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HCV感染者血清中HSP70的检测及其肽复合物体外诱导HCV CTL的初步研究

丙型肝炎病毒(HCV)是全球性的急慢性肝炎、肝硬化和肝细胞癌的主要病因之一。由于HCV的高度遗传异质性和快速突变率,使得通常的HCV诱导的体液免疫应答无法预防HCV感染。近年研究发现,HCV蛋白序列上存在多个细胞毒性T淋巴细胞(CTL)识别表位(epitope),特别是相对保守的C区具有淋巴细胞增殖和CTL诱导活性,HCV特异性CTL可抑制HCV的生长,推测CTL介导的细胞免疫可能在控制HCV感染方面有重要作用。但这种特异性CTL的诱导通常较弱。如何增强特异性CTL的诱导成为丙肝细胞免疫的关键问题之一。免疫学研究表明,热休克蛋白(HSP)作为分子伴侣(Molecular Chaperone)在肿瘤及病毒抗原的MHC Ⅰ类限制性抗原呈递途径中发挥重要作用。可协助HSP结合抗原有效地表达CTL识别表位,激活抗原特异性CTL。在丙型肝炎研究的领域内尚未见此类研究。因此,我们研究HSP70、HSP70抗体在HCV感染者血清中的表达及HS  (本文共85页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国科学院研究生院(上海生命科学研究院)
中国科学院研究生院(上海生命科学研究院)

丙型肝炎病毒高变区1高反应性多肽筛选、表达及其特性研究

高变区1(HVR1)是位于丙型肝炎病毒(HCV)被膜蛋白E2氨基端的高度异质性的一段序列,被认为是宿主体液免疫中和抗体的重要靶位,但其株特异性可导致部分病毒逃避宿主的免疫识别和感染的持续。虽然如此,HVR1序列中存在较保守的位点,通过合适的HVR1免疫程序,仍可能诱生出保护性抗体。本研究对来自中国不同地区的HCV HVR1进行了序列特性分析,在综合考虑地域因素和基因型的差别、亲水性和免疫原性的基础上,首先在大肠杆菌中表达了四种DHFR-HVR1融合蛋白,检测了它们与HCV感染者血清反应性,其中SH1b的反应率最高,为66.67%;初步分析提示患者免疫反应的强度可能与干扰素疗效有关。所得融合蛋白纯化后免疫家兔获得了相应的抗体。将其中三个HVR1片段分别连接至乙型肝炎病毒表面抗原片段的羧端,表达了HBs-HVR1融合蛋白。为进一步提高HVR1序列的交叉反应性,采用DNA shuffling的方法体外重组31株从丙肝患者血清中获得的H...  (本文共95页) 本文目录 | 阅读全文>>

第一军医大学
第一军医大学

丙型肝炎病毒体外大规模培养技术研究及其在抗丙肝病毒药物筛选中的初步应用

丙型肝炎病毒(HCV)是输血后非甲非乙肝炎的主要病因,全世界约有1.7亿人感染HCV,中国有大约4000万的HCV携带者。超过一半的HCV感染者会转化成慢性感染,其中10-20%的慢性感染者会发展成为肝脏疾病如肝硬化,并且最终1-5%的人会发展成为肝细胞癌。目前,对HCV感染的治疗尚无有效的方法,干扰素治疗只对10-20%的病人有效,低于50%的病人对干扰素和病毒唑的联合治疗有反应。由于HCV难以在体外培养,使得HCV疫苗和抗HCV药物的研究进展缓慢。质粒BRT703'X(NIHJ1)含有HCV全长基因组DNA,将其用限制性内切酶EcoRⅠ和HindⅢ不完全酶切后,回收HCV基因组序列,插入到质粒载体pCOUS-T7的EcoRⅠ和HindⅢ之间,使HCV基因组置于载体的T7启动子和T7终止子控制下,构建质粒pT7HCV。质粒0.pMKC1A(HCV)含有HCV基因组前体蛋白的开放阅读框(ORF)序列,将其用EcoRⅠ和HindⅢ...  (本文共119页) 本文目录 | 阅读全文>>

复旦大学
复旦大学

病毒性肝炎的蛋白质组研究

本博士论文工作的主要贡献为:将亚细胞蛋白质组技术和比较蛋白质组学方法相结合,研究了丙型肝炎病毒亚基因组复制细胞及其对照细胞的差异蛋白质组:另外采用1D SDS-PAGE/LC/MS和2DE/MALDI MS两条技术路线系统地研究了丙型肝炎病毒亚基因组复制细胞中膜和脂筏蛋白质组;利用基于双向凝胶电泳和生物质谱方法的策略对HBsAg阳性及具有同样背景但HBsAg阴性的转基因鼠肝组织进行了差异蛋白质组分析;展示了在MALDI生物质谱基质中加入添加剂显著改善谱图信噪比的效果,并将此推广应用于高通量的蛋白质组研究中。蛋白质组学作为当今生命科学热点与前沿-功能基因组学中的重要研究领域,近年来得到了蓬勃的发展,已涉足生命科学中一系列热点领域。蛋白质组研究具有观察由多基因事件引起的多蛋白质组分整体变化的独特优势,更接近生命现象的本质,并在药靶研究中具有潜在价值,目前已被广泛用于研究各种疾病的发生、发展规律,并取得了很多重大的成就。病毒性肝炎目前...  (本文共155页) 本文目录 | 阅读全文>>

山东大学
山东大学

外周血单个核细胞的长期体外培养及丙型肝炎病毒细胞模型的建立

背景 丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)是输血后非甲非乙型肝炎的主要病因,而丙型肝炎也是一种全球性的传染性肝病。急性丙型肝炎患者中,有超过50-85%的患者将发展成为慢性丙型肝炎,如果病情进一步进展还将发展为肝硬化和肝细胞肝癌。据美国疾病预防与控制中心统计,约20%至30%的慢性丙型肝炎患者最终将出现致命的临床症状和并发症。据专家预测,在今后的10-20年内,由于目前无症状或轻症患者将发展成为终末期肝病甚至肝癌,慢性丙型肝炎将成为医疗卫生保障系统的主要负担之一。1989年,人们首次应用分子生物学技术识别了丙型肝炎病毒基因组。但是,到目前为止,仍然没有建立理想的丙型肝炎病毒细胞模型。虽然,人们对丙型肝炎病毒基因结构和单独病毒蛋白的认识不断增加,但是由于缺乏这种可靠和有效的病毒培养系统,丙型肝炎病毒复制和致病机制的研究均受到了很大限制。同时,关于丙型肝炎疫苗和有效治疗方法的研究也无法进行。丙型肝炎病毒能够感染...  (本文共71页) 本文目录 | 阅读全文>>

武汉大学
武汉大学

丙型肝炎病毒NS4B蛋白的功能

丙型肝炎病毒(HCV)是引起丙型肝炎的病原体,已成为世界范围内的公共健康问题,是慢性肝炎、肝硬化和肝癌的主要原因。尽管还没有合适的细胞可培养HCV,但它编码的蛋白质在体内和体外己被鉴定。HCV编码一个多聚蛋白,在病毒和宿主细胞蛋白酶的作用下,产生至少十个不同的蛋白,分为结构蛋白(core、E1、E2)和非结构蛋白(NS2-NS5B)。目前对HCV的研究集中于单个的HCV蛋白的功能,试图揭示HCV的致病机制。在HCV编码的所有蛋白中,NS4B的功能最为不清楚。本研究旨在研究NS4B的功能,了解其在HCV致病中的作用。常规的研究基因的方法常常费时且范围有限。DNA微点阵技术为检测基因的表达水平提供了前所未有的视角,从而发现蛋白在复杂的调节网络中的作用。用pCDNA3.1(-)和重组的pCDNA3.1(-)NS4B质粒转染HeLa细胞,用G418筛选稳定转染了质粒的细胞,用RT-PCR和western blot分析证实了NS4B能在H...  (本文共124页) 本文目录 | 阅读全文>>