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孕妇血浆胎儿DNA检测及其在产前诊断中的应用

产前诊断是预防遗传病的重要手段。目前,产前诊断所使用的材料一般是通过羊膜穿刺术等损伤性手段获取,这些方法对母儿有一定的危险性。孕妇外周血中胎儿细胞的发现为非损伤性产前诊断带来希望,但仍存在操作复杂、仪器试剂昂贵、胎儿细胞含量低等一些无法克服的问题,限制了其在临床产前诊断中的应用。1997年有学者发现在母体血浆中存在着游离胎儿DNA[1],这一发现为非损伤性产前诊断开辟了新的途径。本研究以母体血浆中提取的DNA为材料,通过PCR扩增Y染色体上的特异序列检测胎儿DNA的存在及其消长规律,并应用21号染色体的4个短串联重复序列(STR)位点为遗传学标记,检测孕妇外周血浆中的胎儿父源特异性序列,以鉴定女性胎儿DNA的存在。1对象和方法1.1对象选择2002年3~12月在青岛市市立医院、青岛市计划生育研究所就诊的不同孕周(6~40周)孕妇63例,各取外周血2 mL(ACD抗凝),孕妇年龄24~30岁。其中,孕早期18例,孕中期30例,孕晚...  (本文共3页) 阅读全文>>

山东大学
山东大学

孕妇血浆中胎儿DNA和比较基因组杂交技术在产前诊断中的应用研究

第一部分孕妇血浆中胎儿DNA在无创性产前诊断中的应用研究产前诊断分为有创性和无创性两种,传统的产前诊断取材方法包括绒毛取样和羊膜腔穿刺以及脐带穿刺均属创伤性手段,容易造成流产、胎盘出血、宫内感染等并发症。无创性产前诊断已成为当前研究热点。无创性产前诊断的取材以往多以母血中胎儿细胞为研究对象,但其数量极少,难以有效地分离纯化和富集。近年来孕妇外周血中游离胎儿DNA的发现为无创性产前诊断开辟了新领域。目前,游离胎儿DNA已经广泛用于性染色体连锁疾病、胎儿RhD血型的检测、妊娠相关疾病、胎儿染色体病等的产前诊断研究中。然而,有些研究结论如孕妇外周血中胎儿DNA含量与常见染色体病的关系尚不完全一致,特别是对国内孕妇群体的研究报道很少,并且对于孕妇外周血中游离胎儿DNA的组织来源和释放机制尚不清楚。另外,目前利用游离DNA产前诊断胎儿血型的研究均为RH系统,而在我国ABO母儿血型不合发病率高,是新生儿溶血病的主要原因,ABO血型的产前诊断...  (本文共150页) 本文目录 | 阅读全文>>

青岛大学
青岛大学

孕妇外周血胎儿DNA的检测及其在Down's综合征产前诊断中的应用

目的:检测孕妇外周血中游离胎儿DNA及其消长规律,探讨应用孕妇血浆和血清中胎儿DNA对Down's综合征产前诊断的可能性。方法:①应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)对孕妇外周血中游离胎儿DNA的SRY基因进行检测分析。②应用PCR技术、非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、硝酸银染色等技术对8例正常对照个体外周血DNA、11例Down's综合征患者外周血DNA、63例孕妇外周血胎儿DNA的21号染色体核心区(21q22.1-21q22.2)内及其附近的4个短串联重复序列(short tandem repeat,STR)位点的D21S11、D21S1411、D21S1412、D21S1414进行多态性检测和分析。③用4个STR多态位点对Down's综合征高危孕妇外周血胎儿DNA进行多态性检测和分析。结果:①在怀男胎的孕妇血浆和血清中,从孕7周到分娩后2h内都可检测到胎儿特异性SRY基因。不同妊娠时期...  (本文共38页) 本文目录 | 阅读全文>>

东南大学
东南大学

胎儿核酸检测分析方法的研究

产前诊断一直人类遗传学领域的研究重点,目前临床上常用的诊断方法主要有羊水穿刺和绒毛膜诊断等,这些方法对产妇和胎儿均有较大的危害,而且操作相对繁琐。近年来胎儿DNA的发现为这一问题的解决提供了可能,使得无创性产前诊断不再是梦想。随后的研究证实胎儿RNA也存在于孕妇的外周血液中,这为该研究的进一步发展提供了新的途径。尽管无创性产前诊断在近年来取得了较大的进展,但仍然与临床实际应用存在着很大的差距,特别是在胎儿核酸的高灵敏度和高通量检测方面。为此,我们以不同怀孕时期的孕妇外周血液为研究对象,结合基因芯片技术,发展了胎儿DNA和RNA的高通量检测技术并且应用于胎儿相关基因的检测分析中。本论文的主要研究内容有:胎儿核酸分离纯化方法的研究;胎儿DNA的扩增检测方法的研究;胎儿RNA定量检测分析方法的研究;孕妇血浆DNA甲基化的初步研究。具体内容如下:1.孕妇血浆核酸提取方法的研究我们以现有的核酸提取分离方法为基础,结合孕妇外周血液中胎儿核酸...  (本文共128页) 本文目录 | 阅读全文>>

《实用预防医学》2007年05期
实用预防医学

孕妇血浆中游离胎儿DNA在产前诊断中的应用

传统的产前诊断的取材技术主要有羊水穿刺,绒毛膜活检和脐静脉穿刺术,它们对母体和胎儿均有一定的危险性,有发生感染、出血甚至流产的可能。一些非侵入性产前检查方法,如分析血清物质或超生波检查,对胎儿和母亲没有任何危险,但敏感性低。微创伤性乃至非创伤性获取胎儿遗传物质进行产前基因诊断是临床一直追求的目标。胎儿有核细胞可存在于孕妇血循环中,并已被应用于非创伤性产前诊断,但胎儿细胞的富集效率低和过高的母体背景限制了其在临床的广泛应用。1997年Lo等[1]首次证实孕妇血浆中存在着胎儿来源的游离DNA,为利用孕妇血浆进行非侵入性产前诊断提供了一条崭新的途径。本研究应用巢式聚合酶链反应(nested-PCR)技术检测孕妇外周血浆中游离胎儿DNA的性别决定基因(sex-determining region of the Y,SRY),并引入内参ATL1基因研究利用其进行胎儿性别鉴定的可行性。1资料与方法1.1研究对象血标本来自于中南大学湘雅二医院...  (本文共3页) 阅读全文>>

《山东医药》2009年26期
山东医药

孕妇血浆游离胎儿DNA检测在唐氏综合征筛查中的应用价值

唐氏综合征(DS)是最常见的染色体病之一,是产前筛查的重点。临床上曾用孕中期母体血清中的某些指标筛查DS,但阳性率较低,特异性不高,且有一定的假阳性率(5%~10%)。孕妇血浆中游离胎儿DNA(fDNA)的发现[1]为产前筛查DS开辟了一条新思路。本研究采用TagMan探针实时定量RT-PCR技术,检测了正常男胎孕妇、DS男胎孕妇和DS高危男胎孕妇血浆中的游离fDNA。现将结果报告如下。1资料与方法1.1临床资料选择2005年6月~2008年2月在山东大学附属省立医院和济南市妇幼保健院接受产前检查的孕中期单胎、男胎孕妇48例,年龄(33.5±3.2)岁,孕(18.4±2.4)周,体质量(60.8±4.9)kg。其中DS孕妇5例、DS高危孕妇21例、正常孕妇22例。所有孕妇均无内、外科合并症及吸烟史。以3例未孕且无妊娠史的健康女性作为阴性对照,男性基因组DNA定量标准品作为阳性对照。1.2方法1.2.1高危DS及DS的确定利用张江...  (本文共2页) 阅读全文>>

《临床检验杂志》2006年03期
临床检验杂志

检测孕妇血浆中游离胎儿DNA行产前诊断的研究进展

及早获取胎儿组织进行产前诊断,对于有效预防和控制新生儿遗传性疾病的发病率及死亡率十分重要。传统的产前获取胎儿组织的方法,如羊膜腔穿刺和绒毛膜取样等均为创伤性检查,对胎儿和孕妇都有一定的危险。1997年,肠等川首次证实孕妇血浆(清)中存在游离的胎儿DNA(fetal DNA,fDNA),并将其用于性连锁遗传病的产前诊断,为无创性产前诊断开辟了新的途径。本文就近年来利用血浆fDNA行产前诊断的进展及存在的问题作一简要综述。1孕妇血浆fDNA的基本特性孕妇血浆中fDNA的基本特性为:①含量高于孕妇血液中胎儿细胞的DNA。孕妇血浆总的游离DNA是fDNA和母体自身DNA的混合物。妊娠早期fDNA的平均含量为25 .4基因当量/ml(范围3.3一69.4),妊娠晚期平均为292.2基因当量/ml(范围76.9一769),分别占孕妇血浆总DNA的3.4%和6.2%,分别是孕妇血液中胎儿细胞DNA的970倍和775倍[z]。②含量存在一定的变...  (本文共3页) 阅读全文>>