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血红素加氧酶-1(HO-1)对大鼠原位肝移植细胞保护和抗炎作用的实验研究

目的 1、熟练掌握Wistar大鼠原位肝移植免疫耐受动物模型的建立,在此基础上建立DA→Lewis原位肝移植免疫排斥模型。2、探讨血红素加氧酶—1(HO-1)在诱导剂和抑制剂(CoPP、ZnPP)作用下,大鼠移植排斥模型中HO-1表达情况,探讨HO-1在大鼠肝移植排斥模型中对促炎症因子(IFN-γ,IL-12)和抑制炎症因子(IL-4,TGF-β1)的影响。3、通过大鼠肝移植排斥模型,观察HO-1不同表达对其术后肝功能的影响、肝组织内炎症细胞侵润以及排斥的严重程度(中性粒细胞,淋巴细胞情况)、凋亡因子Bcl-2和血管粘附因子(VCAM-1)等的变化。通过以上实验,试图了解血红素加氧酶—1(HO-1)对大鼠原位肝移植肝细胞保护和抗炎的作用。方法 1、按改良“二袖套法”建立大鼠原位肝移植免疫耐受模型。2、同法建立大鼠原位肝移植排斥模型,将大鼠分为三组:对照组(A组),ZnPP组(B组)和CoPP组(C组)。三组分别于3天和7天处  (本文共122页) 本文目录 | 阅读全文>>

哈尔滨医科大学
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MSCV-hIL-10的构建及延长大鼠原位肝移植存活的研究

肝移植目前已成为治疗终末期肝脏疾病的唯一有效手段,急慢性排斥反应仍是临床器官移植中难以克服的问题。环孢素A和FK506等免疫抑制剂的应用已成为肝移植成功必不可少的治疗措施,但长期应用会带来许多致命的副作用。为减少免疫抑制剂的使用剂量和时间,降低毒副作用并使移植受体长期存活,国内外学者作了大量实验研究。我们选用改进的缝合法行大鼠原位肝移植,根据hIL-10具有免疫调节的原理,通过逆转录病毒载体(MSCV)将hIL-10导入供体肝脏,以期延长大鼠原位肝移植存活,并为诱导免疫耐受及临床器官移植提供理论依据。一、大鼠原位肝移植模型改进的研究为比较两种改进后大鼠原位肝移植模型建立的优缺点,我们对三套袖法的修肝技术及套管制作进行改进,实施大鼠原位肝移植30例,采用改进的缝合法实施大鼠原位肝移植70例。三袖套法手术成功率80%,一周存活率8%,缝合法手术成功率90%,一周存活率72%。结果表明改进后的三袖套法虽然明显缩短手术时间及无肝期,但手...  (本文共69页) 本文目录 | 阅读全文>>

四川大学
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睾丸支持细胞对大鼠原位肝移植术后急性排斥的抑制作用

目的 (1) 简化、改进睾丸支持细胞(Sertoli cell)的分离方法,减少分离细胞的制作成本、提高细胞的纯度。(2)改良制作大鼠原位肝移植模型的方法,减少术后并发症的发生,提高生存率;建立稳定的肝移植急性排斥模型。(3)通过不同途径行Sertoli细胞—肝脏联合移植,探讨Sertoli细胞是否可为移植肝提供免疫保护。方法(1)Sertoli细胞分离中省去以剪刀剪碎、DNAS消化、39℃下培养等程序,以200目网过滤,2步消化后直接进入37℃培养。(2)采用“二袖套管法”,通过建立Wistar→Wistar或SD→SD大鼠肝移植模型熟练建立大鼠肝移植模型的技能,对术前用药、麻醉、术中操作等细节加以改进。对照研究Wistar→SD、SD→Wistar、Wistar→Wistar配对组合的肝移植术后排斥反应,选取排斥反应强烈、稳定的组合建立排斥反应模型。(3)以肝移植急性排斥模型Wistar→SD不干预组(A组n=14)为对照组...  (本文共99页) 本文目录 | 阅读全文>>

四川大学
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Kupffer细胞在大鼠原位肝移植免疫耐受中的作用机制

目的 1、建立Wistar、SD大鼠原位肝移植动物模型,观察从Wistar-SD大鼠肝移植后移植肝脏能否产生免疫排斥反应,以及SD-SD大鼠肝移植后能否产生免疫耐受。2、在上述模型的基础上,加一以氯化钆(Gdcl3)阻断供肝枯否氏细胞(Kupffer cell,KC)吞噬功能组,测定各组肝脏功能,肝脏细胞间粘附分子(CAMs),细胞因子,CD14的表达,以了解KC的功能状态是否对CAMs的表达,及细胞因子的分泌有影响。3、从上述各组肝移植,分离移植肝KC,与SD来源脾淋巴细胞混合培养,观察处于各组功能状态下的KC在体外对脾淋巴细胞的影响。通过以上三部分实验,试图探索KC在大鼠原位肝移植免疫耐受中的作用机制。方法 1、按“二袖套法”建立大鼠原位肝移植模型,将大鼠分为三组:急性排斥反应组(Wistar-SD),免疫耐受组(SD-SD),Gdcl3组(于移植前24小时用Gdcl_3 10mg/kg经尾静脉注入供者大鼠体内以阻断供肝KC...  (本文共112页) 本文目录 | 阅读全文>>

四川大学
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Kupffer细胞在大鼠原位肝移植免疫调节中的作用

目的 (1)通过建立大鼠原位肝移植急性排斥和免疫耐受动物模型,观察两组移植肝内kupffer细胞FasL分子表达及血液中细胞因子的变化。(2)观察两组移植肝内浸润淋巴细胞的凋亡情况以及Caspase-3的表达(3)分离出kupffer细胞,在体外观察kupffer细胞功能变化及对淋巴细胞的杀伤能力。通过上述研究,初步阐明kupffer细胞在大鼠原位肝移植免疫调节中的作用。方法 (1)选用Wistar和SD大鼠,按“两袖套法”建立大鼠肝移植动物模型,将大鼠分为排斥组(Wistar→SD,A组)和耐受组(Wistar→Wistar,B组),并以正常肝脏作为对照(C组)。A、B组分别于术后3、5、7天杀取标本。(2)观察A、B组受鼠存活率,肝脏组织病理改变,测定血浆总胆红素(TBIL)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)及白蛋白(ALB)水平,测定血浆中细胞因子TNF-α、IL-10和TGF-β_1的变化。观察肝组织中kupf...  (本文共90页) 本文目录 | 阅读全文>>

苏州大学
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雷公藤多甙对大鼠原位肝移植急性排斥的影响

尽管各种新的免疫抑制剂不断问世,但移植后的排斥反应仍无法完全避免。诱导移植物抗原特异免疫耐受,是解决器管移植排斥的根本方法。免疫耐受在啮齿类动物体内已获得成功诱导,但在人类效果却并不理想。人类具有顽强的免疫防御系统,要诱导真正的供体特异性免疫耐受并不简单,但临床上并不排除诱导出“几乎耐受”的可能,与其他器官相比,肝具有独特的免疫特性,部分肝移植患者可完全撤除免疫抑制剂而肝脏功能仍可维持正常。寻找“耐受”和“免疫”的中间状态,达到“几乎耐受”的理想状态,仍将是器官移植的研究热点。目前临床上应用的免疫抑制剂和抑制方案仍存在不少弊端。因此,寻找高效,低毒而又价格低廉的免疫抑制剂正成为临床移植医学界日益关注的热点问题。近年来,相继发现了一些具有一定免疫抑制作用的中草药。如“雷公藤多甙”是从卫矛科植物雷公藤中提取,分离到的一种有效组份。本实验采用大鼠原位肝移植为模型,来探讨雷公藤多甙抗大鼠原位肝移植急性排斥反应的作用机制,及联合CsA的治...  (本文共134页) 本文目录 | 阅读全文>>