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膀胱肿瘤基因瘤苗的制备及抗肿瘤作用的研究

膀胱肿瘤是泌尿系统最常见肿瘤,发病率在男性患者可达第四位,而且复发率高,成为临床治疗中的难题之一。膀胱肿瘤高复发的原因在于患者局部及全身免疫功能低下以及由其而造成的残余瘤细胞、种植瘤细胞和发展中病变逃逸免疫监视。实验研究及临床观察都证明IL-2等免疫疗法对膀胱肿瘤有明显治疗作用。基因治疗是九十年代医学生物领域的重大进展之一,尤其是基因瘤苗和反义技术更受重视。针对膀胱肿瘤的高复发机制和基因瘤苗的作用特点,我们认为基因瘤苗尤其适宜于膀胱肿瘤的治疗。因此我们转染IL-2cDNA制备了膀胱肿瘤基因瘤苗,初步研究了其生物学特性、抗肿瘤作用和潜在的应用价值。人工合成一对带有限制性内切酶酶切位点的人IL-2基因PCR引物,用PCR方法从质粒pHIG53中扩增出人IL-2cDNA,将其定向克隆人逆转录病毒载体pDOR-neo,成功地构建了人IL-2cDNA的真核细胞表达载体pDORIL-2。分别用磷酸钙沉淀法和脂质体(Lipofectin)转染  (本文共88页) 本文目录 | 阅读全文>>

第四军医大学
第四军医大学

Angiostatin对膀胱肿瘤新生血管抑制作用的实验研究

血管生成(angiogenesis)是指从已存在的血管床中产生出新生血管系统的复杂过程。正常血管形成被严格限定于某些特定短暂的生理过程,如胚胎发生、伤口愈合、女性月经期和妊娠期等,血管内皮细胞经过短暂的增殖后很快回到正常的静止状态。而持续的血管生成则是某些病理改变的特征,如慢性炎症、糖尿病性视网膜病变和肿瘤等,由于正常的血管生成调控机制失衡,血管生成变得十分活跃,这是疾病状态得以维持、延续和发展的基础。研究表明,实体肿瘤的生长不仅具有血管依赖性,而且在肿瘤转移过程中,血管生成也起着至关重要的作用。肿瘤形成早期(血管前期),没有血管生长,此期肿瘤不超过0.4mm~3,呈缓慢的线性生长。当肿瘤大小超过0.4mm~3时(血管期),肿瘤开始形成自身的血管系统,肿瘤生长加速,呈快速的近指数生长。因此,在“血管期”抑制肿瘤血管生成,切断肿瘤营养“供给线”,就能控制其生长和转移。抗血管生成治疗现已成为治疗肿瘤的研究热点。随着基因技术的迅速发展...  (本文共121页) 本文目录 | 阅读全文>>

吉林大学
吉林大学

BCL-2反义寡核苷酸治疗膀胱肿瘤的研究

目的 通过对低期的(Tis-1)及高期的(T2-4)膀胱肿瘤中BCL-2mRNA的检测,探讨BCL-2与膀胱肿瘤临床分期的关系;通过对BCL-2反义寡核苷酸(BCL2-ASO)对膀胱癌EJ细胞的影响及机制的体内、体外研究,探讨BCL2-ASO治疗膀胱肿瘤的可行性、途径及方法,为BCL2-ASO治疗膀胱肿瘤提供理论依据。 材料和方法 本实验第一部分采用RT-PCR方法对低期的(Tis-1)及高期的(T2-4)膀胱肿瘤中BCL-2mRNA的检测,电泳后进行光密度扫描,绘制光密度面积曲线,比较两组BCL-2mRNA表达量是否有差异;第二部分采用BCL-2基因第1外显子的反义寡核苷酸,以硫代磷酸修饰(BCL-2PS-ASO),序列为5’-tctcccagcgtgcgccat-3’加入培养的膀胱癌细胞株EJ作为实验组,硫代磷酸修饰的正义的BCL-2寡核苷酸(BCL-2PS-SO)序列为5’-taccgcgtgcgaccctct-3’作...  (本文共93页) 本文目录 | 阅读全文>>

第三军医大学
第三军医大学

结核杆菌Ag85B/IL-2融合蛋白的原核表达、纯化及其对膀胱肿瘤免疫治疗效应的研究

膀胱肿瘤是泌尿系统最常见的肿瘤,具有发病率高、复发率高等临床特点。膀胱粘膜局部免疫功能低下,是使残存瘤细胞逃逸免疫监视、得以生存、发展形成复发的重要原因之一。如何提高膀胱肿瘤患者的免疫功能成为治疗和预防膀胱肿瘤复发的关键。BCG膀胱灌注是治疗膀胱肿瘤和预防其复发最有效的方法之一,BCG联合IL-2治疗膀胱肿瘤具有更好的临床疗效,但无论是BCG还是IL-2在临床治疗膀胱癌均存在着剂量大、疗程长、毒副作用大等缺点。因此,探讨更为有效、安全的免疫疗法对膀胱肿瘤治疗及预防复发具有重要意义。Ag85B是BCG、结核杆菌及其它分枝杆菌最主要的分泌蛋白,是BCG在体外和体内发挥生物学作用的主要成分,也是广泛分布于结核杆菌以及其它非典型分枝杆菌中具有交叉反应性的蛋白,能够诱导机体强烈的Th1免疫反应。利用分枝杆菌Ag85B的免疫原性,除可在制备预防结核的多肽疫苗和基因疫苗中发挥作用外,在膀胱肿瘤及其它肿瘤治疗中的应用研究近年来受到重视。本研究运...  (本文共158页) 本文目录 | 阅读全文>>

第三军医大学
第三军医大学

NF-κB在膀胱肿瘤细胞抑制T淋巴细胞功能中的作用研究

膀胱肿瘤是泌尿系统最常见的肿瘤,其临床主要的特点是发病率高、复发率高。已有的研究认为肿瘤患者存在机体免疫功能低下、肿瘤浸润淋巴细胞活性及其对肿瘤细胞的杀伤能力下降,并进而提出了肿瘤免疫抑制的“黑洞”理论,认为膀胱局部免疫功能低下可导致残存肿瘤细胞逃避免疫监视并得以生存和发展,是膀胱肿瘤复发率高的重要原因之一。核转录因子κB(NF-κB)是一种重要的核蛋白,能特异结合于免疫球蛋白κ轻链基因增强子κB序列,广泛存在于淋巴细胞和非淋巴细胞中,通过对多种细胞因子(如:IL-2)、免疫受体(如:IL-2Rα)等免疫相关编码基因转录的调控,在机体免疫功能调节中发挥重要作用。本实验利用细胞共培养技术,对T淋巴细胞中NF-κB在膀胱肿瘤细胞抑制T淋巴细胞功能中的作用进行了研究。实验分两部分,第一部分,将淋巴细胞分别与膀胱肿瘤细胞、射线照射膀胱肿瘤细胞、正常膀胱移行上皮细胞共培养,采用免疫组化、MTT法、ELISA双抗夹心法、流式细胞仪,检测T淋...  (本文共108页) 本文目录 | 阅读全文>>

复旦大学
复旦大学

分泌IL-2和IFN-α2a的基因重组卡介苗构建和抗膀胱肿瘤实验研究

一、研究背景膀胱肿瘤是我国泌尿男生殖系统最常见的肿瘤,其中80%以上为浅表性肿瘤,以多发和术后易复发为其主要特征,且肿瘤在不断的复发中日趋恶化。浅表性膀胱肿瘤的治疗手段包括以经尿道膀胱肿瘤切除(transurethral resection ofbladder tumor, TURBT)为主的手术治疗和术后的膀胱灌注治疗等。尽管多种化学药物如丝裂霉素、表阿霉素、吡柔比星等和新型抗膀胱肿瘤疫苗相继应用于膀胱肿瘤的灌注治疗,但国内外大量临床资料已经证明,卡介苗(BacillusCalmette-Guerin, BCG)是目前防治浅表性膀胱肿瘤最有效的免疫制剂,其在减少肿瘤复发数目、降低复发频率以及预防低分化膀胱肿瘤进展三个方面,均优于传统的化疗药物。虽然BCG膀胱灌注已被公认为是浅表性膀胱肿瘤最有效的辅助治疗之一,但一直面临着患者对BCG免疫反应弱和BCG毒副作用大的难题,这极大地限制了BCG在临床的广泛应用。因此,改造BCG以提高...  (本文共103页) 本文目录 | 阅读全文>>