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由Egr-1基因启动子调控TK自杀基因治疗胰腺癌的实验研究

1.携带Egr-1基因启动子调控TK基因的腺病毒载体的构建目的 建立由放射线激活转录的早期生长反应基因-1(early growthresponse-1,Egr-1)基因启动子驱动的含单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(herpes simplex virus thymidine kinase gene,HSV-TK简称为TK)的自杀基因的重组腺病毒载体pAdEgr-1-TK,并用绿色荧光蛋白(greenfluorescent protein,GFP)做标志基因的腺病毒载体,达到通过荧光显微镜观察GFP的表达就能监测转染效率和病毒的产生。方法 以真核表达质粒PCl-neo-Egr-1-TK(pET)为模板,设计引物扩增Egr-1,上游引物引入XbaI酶切位点,下游引物引入XhoI酶切位点,扩增产物以1.0%的琼脂糖凝胶电泳分离并鉴定,获得长度为445bp的Egr-1基因片段,目的基因克隆入穿梭载体到pAdTrack,构建重组质粒pAdTr  (本文共138页) 本文目录 | 阅读全文>>

重庆医科大学
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mdr1基因在兔VX2肝癌化疗中骨髓保护及治疗作用的研究

目的:恶性肿瘤是目前严重威胁人类生命健康的常见病、多发病,已成为造成人类死亡的第二位疾病原因。恶性肿瘤的治疗以综合性治疗措施为主,包括手术、化疗、放疗、生物治疗、免疫治疗等。其中,化疗在根治恶性肿瘤,防止复发和转移方面起着不可替代的作用。但临床化疗中存在两大障碍影响化疗的疗效:一方面肿瘤细胞对化疗药物产生多药耐药性而直接导致化疗失败;另一方面化疗药物造成严重的骨髓抑制使化疗方案不能顺利实施而间接导致化疗失败。大量研究证实,影响化疗疗效的两大障碍均与多药耐药(multidrug resistance gene 1 mdr1)基因有着密切的关系。肿瘤细胞由于过度表达mdr1基因而产生多药耐药性,使其对化疗药物不敏感而不能被有效杀灭;骨髓细胞极低水平的表达mdr1基因而对化疗药物异常敏感,使其极易被化疗药物损伤。本研究通过分子生物学技术,用含人mdr1全长cDNA逆转录病毒载体转染新西兰大白兔骨髓单个核细胞,建立一套完整、稳定、高...  (本文共171页) 本文目录 | 阅读全文>>

第三军医大学
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放射启动MIP-3α基因激发机体抗肿瘤免疫应答的研究

肺癌是发病率高、预后差的恶性肿瘤之一,近年来,其发病率和病死率在我国呈上升趋势。以手术、化疗、放疗为主的综合治疗是肺癌的主要治疗方法,但疗效尚不理想,目前肺癌患者总的5年生存率仍低于15%。因此亟待寻找治疗肺癌的更为有效的手段。生物治疗是继手术、放疗及化疗之后兴起的一种新的治疗肺癌的方法,被认为是目前治疗肺癌极有前景的治疗手段。大量研究证明,有效的抗肿瘤细胞免疫反应的核心是产生CD8+的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T Lymphocyte,CTL)。利用CTL对肿瘤进行特异性杀伤,已经成为治疗恶性肿瘤的有力手段之一。现已明确,有效活化CTL反应关键是抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)能否将“第一信号”(抗原信号)和“第二信号”(共刺激信号)有效的传递给初始型T细胞。在所有的抗原递呈细胞中,功能最强大的则是树突状细胞(dendritic cell,DC),它表达高水平MHC分子、共刺...  (本文共109页) 本文目录 | 阅读全文>>

第三军医大学
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人TALL-1基因的克隆、表达和生物学活性研究

人类基因组计划将基因组学推向了生物医学研究的最前沿。基因组学研究的进展又将由之产生的新的生物技术推向了世界经济的前沿。在这个时代,基因组药物具有巨大的开发潜力。迄今为止至少有19个肿瘤坏死因子(TNF)超家族和29个肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族成员被发现,它们作为机体内产生的一类重要的细胞因子,在细胞增殖、分化、凋亡以及免疫反应、炎症等一系列生理和病理反应过程中均具有非常重要的调控作用。TALL-1(TNF and apoptosis ligand-related leukocyte-expressed ligand 1)又名BlyS、THANK、BAFF、zTNF4和TNFSF20,是1999年首次克隆成功的属于TNFSF一个新成员,在外周血单核细胞、淋巴结、脾脏和骨髓等组织中表达最丰富。人TALL-1基因全长编码285个氨基酸,是一个典型的Ⅱ型穿膜蛋白,其中部分胞外区片段(A134~L285)在某些蛋白酶的作用下发生水...  (本文共139页) 本文目录 | 阅读全文>>

第三军医大学
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p73基因在人肺癌中的表达及对其细胞生物学行为的影响

肺癌是目前人类因癌症死亡的最主要原因。虽然近年来化学治疗、放射治疗和外科治疗手段不断发展,但肺癌患者总的生存率仍然没有明显的改善,5年生存率不到15%。肺癌的发生和其他肿瘤一样,其实质是基因异常的结果,包括原癌基因的激活和抑癌基因的失活。探讨和阐明肺癌发生、发展的分子机理,为治疗肺癌开辟新的手段具有重要的意义。p53基因是一个经典的肿瘤抑制基因,是迄今发现的与人类肿瘤相关性最高的基因,与肺癌的关系尤为密切,在大约50%的非小细胞肺癌和70%的小细胞肺癌中有p53基因功能的丧失。国内外研究表明p53介导的细胞凋亡的丧失是细胞癌变的关键因素之一,多种肿瘤的基因治疗方案围绕如何提高肿瘤细胞中野生型p53的表达水平而进行。目前,应用病毒载体携带野生型p53基因治疗肺癌已成功应用于临床,p53基因治疗联合化疗取得了比传统化疗更好的临床效果。但是,某些肿瘤对外源的p53基因存在治疗抵抗,要弥补p53基因治疗的局限性就需要一类能不依赖于p53...  (本文共114页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国农业大学
中国农业大学

传染性喉气管炎病毒糖蛋白G基因的克隆、表达、蛋白功能研究以及缺失该基因病毒的重组

以纯化的传染性喉气管炎病毒(ILTV)北京E3株基因组为模板,通过PCR方法扩增了E3毒株的完整的糖蛋白G(gG)基因及其两侧的序列,包括部分UL47同源序列、完整的US4同源序列(gG基因)以及部分的ORF5序列,将其克隆到pGEM-T载体上,构建了pGEM-FgG质粒,并进行了测序。通过设计另外一对引物克隆了Zhonghai弱毒疫苗株的gG基因,并进行了测序,发现E3株与Zhonghai株的gG基因序列完全一致。与其它疱疹病毒的gG基因和推测的蛋白序列进行了的进化关系、蛋白同源序列比较发现gG蛋白在ILTV中高度保守,疱疹病毒gG蛋白都存在三个保守的半胱氨酸位点,并且三个位点之间间隔的氨基酸残基相同。等电点以及天然蛋白可能存在的修饰等方面的分析,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。利用两种大肠杆菌表达系统(pMAL-c2x(E. coli BT1)和pET-30a(+)(E. coli BL21)载体系统),对不含信号肽部分...  (本文共135页) 本文目录 | 阅读全文>>