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八肋游仆虫中心蛋白性质和功能的研究

中心蛋白是EF-hand钙结合蛋白,是钙调蛋白超家族中的一员。它含有4个EF-hand结构基元,每个结构基元能结合一个钙离子,是很多生物体(如藻类、酵母、原生动物、高等植物、哺乳动物等)的中心体(基体或纺锤极体)的重要组成部分。中心蛋白在细胞的正常分裂以及包含中心蛋白的纤维系统收缩中起重要作用。八肋游仆虫是一种进化上处于特殊地位的单细胞真核生物,存在于八肋游仆虫的中心蛋白是由168个氨基酸残基组成的单肽链酸性蛋白质,分子量约为20KD,不含半胱氨酸和色氨酸。对该中心蛋白的研究,不仅有助于阐明低等真核生物的细胞分裂、细胞运动等重要生命活动过程的本质,而且将其用作稀土离子进入生物体细胞内的主要靶蛋白的模型,对深入研究稀土生物学效应的化学基础具有重要意义。首先利用PCR技术,在野生型八肋游仆虫中心蛋白的基础上得到4个定点突变体(G115W、D37K、D73K、D146K)和2个截短中心蛋白分子(P23、P123)的基因片段,序列测定表  (本文共133页) 本文目录 | 阅读全文>>

山西大学
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Glu101在八肋游仆虫中心蛋白构象及生物功能发挥中的作用

中心蛋白(centrin)分子量约为20 kDa,属于钙调蛋白超族,含有四个保守的EF-手结构域(helix-loop-helix),每个结构域可结合一个钙离子。它定位于中心体及细胞核、膜间空间等部位,在中心粒的复制和中心基体纤维的收缩中发挥重要作用。突变氨基酸的研究方法被广泛用来考察蛋白中某些重要氨基酸在蛋白构象及生物功能发挥中的作用。其中紫外照射突变法的优点是可以得到大量突变型蛋白,为研究工作提供较多的实验样本。但其突变结果具有不可知性,需要进行系列的筛选工作。定点突变法以其明确的突变位点以及能够得到高纯度突变蛋白等优点而在许多研究工作中被采用。基于对150多种钙调蛋白超族成员序列的分析,E-helix链的规范序列可以表示为En$$nn$$n。其中,E表示Glu,n表示疏水性氨基酸,$表示任意氨基酸。根据达尔文生物进化理论,我们推测E-helix链起始的Glu可能对centrin的正常构象和功能的发挥起着重要作用。本文用分子...  (本文共68页) 本文目录 | 阅读全文>>

山西大学
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八肋游仆虫中心蛋白的研究

微管组织中心(MTOC)组织真核生物细胞中微管的数量,方向和极性。MTOC复制缺陷将阻断双极纺锤体的形成,使细胞分裂终止在G2/M期,相反,过量的MTOC又会导致癌症的产生。MTOC中含有大约150-200种蛋白,中心蛋白(centrin)是其中之一。中心蛋白是一种约19.5 kDa的酸性钙结合蛋白,属于钙调蛋白超家族。中心蛋白广泛存在于真核生物中,如藻类、酵母、原生动物、高等植物、哺乳动物等。这种蛋白的高保守性和在生物界的普遍存在表明它对于正常细胞的功能是必不可少的。中心蛋白参与了MTOC的复制和分裂,它的突变和缺失会导致细胞的异常分裂。中心蛋白还在依赖于它的纤维系统的收缩中起重要作用。原生动物八肋游仆虫(Euplotes octocarinatus)是一种进化上处于特殊地位的单细胞真核生物,这类生物中无典型的中心粒和中心体存在,细胞分裂时纺锤体的微管由核液(Karyolymph)中的微管组成中心形成。对这类生物的中心蛋白的研...  (本文共129页) 本文目录 | 阅读全文>>

山西大学
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八肋游仆虫中心蛋白片段分子与金属离子作用的光谱研究

中心蛋白(centrins)是一种约20 kDa的酸性钙结合蛋白,属于钙调蛋白大家族。中心蛋白广泛存在于真核生物中,如藻类、酵母、原生动物、高等植物、哺乳动物等。中心蛋白在中心粒的复制和中心基体纤维的收缩中起重要的作用,与细胞中纤维的收缩、细胞的分裂等密切相关。到目前为止,关于中心蛋白的研究主要集中在其生物功能和结构上。近年来,稀土资源的不断开发和利用增加了稀土元素进入生命体的途径和机会,这使得稀土元素长期使用的安全性和对生物功能的影响受到人们的普遍重视。钙离子与稀土离子具有相近的配位环境和配位结构,因此,稀土元素进入食物链必将影响钙离子作用的发挥。中心蛋白含有四个EF-hand结构域,每个结构域均可结合一个钙离子,所以它可能是稀土离子在生物体内实现其生物效应的载体。原生动物八肋游仆虫(Euplotes octocarinatus)是一种进化上处于特殊地位的单细胞真核生物,对该生物的中心蛋白的研究,有助于阐明低等真核生物的细胞分...  (本文共72页) 本文目录 | 阅读全文>>

第二军医大学
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蜂毒素抗肝细胞癌血管生成的实验研究

目的探讨蜂毒素抗肝癌血管生成的作用及其机理。方法MTT检测蜂毒素对肝癌细胞和血管内皮细胞的增殖抑制作用,FCM检测细胞凋亡及细胞周期,Transwell小室及Matrigel实验检测内皮细胞迁移和小管形成。CAM实验观察蜂毒素对血管生成的影响。观察蜂毒素对裸鼠皮下移植瘤生长的影响。ELISA检测IL-8、VEGF和bFGF浓度,RT-PCR检测VEGF mRNA和bFGF mRNA的表达。IHC和Western blot检测MVD及VEGF、bFGF、HIF-1α和NF-κB的表达。结果蜂毒素能够抑制肝癌细胞和血管内皮细胞增殖,诱导内皮细胞凋亡,阻滞细胞周期于S期。抑制血管内皮细胞迁移和小管形成。抑制CAM及裸鼠肝癌血管生成,进而抑制肝癌生长。降低肝癌细胞及血管内皮细胞VEGF和bFGF表达。通过影响NF-κB活性而下调VEGF、bFGF和HIF-1α的表达。结论蜂毒素具有抑制肝癌生长的作用,其作用机理可能与抗肝癌血管生成有关。  (本文共158页) 本文目录 | 阅读全文>>

《生物化学与生物物理学报》1960年30期
生物化学与生物物理学报

低浓度蜂毒素在溶液中的自聚集

低浓度蜂毒素在溶液中的自聚集韩学海,隋森芳(清华大学生物科学与技术系生物膜与膜生物工程国家重点实验室,北京100084)关键词蜂毒素;自聚集;多肽构象蜂毒素(melittin)是由26个氨基酸残基组成的多肽,是欧洲蜜蜂(Apismellificera)毒汁中的主要成分之一,自从1967年发现并从毒汁中分离出以来[1],对其结构与功能进行了广泛而深入的研究[2],但是蜂毒素与膜作用过程及引起膜通透性改变的分子机制还不十分清楚。我们实验室先后对蜂毒素的插膜能力及插膜过程的构象变化进行了研究并发现其与膜作用的不同阶段的构象不同[3],对阐明蜂毒素与膜的作用有一定意义。蜂毒素具有较高的水溶解性,研究通常表明较高浓度的蜂毒素在高pH、高离子强度条件下多以自聚集的四聚体状态存在。但是,1μg/ml或更低浓度的蜂毒素即可引起红细胞溶血及模型膜上电压门控型通道的出现。单体及四聚体状态蜂毒素的构象有明显的不同,这样单体及四聚体蜂毒素的生物学功能比...  (本文共5页) 阅读全文>>

中国人民解放军海军军医大学
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负载蜂毒素和蟾毒灵的复方免疫脂质体的构建及其抑制肝癌Sorafenib耐药协同效应机制研究

研究目的原发性肝癌是受到全球关注的重大癌症之一,我国是一个肝癌大国,肝癌的发病率在各类肿瘤中排第4位(每年466,100新发病例),死亡率位列第3位(每年422,100死亡病例),新发病例和死亡病例数量均占全球总数的一半以上,是一个肝癌大国肝癌不仅在癌症中致死率较高,还给社会家庭和个人带来沉重的经济负担。Sorafenib是中晚期肝癌患者的临床一线用药,但却容易出现耐药,获得性耐药通常在6个月内发生。本课题组在此前的研究过程中发现蟾毒灵(Bufalin)和蜂毒素(Melittin)均具有非常强的抗肝癌作用,且两者的作用机制不同;两者的联合应用有望发挥抗肝癌协同作用,特别是有望发挥抑制肝癌Sorafenib耐药的协同作用。然而,蟾毒灵和蜂毒素的联合使用必须克服两个关键问题:(1)蜂毒素具有强烈的溶血副作用;(2)蟾毒灵的水溶性较低。有鉴于此,我们选择了复方免疫脂质体技术,在实现蜂毒素和蟾毒灵的共负载的同时,进一步实现肝癌细胞的靶向...  (本文共191页) 本文目录 | 阅读全文>>