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Rab27A对人乳腺癌细胞生物学特性的影响及其机制的研究

目的检测人乳腺癌细胞中Rab27A的定位、表达情况,研究Rab27A表达对乳腺癌细胞生物学特性的影响并探讨其作用机制。方法第一部分1、采用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)技术,检测Rab27A及相关的Rab家族成员mRNA在四种人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435和MDA-MB-435HM中的表达。2、通过SYBR greenⅠ法实时半定量逆转录聚合酶链反应(semi-quantitativerealtime RT-PCR)和Western blot方法对Rab27A mRNA及蛋白在人乳腺癌细胞中的差异性表达进行半定量。3、应用免疫荧光(immunofluorescence)及激光共聚焦(confocal)扫描成像技术显示Rab27A蛋白在乳腺癌细胞中的定位及与细胞骨架的关系。4、通过RT-PCR扩增  (本文共108页) 本文目录 | 阅读全文>>

第四军医大学
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针对uPA的siRNA对人乳腺癌细胞侵袭的抑制作用及肿瘤特异性RNA干涉系统的建立

侵袭与转移是恶性肿瘤的重要生物学行为,也是导致患者死亡的主要因素。因此针对肿瘤侵袭转移的肿瘤基因治疗具有重要的临床意义。尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinase type plasminogen activator,uPA)也简称尿激酶(urokinase),它的过表达与肿瘤的侵袭与转移密切相关,uPA由肿瘤细胞或其他细胞产生分泌,通过与肿瘤细胞表面的特异性受体uPAR结合激活纤溶系统,导致细胞外基质降解,从而促进肿瘤的侵袭与转移。通过反义核酸、核酶等技术抑制uPA的表达,可以抑制肿瘤细胞的侵袭能力。自从1998年被阐明以来,RNA干涉技术一直是分子生物学研究的热点,并且发展成为研究基因功能和肿瘤基因治疗的重要工具。采用RNA干涉的方法抑制目的基因的表达,不仅具有较高的效率,而且具有严格的序列特异性。尤其是近年来siRNA表达载体的出现更加促进了这项技术的应用。通过RNA干涉的方法对在肿瘤侵袭转移过程中的关键分子进行抑制,可望...  (本文共113页) 本文目录 | 阅读全文>>

复旦大学
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Duffy抗原趋化因子受体(DARC)抑制人乳腺癌细胞的生长和肺转移

目的:探讨Duffy抗原趋化因子受体(DARC)对人乳腺癌细胞成瘤性和转移的影响及其作用机制。方法:采用RT-PCR和western blot方法检测不同的人乳腺癌细胞系DARC的表达,对DARC低表达的细胞进行DARC cDNA的稳定转染,以构建DARC稳定过表达的MDA-MB-231细胞(MDA-MB-231-DARC)和MDA-MB-435肺高转移潜能细胞株(MDA-MB-435HM-DARC)。体外实验中,观察DARC过表达对细胞生物学行为的影响;分别在基因水平和蛋白质水平检测DARC的配体CXCL8(IL-8)和CCL2(MCP-1,JE)浓度的变化;体内实验中,首先建立人乳腺癌裸鼠原位移植瘤模型,观察移植瘤生长曲线和肺表面转移灶,ELISA方法检测CCL2浓度的变化,RT-PCR和western blot方法检测瘤内MMP-9浓度的改变,免疫组化方法标记移植瘤内新生血管(CD34),计数MVD:随机挑选复旦大学附属肿...  (本文共89页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国医科大学
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Apigenin对人乳腺癌细胞VEGF表达的影响及相关作用通路

Apigenin对人乳腺癌细胞VEGF表达的影响及相关作用通路目的乳腺癌是女性主要恶性肿瘤之一,有易复发和多途径转移的特性。虽然,对参与乳腺癌进展的机制并不完全清楚,但越来越多的对于一些自分泌和旁分泌的因子对于乳腺癌发生、发展的作用的研究表明,在乳腺癌的发展过程中,血管内皮生长因子(VEGF)发挥重要作用。抑制VEGF在肿瘤血管生成及生长中的作用已成为乳腺癌治疗的一个重要靶点。低氧诱导因子(HIF-1)是细胞应激缺氧所产生的转录激活因子。HIF-1在人类许多肿瘤中都高表达,HIF-1是由HIF-1α和HIF-1β两个亚单位构成的异质二聚体,其中α亚单位受氧浓度的调节。近来又有研究表明,HIF-1α不单纯受氧浓度的调节。癌基因的突变,如VHL,P53或PTEN功能的缺失,都能诱导HIF-1α的表达。生长因子,细胞因子及其他信号分子都能通过激活PI3K/AKT或MAPK途径而刺激HIF-1α的合成。P13K是一个异二聚体酶,AKT是...  (本文共76页) 本文目录 | 阅读全文>>

重庆医科大学
重庆医科大学

RNA沉默CXCR4与乳腺癌侵袭、转移的相关性实验研究

第一部分shRNA-CXCR4对人乳腺癌细胞基质细胞衍生因子-1受体CXCR4基因表达的影响目的:探讨shRNA- CXCR4对人乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435s CXCR4基因表达及蛋白表达的影响。方法:通过shRNA-CXCR4沉默CXCR4基因后,RT-PCR,Western-blot检测三株人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435s的CXCR4mRNA及其蛋白的表达。结果:shRNA-CXCR4作用于人乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435s后能明显抑制CXCR4基因的mRNA及蛋白表达水平(P0.05)。结论:shRNA-CXCR4能特异性抑制乳腺癌细胞的CXCR4mRNA及其蛋白的表达。第二部分shRNA-CXCR4作用于CXCR4基因后对乳腺癌细胞增殖活性的影响目的:探讨shRNA- CXCR4对人乳腺癌细胞株MCF-7、MD...  (本文共93页) 本文目录 | 阅读全文>>

第四军医大学
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针对HER2的RNA干涉对人乳腺癌细胞生长的影响

RNA干涉(RNA interference,RNAi)是一种广泛存在于高等植物和动物中的由双链RNA介导的转录后基因沉寂(PTGS)现象。外源的双链RNA(dsRNA)在细胞内一种被称为Dicer的核酸酶的作用下,首先被剪切成含19-23个核苷酸对的小RNA片段,称为小干涉RNA(small interfering RNA ,siRNA)。后者与Dicer和其他一些蛋白质共同构成RNA诱导的沉寂复合物(RISC),依靠碱基互补规律识别与siRNA同源的mRNA分子,并将它们降解。目前RNAi作为一种高效特异地抑制基因表达的新技术,已广泛应用于基因功能和基因治疗等研究中。在肿瘤基因治疗中,通过人工合成特定癌基因靶向的siRNA,或构建上述siRNA的表达载体,并将它们导入肿瘤细胞中,可以特异性地抑制目的基因的表达。HER2/neu是表皮生长因子受体家族的第二位成员,表皮生长因子受体(EGFR)家族,也称为HER或ErbB2家族,...  (本文共64页) 本文目录 | 阅读全文>>