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乙型肝炎病毒X蛋白对肝癌细胞凋亡的影响及其与p53和核转录因子NF-κB关系的研究

乙型肝炎病毒(HBV)与原发性肝癌之间存在着密切的诱变关系,与HBV感染相关的原发性肝癌是最常见的恶性肿瘤之一。特别是HBV x基因编码的X蛋白具有反式激活作用,可激活多种病毒和细胞基因,并可使肝细胞发生恶性转化,在原发性肝癌发生发展过程中起重要作用。本课题探讨了乙型肝炎病毒X蛋白对肝癌细胞凋亡的影响及其与p53和核转录因子NF-κB的关系。主要研究内容及结果如下:1.研究X蛋白对肝癌细胞恶性表型及细胞凋亡的影响,首先用PCR技术从含HBV DNA的质粒p~(TTHK)中扩增出完整的HBV x基因,克隆于p~(T7Blue)载体,测定序列后定向克隆于真核表达载体p~(CDNA3.1-HBX),构建成HBV x基因真核表达载体p~(CDNA3.1-HBX),并通过脂质体介导的基因转染法将HBV x基因真核表达载体转染入人HCC-9204肝癌细胞,用G418筛选获得稳定表达X蛋白的细胞克隆。以MTT比色试验,平板集落形成实验,软琼脂  (本文共85页) 本文目录 | 阅读全文>>

第二军医大学
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蟾毒灵诱导肝癌细胞凋亡及相关机理研究

一、研究背景原发性肝癌(HCC)是我国最常见恶性肿瘤之一,死亡排位为第3位。年死亡人数约12万,占全世界肝癌死亡人数的40%。传统中药对提高肝癌患者生存质量,改善机体的一般状况以及延长生存期有一定帮助,但对肝癌本身杀伤作用有限。有毒中药单体的抗肿瘤研究是近年来肿瘤研究领域的热点之一,积极探索中药单体成分对肝癌的抗肿瘤作用,对开发新的肝癌治疗药物具有深远意义。蟾毒灵(Bufalin)是中药蟾酥中提取的一种毒性配基之一,属于细胞拓扑异构酶Ⅱ的抑制剂,为蟾毒配基中抗肿瘤作用最强者。蟾毒灵在血液肿瘤、前列腺癌、胃癌等抗肿瘤方面的研究已有报道,机理方面的研究已涉及到肿瘤细胞分化、凋亡的诱导及相关基因的表达,信号转导以及逆转多药耐药等方面,但均限于体外研究,有关蟾毒灵体外诱导人肝癌细胞凋亡的机理研究及体内的抗肿瘤作用的研究尚未见报道。为此,我们在既往对蟾毒灵抗肿瘤研究基础上,建立裸小鼠人肝癌(BEL-7402)/小鼠肝癌(H22)原位移植模...  (本文共108页) 本文目录 | 阅读全文>>

山东大学
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生长抑素类似物诱导肝癌细胞凋亡和bcl-2/bax表达的研究

目的:原发性肝癌(Primary liver cancer,PHC)是世界上最严重的恶性肿瘤之一,每年全球约125万人为此丧生。我国是PHC的高发区。原发性肝癌在我国恶性肿瘤的发病率中占第三位,年发病率约为欧美的10倍以上。据卫生部统计,肝癌死亡率为我国男性恶性肿瘤的第2位,女性恶性肿瘤的第4位。肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)在我国占PHC的绝大多数(91.5%)。原发性肝癌具有不易发现、发展快、生存期短、病死率高、预后差的特点。临床就诊者多属中晚期,手术切除率低,常规化疗及放疗效果不佳,且副作用大,,患者常难以耐受,其他疗法如基因治疗、生物治疗等作用亦不明显。近年来,生长抑素(somatostatin,SST)及其类似物对肿瘤的抑制作用越来越受到人们的关注。临床上应用生长抑素治疗神经内分泌性肿瘤已取得了令人满意的效果。大量的研究表明,生长抑素及其类似物能够抑制消化系统的实体性肿瘤如胃癌、...  (本文共78页) 本文目录 | 阅读全文>>

第一军医大学
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PKC在X线辐射诱导肝癌细胞凋亡机制中的抗凋亡作用

研究背景:原发性肝癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)是世界上常见、高度恶性的肿瘤,超过半数的HCC病人分布在中国,死亡率很高,5年死亡率超过95%。手术是HCC治疗的首选手段,但大多数HCC在慢性肝病背景下发生,常常合并肝硬化,外科治疗的风险较大,即使部分切除也可能引起肝功能衰竭,因此只有很小一部分HCC病人可以手术治疗。治疗方法的选择不仅受到肿瘤自身的限制,肝功能的储备、门静脉高压的严重程度以及患者的一般状况均是重要限制因素。目前有许多非手术治疗方法用于HCC的治疗,放射治疗是有效的非手术治疗方法之一。HCC的常规放射治疗有较大的副作用,限制了剂量的提高,疗效欠佳。随着放射物理学的发展,三维适形放射治疗在HCC治疗方面的应用越来越受到重视,但剂量仍然是影响肝癌局部治愈的的限制性因素,因为肝癌细胞对辐射相对耐受,周围“正常”肝组织也需要保护。因此研究辐射诱导肝癌细胞损伤的机制对于提高肝癌的放射敏感性,...  (本文共85页) 本文目录 | 阅读全文>>

第四军医大学
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外源性p21~(WAF1/CIP1)和p53基因对肝癌细胞凋亡和细胞周期的调控作用研究

细胞凋亡和细胞周期调控在肿瘤的发病学上具有重要意义,研究细胞凋亡和细胞周期调控机制可以为攻克肿瘤提供新的思路。然而,迄今为止,细胞凋亡的分子机理以及细胞周期与细胞凋亡的关系仍未阐明,因此对这一领域的探索是目前研究的热点之一。肝细胞肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一,也是我室长期研究的课题之一,本课题在前人研究的基础上,深入研究了周期素依赖激酶抑制因子p21~(WAF1/CIP1)基因对肝癌细胞恶性表型的影响和对细胞凋亡的调控,初步探讨了p53与p21~(WAF1/CIP1)在肝癌细胞中的相互作用及其相互关系。并构建了HCC-9204细胞cDNA文库和在阿霉素诱导下HCC-9204的凋亡细胞的cDNA文库。为今后筛选肝癌相关基因和凋亡相关基因打下了基础,本研究的主要内容和结果如下:1.HCC-9204细胞中未检测到P21蛋白,而在wt-p53转染HCC-9204细胞系中,检测到P21蛋白的阳性表达,并伴有细胞的自发凋亡。2.为研究p21...  (本文共100页) 本文目录 | 阅读全文>>

第四军医大学
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肝癌放射免疫诊治及诱导肝癌细胞凋亡的研究

高特异、高亲和性抗人肝细胞肝癌单克隆抗体的成功研制,为肝癌特异性诊断和治疗拓宽了新手段。本文用放射性核素~(99)Tc~m和~(188)Re标记肝癌单抗片段HAb18 F(ab′)_2进行了肝癌放射免疫显像和放射免疫治疗的研究,进而对内照射~(188)Re-β射线诱导肝癌细胞凋亡进行了定性和定量研究。1.~(99)Tc~m直接法标记抗人肝癌单抗片段HAb18 F(ab′)_2放射免疫显像研究用氯化亚锡(SnCl_2·2H_2O)为还原剂,葡庚糖酸钠作转换络合剂和稳定剂~(99)Tc~m直接法标记肝癌单抗片段HAb18 F(ab′)_2进行荷人肝癌裸鼠模型的放射免疫显像研究。整个标记过程可在1.5h完成,最佳标记率为84.2%。本方法条件温和,没有导致标记抗体分子的降解。标记物5h内的解离率<0.5%。荷瘤裸鼠注射标记抗体后,24h肿瘤放射性浓聚最明显,除双肾区有浓聚外,胃肠道和甲状腺未见放射性浓聚;在该时间点,瘤/血和瘤/肝比值...  (本文共99页) 本文目录 | 阅读全文>>