粒共转染的问题,大大提高了杂交效率;在原技术基础上增加了3个报告基因,降低了假阳性率。我们利用该技术,根据中国HBV流行株序列设计引物,应用多聚酶链反应(PCR)技术,由乙型肝炎患者血清中分离出HBeAg编码基因序列。经测序鉴定正确后,克隆...  (本文共95页) 本文目录 | 阅读全文>>

吉林大学
吉林大学

应用RNAi抑制乙型肝炎病毒复制和表达的研究

乙型肝炎病毒(HBV)感染是急慢性肝炎的主要原因,并与肝纤维化和肝细胞癌的发生密切相关。全世界约有3.5亿人感染该病毒,其中近15-25%的病人将死于该病的并发症。乙肝重组疫苗的推广使用使乙肝免疫预防取得重大突破,但治疗上仍缺乏理想的抗病毒药物。在乙型肝炎基因治疗的探索中,应用反义寡核苷酸、核酶以及脱氧核酶(DNAzyme)的技术研究屡见报导,但各自存在较多问题有待解决。HBV的基因组是一个带有部分单链区的环状双链DNA(dsDNA)分子,具有逆转录病毒的特性,其3.5kb前基因组RNA既是DNA合成的模板,又是指导蛋白质合成的模板。HBV基因组高度重叠,因而针对HBV某一靶位点切割病毒的mRNA和前基因组RNA,可以有效阻断病毒蛋白质合成。RNA干涉(RNAi)是一种由双链RNA(dsRNA)引发的序列特异性基因沉默机制。在这一转录后基因沉默(PTGS)过程中,与双链RNA有同源序列的单链RNA(如mRNA)被降解,从而阻断基...  (本文共115页) 本文目录 | 阅读全文>>

复旦大学
复旦大学

á干扰素诱导的细胞蛋白与乙型肝炎病毒相互作用关系的研究

病毒性乙型肝炎已经成为一个全球性的严重的公共卫生问题。α干扰素(IFN-α)已被证实对治疗乙型肝炎有效,然而持续有效的治疗效果只在1/3的乙型肝炎病人中出现。有关IFN-α的作用机制,目前还未完全清楚。由于对基因认识能力和系统的研究工具的缺乏,乙型肝炎病毒(HBV)感染后,宿主细胞抗病毒效应的产生、作用机制以及与病毒复制表达的关系仍不清楚,甚至HBV在体内复制的机制也未能完全明了。为了研究HBV感染和IFN-α作用下宿主细胞基因表达的改变、了解HBV病毒复制和宿主抗病毒机制之间相互作用关系、探讨在IFN-α作用下,宿主细胞基因表达抑制HBV复制的作用机理,本研究借助一个点有14,000个人类基因的cDNA微点阵膜来研究有HBV复制的HepG22.2.15细胞和其来源母细胞HepG2细胞在IFN-α(5×103IU/ml)处理前及处理后6小时、24小时和48小时的细胞基因表达谱的改变情况。使用ArrayGauge软件对杂交和扫描后...  (本文共77页) 本文目录 | 阅读全文>>

第二军医大学
第二军医大学

乙型肝炎病毒X蛋白羧基端缺失突变体对肝癌细胞生物学行为的影响及其机制的研究

研究证实乙型肝炎病毒X基因通过突变修饰其蛋白的生物学功能,在HBV感染相关HCC发生发展中起重要作用,其中进一步的基因调控知之甚少。本研究采用了免疫组化、PCR扩增直接测序的方法,证实HCC癌组织中HBx的状态是以其蛋白的高表达和羧基端缺失突变为主;为此构建了HBx羧基端缺失突变质粒,观察其对转染肝癌细胞的生物学活性影响,证实HBx羧基端不同区域的功能具有明显的差异在细胞的增殖和侵袭方面;利用蛋白印迹的方法,证实这种差异涉及p53信号途径;通过cDNA芯片和双向凝胶电泳技术的运用,首次对HBx突变体从基因和蛋白质组水平进行研究,初步探讨了HBx羧基端30aa和40aa缺失导致HCC细胞生物学改变的分子基础和差异基因与蛋白质的表达,为进一步阐明HBx的致癌机制具有重要的理论意义。  (本文共122页) 本文目录 | 阅读全文>>

山东大学
山东大学

HBV感染HepG2细胞早期过程研究

研究背景和目的慢性乙型肝炎是全球性的重大健康问题。约15%-20%存在病毒活跃复制的慢乙肝患者,在5年内发生肝硬化;慢性乙肝患者罹患原发性肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)的相对危险性至少增加100-300倍。乙型肝炎的病原体—乙型肝炎病毒(HBV)属于嗜肝DNA病毒(Hepadnaviridae),具有较严格的宿主特异性和组织嗜性,其仅感染人类和某些高级灵长类动物,而肝细胞是目前唯一证实的HBV体内复制场所。由于缺乏理想的HBV体外感染模型和小动物模型,因此限制了HBV相关的分子生物学、致病机理及治疗药物等多方面的研究。目前许多嗜肝DNA病毒的研究成果均来自于鸭乙型肝炎病毒(DHBV)及土拨鼠肝炎病毒(WHV),由于HBV与上述两种病毒间仍存在较大的差异,所以有些已知的研究结论可能并不适用于HBV。因此迫切需要建立支持HBV自然感染的实验模型。HepG2等肝肿瘤细胞株经常用于HBV体外实验,这...  (本文共81页) 本文目录 | 阅读全文>>