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丙型肝炎病毒包膜区E2基因的克隆、表达及其感染者中E2抗体检测的意义

病毒性丙型肝炎是危害人类健康的重要传染病 ,患者中半数以上的形成慢性化感染 ,十分之一的可逐步发展为肝硬化和肝癌[1] 。到目前为止 ,还无特效药物及疫苗对丙型肝炎进行治疗和预防。在HCV基因组中 ,外膜蛋白E2区基因变异最大 ,其N端的高变区 (HVR)是体内免疫系统作用的主要靶目标 ;HCV外膜糖蛋白分子上可能具有中和表位 ,诱导机体产生中和抗体 ,保护机体免受病毒攻击。笔者对HCVE2区基因进行了克隆、表达 ,并将纯化的E2区蛋白用于HCV感染者血清的抗体检测 ,现将结果报告如下。1 材料与方法1.1 血清标本 进行HCVE 2基因克隆表达的血清采自河北省固安县 1名HCV携带者 (原为献血者 ) ;HCV阳性血清采自四川省什邡市血站献血者 ,经RIBA 2 (Chiron公司 )确证为阳性[2 ] ;阴性血清由军事医学科学院五所提供。1.2 质粒与菌株 克隆质粒 pBluescriptⅡSK和菌株E .Colistrai...  (本文共3页) 阅读全文>>

《生物工程学报》2001年04期
生物工程学报

丙型肝炎病毒的危害及其防治研究

丙型肝炎病毒 (HCV)是肝炎病毒家族的重要成员之一 ,全球性地危害人体健康 ,据WHO报告 ,“丙肝”病毒已感染了约 1 7亿人 ,是HIV(艾滋病病毒 )感染的 4倍 ,也是全球性肝损伤、肝癌的主要发病原因 ,在法国 ,有 1%人口感染“丙肝”病毒 ,它不仅引起急性肝炎 ,而且 80 %的带毒者会逐渐发展成慢性肝炎 ,其中 2 0 %最后会出现肝硬化 ,或原发性肝细胞肿瘤。在俄国 ,研究人员发现“丙肝”病毒传染给寄主 ,其寄生性不仅伤害患者肝脏 ,而且也会破坏神经系统。此病毒在患者体内潜伏 15~ 2 0年 ,一旦确诊 ,患者很可能已转为慢性肝炎 ,甚至出现肝硬化 ,实验证明 ,这种病毒破坏神经系统难以修复 ,严重危及人的生命安全。为诊断和治疗“丙肝”以恢复健康 ,我国第二军医大学研究人员在国际上首次构建成功中国丙肝病毒基因文库 ,并率先研制成功新一代“丙肝”诊断试剂盒 ,将为“丙肝”患者诊断与治疗提供较为方便的途径。为了更...  (本文共1页) 阅读全文>>

《中华医学杂志》2001年01期
中华医学杂志

丙型肝炎病毒干扰素敏感决定区基因“盒”的研究

目前公认对丙型肝炎治疗有效的药物是干扰素 ,其最终疗效亦只有 2 0 %左右。影响干扰素疗效的因素是多方面的[1] ,其中位于丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白NS5A的第2 2 0 9至 2 2 48位氨基酸序列与干扰素疗效密切相关 ,该区域称为干扰素敏感决定区 (ISDR) [2 ,3] 。干扰素的抗HCV作用机理并不完全清楚 ,有报道认为干扰素诱导的细胞内抗病毒作用部分是由干扰素诱导的RNA蛋白激酶 (PKR)介导的[4 ,5] 。我们构建了含不同ISDR的基因“盒” ,在体外表达相应的蛋白质 ,探讨它们与PKR的关系 ,试图从分子水平了解HCV对干扰素的耐受机制。一、材料与方法1.材料 :质粒PRSET购自英国Invitrogen公司 ;DNA连接酶 ,pfuDNA聚合酶 ,BamHⅠ ,XhoⅠ ,NheⅠ ,XbaⅠ ,dNTP购自德国BM公司 ;BL2 1(DE3)菌株 ,蛋白质分子量标准 ,体外转录和翻译系统购自...  (本文共2页) 阅读全文>>

《中华医学杂志》2001年06期
中华医学杂志

丁型肝炎病毒核酶在分子水平对丙型肝炎病毒RNA的反式剪切活性

锤头状核酶 (hammerheadribozyme)和发夹状核酶 (hairpinribozyme)能特异性定点剪切靶RNA分子 ,可用于抗病毒、抗肿瘤等基因治疗[1] 。但假结样核酶 (pseudoknotribozyme) ,如丁型肝炎病毒 (HDV )核酶 ,包括基因组核酶 (genomicribozyme)和抗基因组核酶 (antigenomicribozyme) ,是否具有抗病毒等活性 ,迄今研究鲜见[2 ] 。本研究旨在评价基因组核酶对丙型肝炎病毒 (HCV)RNA在分子水平的剪切活性。一、材料与方法1.核酶cDNA及引物由上海Sangon生物工程公司合成、纯化。2 .底物的转录模板 :质粒pHCV neo由我所王小红博士惠赠 ,含丙型肝炎病毒完整 5′端非编码区及部分C区 (HCVRNA 5′ NCR C)cDNA ,长 430核苷酸 (nt) ,与毕胜利等[3] 报道的中国人HCVcDNA序列一致。用PCR法制备...  (本文共2页) 阅读全文>>

《中国输血杂志》2001年S1期
中国输血杂志

荧光定量PCR检测血液中的丙型肝炎病毒(HCV)

荧光定量PCR检测...  (本文共1页) 阅读全文>>

《临床医药文献电子杂志》2016年58期
临床医药文献电子杂志

核酸提取方法对丙型肝炎病毒检验结果的影响

目前,临床中主要采取核算提取法来检测丙型肝炎(HCV)病毒,从而检查受检者是否发生感染,进而确的其是否属于HCV患者[1]。通常情况下,氯仿异丙醇法和固相吸附法均属于两种常用于提取HCV患者的核酸方法,能够为受检者的血液检查分析提供有效依据。本次研究为了对比这两种方法对HCV患者病毒检查结果的影响,选取本采血中心接收的100例HCV患者展开分组研究,现报告如下。1资料与方法1.1一般资料选取我站2015年4月~2016年4月接受的HCV患者100例进行分组研究,随机抽取100例进行分组研究,即试验组50例,常规组50例,试验组患者采取固相吸附核酸提取法检验,常规组采取氯仿-异丙醇核酸提取法检验。试验组男30例,女20例;年龄22~64岁,平均(48.5±3.0)岁。常规组男32例,女18例;年龄23~62岁,平均(48.0±2.5)岁。两组HCV患者的基本资料,如性别、年龄等对比,差异无统计学意义(P0.05)。1.2方法两组患...  (本文共2页) 阅读全文>>