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宿主细胞内SARS-CoV S蛋白和N蛋白的初步筛选和鉴定

SARS冠状病毒(SARS-CoV)为一种新发现的冠状病毒,可导致人的严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)。目前发现的SARS-CoV结构蛋白包括S蛋白、N蛋白、M蛋白和E蛋白,其中S蛋白和N蛋白在病毒复制中发挥着重要作用。S蛋白决定病毒组织嗜性,参与病毒侵入过程,介导病毒在细胞之间的传播,还可引起宿主细胞凋亡。已确定血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)是SARS-CoV的功能性受体,CD209和CD209L可能是其替代受体。内吞体蛋白酶Cathepsin L可切割S蛋白促进SARS-CoV的侵入。研究表明,N蛋白主要分布于细胞质,也可分布于核仁内。N蛋白主要参与SARS-CoV核衣壳的形成、基因组RNA合成调控、亚基因组RNA转录和翻译,还通过破坏细胞分裂抑制宿主细胞增殖或延缓细胞生长。细胞内已发现的N蛋白结  (本文共97页) 本文目录 | 阅读全文>>

武汉大学
武汉大学

SARS病毒特异性抗原抗体基因和N基因的研究

SARS于2002年11月16日首先在中国广东省佛山出现,然后迅速在全世界30多个国家或地区相继爆发流行。它是由一种从未在人类身上发现的冠状病毒(命名为“SARS病毒”)引起的、并具有高发病率和致死率的新传染性疾病。由于缺乏统一的检测、诊断标准和手段以及有效的疫苗和治疗药物,在短短10个月内,导致了8000多人染病,800多人死亡。尽管在2003年末,SARS在全世界范围内最终得到了控制,但是,在新加坡、中国台湾和大陆仍有一些零星的病例相继被报道,说明SARS有可能再次出现。因此,不管是在SARS爆发期间,或者为了应对SARS的可能再次出现,发展可靠的早期检测、诊断试剂以及有效或高效的抗SARS病毒疫苗和治疗药物一直都是各国科学家所共同关心的热点问题。目前,SARS冠状病毒检测和诊断技术的研究和开发主要包括几个方面(Poon et al.,2003):基于病毒抗原-抗体反应的免疫测定法;针对病毒RNA的核酸检测技术、通过细胞培养...  (本文共168页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国农业科学院
中国农业科学院

SARS冠状病毒S蛋白抗原表位分析与定位研究

严重急性呼吸综合症(Severe acute respiratory syndrome, SARS)是由SARS冠状病毒(SARS-CoV)引起的人类新发传染病,S、M、N、E蛋白是SARS-CoV病毒粒子的几种主要结构蛋白。用Lasergene软件系统分析SARS病毒结构蛋白S、M、N蛋白,预测了12个抗原表位,用这些预测表位序列设计组合成四个嵌合基因SSCV-A、SSCV-B、SSCV-C、SSCV-D。人工合成后插入pGEX-6p-1的BamHI和XhoI位点间,构建成融合表达质粒,转化宿主菌BL21经IPTG诱导后嵌合基因表达产物为可溶性蛋白。经免疫印迹试验表明嵌合基因表达产物可被SARS康复患者血清所识别,表明重组融合蛋白具有免疫反应性,提示预测表位中含有SARS-CoV结构蛋白的抗原表位。用纯化的重组融合蛋白GST-SSCV-D和GST-SSCV-A为抗原制备了一系列单克隆抗体。抗SSCV-D的单抗有两株,分别为D3...  (本文共118页) 本文目录 | 阅读全文>>

东北农业大学
东北农业大学

SARS冠状病毒S糖蛋白基因片段的表达及初步应用

严重急性呼吸综合症(Severe Acute Respiratory Syndrome,SARS) ,亦称非典型性肺炎,是2002~2003 年在全球范围内爆发的一种传染性极强的呼吸系统疾病。新型SARS 冠状病毒(SARS-associated coronavirus, SARS-CoV)是导致此次疾病的病原体。SARS-CoV是一种新发现的冠状病毒,其毒力远远强于其他已知的家族成员。目前对于该病毒的许多方面尚未完全明了,因而对于SARS是否会卷土重来无法预知,研制开发特异灵敏的诊断试剂以及安全有效的疫苗,都是亟待解决的问题。目前我国研制的SARS灭活苗已经进入I期临床实验阶段,血清学检测试剂盒也已经商品化。然而这二者均以灭活的SARS-CoV全病毒粒子为基础制备,其中感染性RNA存在的生物安全性无法保障;一些RNA病毒具有的抗体依赖性感染增强作用,也是SARS灭活苗研究的一大障碍;而且尽管操作SARS-CoV在P3级实验室中...  (本文共105页) 本文目录 | 阅读全文>>

浙江大学
浙江大学

兼性胞内寄生菌HLK1~T对人宿主细胞的感染和持续性寄生的研究

目前,病原菌仍是人类健康最大的威胁之一,比如急性呼吸道感染、腹泻、肺结核等疾病都是由于病原菌的感染所致。而且,新的细菌感染性疾病的不断出现,以及大量致病菌的反复出现和耐药性的增加,对公众健康造成可怕的威胁。因此,对潜在病原菌的发现以及病原菌致病机理的研究一直是研究的热点之一。人红白血病细胞系K562细胞被广泛用于实验室的研究。当我们对K562细胞进行核型分析过程中,意外地发现K562细胞染色标本中有杆状细菌样的结构。为了排除该实验中相关实验试剂的环境细菌污染,我们严格控制了各种实验试剂和实验操作。然而,多次重复实验仍得到以上结果。因此,我们推论该细胞中可能存在一种细胞内生菌。将K562细胞、RPMI 1640完全培养基以及各种实验用试剂分别涂至基础血平板(5%绵羊血)上,置37℃孵箱中培养48~72小时,结果发现涂有K562细胞的平板上有菌落生成,而其它平板均无任何菌落形成。经多次实验证明,平板上形成的细菌集落确为K562细胞来...  (本文共144页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国人民解放军军事医学科学院
中国人民解放军军事医学科学院

以裂殖酵母为模型研究HIV蛋白与宿主细胞的相互作用并探索抗HIV-1的新策略

人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV)在感染宿主细胞的过程中通过多种方式改变细胞状态使其适合于病毒复制,而宿主细胞则利用特异性或非特异性的反应来抵抗HIV的感染,HIV必须克服这些抗病毒反应以保证其正常复制,因此可以说HIV感染的过程就是一个病毒蛋白与宿主相互作用的过程。研究HIV病毒蛋白与宿主的相互作用是阐明HIV病毒感染机制、探讨新的抗病毒方法的基础。鉴于人细胞的复杂性,我们利用S.pombe细胞为模型研究HIV病毒蛋白与宿主细胞蛋白的相互作用,并以此为基础探讨新的抗HIV-1策略。第一部分 以S.pombe为模型对HIV-1全基因组的研究S.pombe是与哺乳动物细胞非常相似的一种真菌,各种真核细胞蛋白在S.pombe细胞和哺乳动物细胞中的功能基本相似。因此,S.pombe细胞为真核细胞蛋白结构、功能、基因表达的研究提供了很好的模型。在S.pombe细胞中得到的实验数据能够为真...  (本文共124页) 本文目录 | 阅读全文>>

《生物学教学》2017年03期
生物学教学

走出对病毒认知的5个误区

病毒是非细胞形态的生命体,是迄今为止发现的最小、最简单的有机体。自1892年人们首次发现烟草花叶病毒以来,目前已发现4000多种病毒。不同的病毒,其结构组成、核酸类型、增殖过程不完全相同,本文列举并分析对病毒认知的5个误区。1 DNA病毒是否均为双链无论是原核细胞还是真核细胞,都同时含有DNA和RNA,并以双链DNA分子作为遗传物质的载体。然而,每一种病毒粒子只含有一种核酸,要么是DNA,要么是RNA,不会两者兼有。根据核酸类型的不同,病毒可以分为DNA病毒和RNA病毒两大类。DNA病毒又可分为双链DNA病毒(ds DNA)与单链DNA病毒(ss DNA):1双链DNA病毒有双链闭环和双链线性两种,单链DNA病毒均为单链线性DNA。常见的双链闭环DNA病毒有猴空泡病毒40(SV40)、人乳头瘤病毒(HPV)、人类疱疹病毒4型(HHV-4,又称EB病毒);双链线性DNA病毒有T2噬菌体、腺病毒、单纯疱疹病毒1型(HSV-1)、痘病...  (本文共3页) 阅读全文>>