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绵羊精子膜蛋白基因的表达研究

受精是精子与卵子相互结合而启动新生命发育的过程。随着科学技术的进步和研究方法的发展,人们对受精过程的认识日渐深入。精子膜是精子与外界发生联系的第一门户,它不仅是精子活动和新陈代谢的基础,也是获能和精卵融合等受精过程的基础,而且抗精子抗体对精子的主要影响也发生在质膜上。因此,精子膜蛋白一直是众多学者的研究热点。目前,已经分离得到与精子的受精功能直接相关的数种蛋白成分。由于研究的便利,许多膜蛋白首先从动物的精子膜上分离得到,并在人精子膜上也发现了同源蛋白,其相关抗体均能抑制人精子的受精能力,因此这些蛋白有望成为人精子避孕疫苗的候选成分。本研究基于其它哺乳动物(人、牛、猪、小鼠、豚鼠、猴等)精子膜蛋白的研究基础上,首先采用RT-PCR技术克隆了绵羊的四种精子膜蛋白基因,然后用RT-PCR方法和原位杂交技术在mRNA水平上检测了四种基因在绵羊睾丸组织和附睾不同部位的表达。最后用cDNA末端快速扩增技术得到了绵羊受精素β蛋白的编码序列。通  (本文共124页) 本文目录 | 阅读全文>>

第三军医大学
第三军医大学

山羊精子基因转染方法及结合体外受精生产转基因胚胎的研究

精子介导基因转移(Sperm-mediated gene transfer, SMGT)是一种简单而高效的生产转基因动物方法。该方法是根据动物精子具有自发结合外源DNA能力的原理,直接利用经DNA处理的转基因精子与卵母细胞体外受精后行胚胎移植或进行人工输精获得转基因动物,从而免去了显微注射法造成的原核损伤,便于转基因动物的研究和在生产中推广应用,是生产转基因动物的理想途径。SMGT的核心是高效、稳定的精子转染方法和有效的转基因动物生产技术,前者是提高转基因动物成功率的基础和关键,后者是高效生产转基因动物的保证。通过胚胎体外活体检测获取阳性胚胎后行移植是高效生产转基因动物非常重要的途径,建立稳定的体外受精技术体系是精子介导法生产转基因动物的有效措施,而通过活体采卵(OPU)获取卵母细胞是提高家畜体外受精效率的重要手段。但目前国内外利用精子介导法生产转基因家畜,尚未建立起一套高效的精子转染方法及有效的转基因动物生产途径,致使实验结果...  (本文共97页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国协和医科大学
中国协和医科大学

两种精子膜蛋白的基因表达研究

应用免疫途径控制生育已成为近年来迅速发展的一个领域,将精子膜的关键抗原纯化后作为避孕疫苗的设想是十分诱人的。但是鉴于精子来源困难,分离纯化精子膜蛋白受到了极大的限制。因此应用基因工程的手段,制备精子膜蛋白抗原,进而制备抗生育疫苗已成为必然的趋势。精子膜蛋白的基因工程工作起步较晚,截至1989年底,国外除了美国和加拿大的Herr及Lee开始进行了精子膜的基因研究外,其他尚未见报道。我室在以前工作的基础上用表位筛选法,首次自表达型噬菌体载体λgt11构建的大鼠睾丸cDNA库中筛选出了编码兔精子膜蛋白rSMP-B的cDNA片段(RSD-1)和编码人精子膜蛋白YWK Ⅱ抗原的cDNA片段(RSD-2)。本文采用所分离到的这两个精子膜蛋白cDNA基因片段,借助重组DNA质粒转染中国地鼠卵巢细胞(CHO cell),研究了精子膜蛋白基因在哺乳动物细胞中的表达,并应用原位杂交方法,探讨了这些膜蛋白基因在精子发生过程的表达。对pSV_2dhfr...  (本文共74页) 本文目录 | 阅读全文>>

东北林业大学
东北林业大学

马鹿精子膜蛋白纯化与理化性质分析

成熟精子的膜表面含有多种蛋白质,有些是精子本身固有的,有些是在精子成熟过程中粘附到精子表面的。精子表面的膜蛋白是精子发生成熟过程中的重要标志分子,与受精和胚胎的早期发育关系密切,随着生命科学的发展,人们发现精子膜蛋白不仅具有抗原性,而且它们在维持精子形态结构完整、完成精子的新陈代谢和生殖功能中发挥着重要的作用,特别是与精卵识别、精卵结合以及质膜融合等受精活动密切相关。其中部分抗原可诱导机体产生相应的自身抗体,进而影响精子的受精能力,导致免疫性不育。本文以我国重要的经济动物—马鹿的精子作为实验材料,进行了精子膜蛋白的提取、分离纯化,同时对其理化性质加以分析,并以纯化的马鹿精子膜蛋白作为抗原,制备了多克隆抗血清。利用抗血清进行了精子膜蛋白的定位、对精子运动的影响等的研究,现将研究结果简述如下:1、马鹿精子膜蛋白的分离纯化及鉴定采用非离子型去污剂裂解法提取马鹿精子膜蛋白,根据Western-blot和SDS-PAGE电泳实验结果,确定...  (本文共120页) 本文目录 | 阅读全文>>

《国外畜牧学(草食家畜)》1988年04期
国外畜牧学(草食家畜)

单克隆抗体在精子膜蛋白研究中的进展

本文从分子水平上探讨单克隆抗体在精 物的性别控制,已取得初步结果,用单克隆抗 子膜蛋白结构与功能研究中的概况。体与小鼠附睾尾部的精子反应后,再将精子 。,、。,L___,进行体外受精,将受精卵植入假孕雌性小鼠 精子顶体稳定因子 二二二二二二二丁了”’”二二二二二二二二二: ”‘—“”“”’””———“子宫内继续发育生长,并观察仔鼠的性别比 精子在发生顶体反应与进人卵子之前必 率。结果发现雌性仔鼠的比率并未有明显增 须先经历获能过程。然而,迄今对获能的分 加,这表明X精子和Y精子均有共同的表面 子生物学效应不甚了解。如果将获能的精子 抗原。哺乳动物翠丸内的精子 H-Y抗原含 在精浆或附寨液中短暂地温育,就可能产生 量最高,精子在附皋成熟和获能时,H-Y 去获能作用。在去获能过程中可以提取出分 抗原可能从精子表面除去。精子顶体膜上有 子量为360kd的糖蛋白,它不但可使精子去 H-Y抗原,精子经历获能和顶体反应时, 获能,而且还可阻...  (本文共2页) 阅读全文>>

《中国医学科学院学报》1982年02期
中国医学科学院学报

精子膜蛋白的研究——Ⅲ、兔精子膜蛋白“A”的定位及其酯酶活性的观察

前文〔i〕报道了采用离子型去污剂TritonX一100抽提兔精子膜蛋白,应用柱层析及聚丙烯酸胺制备电泳分离得到一种新的具有同种抗原性的膜蛋白“A”.本文进一步采用免疫荧光法确定其定位。 实脸采用异硫抓荧光素一蛋自A(FITC一ProteinA)间接标记法,此法较直接法灵敏10倍。Protein人能特异地与人的IgG、IgG:、IgG‘及许多其它种属的IgG分子中的F。区结合,不影响IgG与抗原的结合能力,因而被认为是研究细胞表面抗原的有力工具〔2〕.FITC一Pr。-teinA系在弱硷条件下,将荧光色素FITC与ProteinA的氨基共价结合,可作为一种免疫荧光标记物用于各项研究,提高实验的灵敏度.为了确定精子膜蛋白“A”的存在部位,我们制备了抗膜蛋白.A,的抗体IgG,摸索了FITC一ProfeinA与其Fc段结合的最适条件.此外,为了探讨精子膜蛋白‘A.是否具有醋酶活性,我们测定了其水解底物BAEE及兔IgG的能力。 材料和...  (本文共4页) 阅读全文>>