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脐带血干/祖细胞的体外扩增及扩增后干/祖细胞生物学特性的研究

干细胞(HSC)移植是治疗白血病和淋巴瘤等恶性肿瘤、代谢性和严重自身免疫性疾病及先天性免疫缺陷等严重危害人类健康疾病的最有效方法之一。脐带血(UCB)是继骨髓(BM)和动员外周血(MPB)之后又一HSC的来源,我们国家由于计划生育的实行和经济文化等原因,短时间内组织大规模无关供者骨髓库比较困难,因此我国UCB在HSC移植中具有尤为广泛的发展前景。UCB具有很高的增殖和扩增潜能等诸多优点,但是单份标本所含的细胞数有限,这大大限制了其在临床的广泛应用。体外扩增是解决UCB这一缺陷的重要方法,因而优化UCB造血干/祖细胞(HSPCs)的体外扩增方案极为迫切。体外扩增的HSPCs是否具有临床应用价值取决于两个方面:其一,细胞保持增殖和自我更新的能力;其二,细胞保持向BM微环境归巢功能的完整。许多扩增方案研究的重点是保持UCB原始细胞的增殖和自我更新能力,而进一步动态观察UCB HSPC在扩增过程中归巢相关功能的研究则鲜有报道。本实验室建  (本文共122页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国协和医科大学
中国协和医科大学

基质细胞衍生因子-1和血小板第4因子对脐带血干/祖细胞体外扩增及归巢相关功能的影响研究

造血干细胞移植是治疗白血病和淋巴瘤等恶性肿瘤、代谢性疾病、自身免疫性疾病及先天免疫缺陷等严重危害人类健康疾病的最有效治疗方法之一。脐带血(UCB)是继骨髓和动员外周血之后的另一种重要造血干细胞来源,它的优点是来源充足、具有很高的增殖和扩增潜能、采集不影响供者、受CMV和Epstein-Barr病毒污染机会小、移植后急慢性GVHD发生率低于成年供者的骨髓移植、可以建立脐血库随时提供移植所需要的HLA相合的干细胞。尽管UCB具有诸多优点,但是由于一份脐血所含的细胞数有限,这大大限制了其在临床的广泛应用。体外扩增是解决UCB这一缺陷的重要方法,因而优化UCB造血干/祖细胞(HSPCs)的体外扩增方案极为迫切。体外扩增的HSPCs是否具有临床应用价值取决于两个方面:一、细胞保持增殖和自我更新的能力;二、细胞保持归巢骨髓造血微环境的能力。许多扩增方案研究的重点是保持UCB HSPCs的增殖和自我更新能力,而进一步动态观察UCB HSPCs...  (本文共91页) 本文目录 | 阅读全文>>

第四军医大学
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HIV-1 GAG基因片段的体外扩增、克隆和表达及表达产物的纯化和鉴定

艾滋病(AIDS)是本世纪末肆虐人类的一种严重传染病,已确定其病原为人免疫缺陷病毒(HIV)。对于艾滋病,目前尚无有效的治疗药物,因此,研究HIV疫苗对于AIDS的预防和治疗具有重要意义。HIV-1 gag P17/P18和P24/P25是具有潜力的HIV候选疫苗,英国政府批准进入人体试验的两种艾滋病疫苗,一个是P24-VLP,另一个是P17/P18蛋白上的一段多肽HGP30。本文应用体外扩增技术定向克隆和表达以HPG30序列为中心的一段包括大部分P18和小部分P25的多肽(P20蛋白),对于研制新的HIV疫苗具有一定的意义。为开展HIV分子生物学研究工作,我们于88年从美国引入一株HIV-1病毒ARV-2的全基因组克隆。为便于工作,本文将ARV-2基因组  (本文共122页) 本文目录 | 阅读全文>>

第四军医大学
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抗人CD3单抗重、轻链可变区基因的体外扩增、克隆和序列分析

鼠源性单克隆抗体由于具有免疫原性不能在人体反复应用,而人源性单抗的制备还存在许多困难,如不太稳定,抗体产生水平低等,再者目前所制奋的人源性单抗多为IgM类,不太适合应用。利用基因工程技术可根据人们的需要制备各种类型的新型抗体。抗体可变区基因的分离是研制基因工程抗体的关键步骤之一,体外扩增(PCR)是获得抗体可变区基因的一种最简便、最迅速的方法。在进行PCR之前,必须首先设计和合成引物,在被扩增序列不完全清楚的情况下,引物的设计工作尤其显得重要。CD3分子分布于成熟T淋巴细胞表面,它与T细胞抗原受体紧密结合,形成T细胞抗原受体复合物,T细胞受体识别和结合抗原后,刺激信号通过CD3分子传递,CD3抗体可诱导T淋巴细胞活化。最近一些实验结果表明,抗CD3-抗肿瘤的双特异抗体(BIAB)可将细胞毒性T淋巴细胞(CTL)导向肿瘤细胞,从而有效地杀伤肿瘤细胞。用基因工程方法制备的BIAB更有利于在人体应用。首先,我们比较了人和鼠胚系抗体可变...  (本文共75页) 本文目录 | 阅读全文>>

南方医科大学
南方医科大学

人脐动脉内皮细胞用于造血干/祖细胞体外扩增及获得其新型种子细胞的实验研究

脐带血(UCB)作为造血干细胞移植(HTC)的来源具有众多优势,然而HTC临床应用存在的首要问题是造血干细胞(HSCs)数量不足。最直接便捷的解决方式就是对HSCs进行体外扩增。HSCs最早出现在大的动脉中,如卵黄动脉、脐动脉,分娩后脐带中仍然有大量HSCs存在,这其中极有可能蕴涵着维持HSCs干性的重要因素。在AGM区、骨髓等位点均已证实内皮细胞(ECs)是造血微环境的重要核心组份,分泌多种造血相关因子,此外,ECs还与HSCs同起源于生血内皮(HE),共表达许多表面标志和转录因子。所以我们推测,脐动脉内皮细胞(HuAECs)有可能也是影响HSCs的重要微环境因素之一,能够支持HSCs体外扩增。通过诱导性多能干细胞(iPSC)体外诱导产生HSCs是解决问题的另一种途径。利用重编程过程中的表观记忆特性,以与HSCs发育密切相关的细胞为起始,所获得的iPSC可能更倾向于向HSCs分化。AGM区的背主动脉腹侧壁是最早确认的发生永久造...  (本文共114页) 本文目录 | 阅读全文>>

安徽医科大学
安徽医科大学

γδ T细胞体外扩增工艺的建立及其抗肿瘤特性研究

目的γδ T细胞发挥杀伤活性时不需要特异性抗原的刺激,无主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)限制性,具有较好的抗肿瘤活性和多种生物学功能,是肿瘤细胞免疫治疗强有力的工具。有研究表明,利用体外扩增的γδ T细胞治疗多种实体瘤取得了较好的治疗效果,但使用不同方法扩增的γδ T细胞抗肿瘤活性存在较大差异,直接影响其临床治疗效果。因此,建立和优化γδ T细胞体外培养方法,获得可用于临床治疗的、高抗肿瘤活性的γδ T细胞具有重要意义。本研究将建立并优化外周血γδ T细胞体外扩增方法,评价扩增后γδ T细胞的体内外抗肿瘤活性及其安全性。方法1)收集10份健康志愿者外周血标本进行外周血单个核细胞分离。2)利用GT-T551H3培养基,添加植物血凝素(phytohaemagglutinin,PHA)、唑来膦酸、白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)和白细胞介素-7(int...  (本文共47页) 本文目录 | 阅读全文>>