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马立克氏病病毒(MDV)814株B抗原基因的克隆及部分序列分析

马立克氏病病毒(MDV)814株B抗原基因的克隆及部分序列分析宁晓檬,赵晓岩,刘长军,崔洪志,李曦,徐宜为,郭三堆(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,哈尔滨150001)摘要提取感染鸡胚成纤维细胞MDV-I弱毒株814病毒DNA为模板,根据RBIB株gB基因5'及3'两端核苷酸序列设计引物,利用PCR技术扩增了我国MDV-I弱毒株814gB基因(1.9kb),将扩增片段平末端克隆到载体pBluescriptSK中EcoRV位点,经BamHI、HindⅢ酶切鉴定得到不同插入方向的重组质粒。构建扩增片段的酶切图谱及部分序列分析证明与RBIB株gB基因无差异,显示了极高的同源性。本文进一步证明gB基因在MDV不同毒株间是十分保守的。关键词克隆,部分序列,马立克氏病病毒株814,B抗原马立克氏病(MD)是鸡的主要传染病之一。现已证明MDV有3个血清型:致瘤性的强毒株及其致弱毒株为血清I型(MDVI),非致瘤性MDV为血清Ⅱ型(MDV2),...  (本文共5页) 阅读全文>>

《病毒学报》1993年01期
病毒学报

应用聚合酶链反应克隆马立克氏病病毒A抗原基因

为T在我国开展鸡马立克氏病病毒(Marek产5 disease virus,MDV)基因工程疫苗的研究,我们首先克隆了该病毒主要抗原之一的A抗原基因,以适应于表达载体的构建。Caussens等人帅确定了A抗原基因的位置,测定了全基因序列。A抗原羞因位于MpV基因组BamHIB片段PvuH一E。。RI酶切后的2.2kb片段中,我们已获得该片段的克隆株,命名为pBSA2.2k。〕。现在面临的间题是要得到完整的A抗原基因并能用于表达载体的构建。根据已知序列,我们设计了基因两端的引物进行体外聚合酶链反应。同时考虑到A扰原是分泌型糖蛋白抗原.基因前端有78bp的信号肤编码序列,因此设计了两套PcR引物,一套包括信号肤编码序列,克隆的基因用于真核表达系统,另一套不包括信号肚编码序列,克隆的基因用于原核表达系统。 将克隆后的用于原核表达系统的A抗原基因(简称1 .4kA基因),分步克隆于噬蔺体M13mp18进行全长序列分析,进一步验证PCR法...  (本文共5页) 阅读全文>>

《生物工程学报》1993年01期
生物工程学报

马立克氏病病毒A抗原基因在原核系统中的表达

鸡马立克氏病是由病毒(Marek,5 Diseasevlrus,MDv)引起的鸡的一种传染性肿瘤病。目前主要靠细胞苗进行预防,这种方法不仅麻烦而且也不经济。随着对MDV的深入认识和近几年来生物技术的兴起,国外已在MDV基因工程苗方面取得了很大成绩。我国还刚刚起步。 免疫扩散试验可将MDV抗原分为A、B、C三类。A抗原基因大小为1,440bP编码480个氨基酸,B抗原基因川,磷蛋白38kDa基因也已定位测序,有文献报道唯有磷蛋白38kDa,基因部分片段表达成功。为了发展我国的MDV工程苗,我们在1988年根据当时的文献资料(A基因序列),首先开展了MDVA抗原基因的表达研究,该基因由PCR法克隆获得。材料与方法 (一)材料 pKK223一s质粒、E.eo乙‘JMios由复旦大学遗传所基因合成室提供,pBSAI.4k克隆株是PCR法克隆的MDVA抗原基因克隆株,本单位自制川,限制酶EeoRI、pstl系BoeingherMannhe...  (本文共4页) 阅读全文>>

东北农业大学
东北农业大学

表达马立克氏病病毒糖蛋白B基因的重组火鸡疱疹病毒的构建

马立克氏病(MD)是由马立克氏病毒(MDV)引起的一种鸡的淋巴组织增生性疾病,是鸡的三大主要传染病之一。对它的研究对养禽业有很重要的经济学意义。本研究从感染致弱的Ⅰ型马立克氏病病毒(MDV)814株的细胞中提取病毒基因组DNA,以digoxingenin标记强毒GA株MDV糖蛋白B(gB)基因片段作为探针,进行Southern-blot杂交定位。将包含MDV814株gB基因的基因组片段克隆pUC19质粒中。酶切鉴定后,进行序列分析。结果表明该gB基因具有高度的保守性,编码区序列同已发表的Ⅰ型马立克氏病病毒gB基因序列完全一致,但启动子区有差异。将SV_(40)早期启动子控制的大肠杆菌β-半乳糖苷酶(LacZ)基因插入到火鸡疱疹病毒(HVT)A抗原(gA)基因,构建了HVT转移载体质粒(pgALacZ)。pgALacZ与HVT DNA共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),获得了稳定表达LacZ基因产物的重组HVT(LacZ-rHVT)。...  (本文共45页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中山医科大学学报》1970年40期
中山医科大学学报

日本血吸虫成虫抗原基因的克隆和序列分析

日本血吸虫成虫抗原基因的克隆和序列分析①陈代雄②刘启文詹希美(中山医科大学寄生虫学教研室;广州,510089)摘要本实验在用感染兔血清和单克隆抗体对日本血吸虫(大陆株)成虫cDNA表达文库进行筛选的基础上,对筛选出的阳性克隆插入片段DNA进行了亚克隆和序列分析。主题词血吸虫,日本/遗传学;基因;克隆,分子;序列分析,DNA中图号R383.24血吸虫病是一种世界性分布的人兽共患寄生虫病,它发病率高,危害严重。多年来人们一直在探寻能对它进行有效控制的实用防治方法,目前一般认为血吸虫分子疫苗的研制和应用,能为达到这个目的提供一条充满希望的途径[1]。使用抗体探针对血吸虫表达基因文库进行筛选,是获得抗血吸虫病疫苗抗原成分的常用方法。本实验在用感染兔血清和单克隆抗体对日本血吸虫(大陆株)成虫cDNA表达文库进行筛选的基础上,对筛选出的阳性克隆插入片段DNA进行了亚克隆和序列分析,报道如下。1材料与方法1.1材料日本血吸虫成虫cDNA表达文...  (本文共4页) 阅读全文>>

《江西畜牧兽医杂志》2000年03期
江西畜牧兽医杂志

马立克氏病病毒的分子生物学研究进展

马立克氏病病毒(MarekDiseaseVirus,MDV)主要侵害鸡性腺、神经、肌肉、虹膜及各内脏器官,引起单个或多个组织器官的淋巴细胞增生和单核细胞浸润。MDV所引起的疾病──马立克氏病是危害世界养禽业最严重的传染病之一,也是世界上第一个用疫苗预防的病毒性肿瘤获得成功的范例。MDV属于疮疹病毒科(Herpesviridae),又称鸡疮疹病毒2型(AvianherPesvirus2)、神经淋巴瘤病毒(Neurolymphomatosisvirus)、鸡麻痹病毒(Fowlparal-ysisvirus)。根据血清学反应不同,可将MDV相关的疤疹病毒划分为3个不同的血清型:血清1型包括引起高发性内脏或神经肿瘤的MDV及其传代后失去致病性的弱毒变异株;血清n型为非致病性自然弱毒株;血清皿型为用于疫苗的火鸡疮疹病毒(HV刀,亦无致病性l’‘]。由于MDV的危害甚大,世界各国对其都很重视。随着单克隆抗体(MCAb)、核酸杂交,聚合酶链反...  (本文共4页) 阅读全文>>