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人类P53下游基因一致性序列研究

0引言p53基因是人类肿瘤中突变频率最高的肿瘤抑制基因,其表达产物P53蛋白在正常细胞内主要涉及细胞周期负调控、DNA复制与修复、细胞凋亡、抑制血管生成以及应答细胞胁迫等功能[1-4]。P53蛋白与p53下游基因调控区域内的特异性序列结合,能激活或抑制这个基因的转录,从而达到生物学效应。虽然p53基因与多种基因之间均存在相互作用,而且已经克隆了一些p53基因下游基因,但其作用的具体生理生化通道还不十分清楚。已报道的p53下游基因有p21/waf1,gadd45,14-3-3-sig-ma,bax,fas/apol,killer/dg5,ig3,tsp1,igf-bp3等[5]。Tokino等发现57个不同的人类P53结合位点,并估计在人类基因组中大概还有200~300个类似的结合位点[6],这说明大部分p53下游基因尚未被鉴别。人类基因组序列测定完成后,采用计算机方法预测p53下游基因成为有效且快速的方法[7,8],总结分析p5...  (本文共4页) 阅读全文>>

中南大学
中南大学

PAP1和PAP2基因的克隆及其相关生物信息学研究

目的:肿瘤抑制蛋白P53是一个通用转录因子,通过激活或抑制其下游基因的表达,在应答诸如癌基因表达、缺氧以及DNA损伤等细胞胁迫信号方面起着关键作用。P53及其下游基因组成了一个复杂的调控网络,了解该调控网络无论对于理解P53的生理功能、肿瘤临床基因治疗或是药物发现等都具有十分重大的意义。而了解P53调控网络的关键是鉴定p53下游基因。本研究首先利用分子生物学的方法克隆新的p53下游基因,并对其功能进行初步研究;其次利用生物信息学方法对整个人类基因组DNA中存在的p53下游基因进行预测分析;从而进一步完善p53基因调控网络。方法:利用哺乳动物基因诱导表达系统,Tet-On~(TM)基因表达系统,以人脑胶质瘤细胞株U251为实验材料,建立p53基因可诱导表达的转p53基因细胞系,并构建p53基因过度表达的cDNA文库。通过差异显示、测序、同源性比较及cDNA文库筛选等方法克隆新的p53下游基因。对新克隆的p53下游基因利用生物信息学...  (本文共220页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国医科大学
中国医科大学

P53基因多态性及其差异表达与低位直肠癌发病风险及生物学行为及预后的关联研究

目的:p53基因是最早期发现的抑癌基因中的一员,是目前已知的与人类恶性肿瘤关联度最密切的基因之一。p53基因定位于人染色体短臂17p13.1区,全长约16~20Kb,由11个外显子和10个内含子共同构成,编码393个氨基酸组成的核内磷酸蛋白,其转录产物为25Kb mRNA。野生型p53(wtp53)是抑癌基因,其在包括细胞周期、细胞凋亡、衰老、基因稳定性及血管生成的抑制等多种细胞过程中均起着至关重要的作用。作为抗癌防御机制的主要组成部分,p53在人类肿瘤中通常发生了突变。细胞通常被突变型p53(mtp53)所刺激进行分裂,发挥癌基因作用。已有研究发现,包括呼吸系统、泌尿系统、生殖系统、消化系统等多个系统发生的原发肿瘤都与p53基因突变相关。基因多态性是一种较常见的基因变异。这种变异会导致相同基因编码产物的功能不同、导致对个体对疾病的易感性、对药物的敏感性与耐受性、临床表现的多样性、疾病转归及预后等遗传性状表型不同。研究发现,除了...  (本文共142页) 本文目录 | 阅读全文>>

南京医科大学
南京医科大学

P21、P53基因甲基化在喉癌中的机制研究

研究背景和目的:喉癌是指原发部位在喉部的恶性肿瘤,病理类型主要为喉鳞状细胞癌,常好发于中老年男性,我国东北地区是喉癌的高发区域,手术是其治疗的主要手段。肿瘤的形成是正常细胞在多种致癌因素作用下,在基因水平上失去正常的调控而导致的,包括遗传学和表观遗传学改变。表观遗传学(epigenetics)是相对于遗传学概念而言,在不改变DNA双链序列的前提下,添加相应的修饰基团调控靶基因的表达,包括DNA甲基化、染色质组蛋白的修饰和非编码RNA调控等。DNA甲基化作为表观遗传修饰的重要调控机制,参与机体的重要生理作用,包括肿瘤的发生发展。研究表明,DNA甲基化与喉癌之间关系密切,P21和P53是重要的细胞周期调控基因,但其DNA甲基化作用在喉癌发生发展中的作用仍不清楚。本课题以P21和P53基因为研究对象,从喉癌组织标本入手,详细研究DNA甲基化对P21和P53基因表达调控的作用机制,以期为喉癌在临床上的基因分子水平的治疗提供新的靶点。研究...  (本文共75页) 本文目录 | 阅读全文>>

浙江大学
浙江大学

胃癌FAT10表达与突变p53基因的相关性研究

背景与目的FAT10又被称为双泛素(diubiquitin),属于泛素蛋白家族中的泛素样修饰蛋白(UBLs),是一个分子量为18kDa的包含165个氨基酸残基的蛋白质,由两个泛素样结构域融合而成。FAT10在细胞周期的调控中起到十分重要作用,已被证明能与人纺锤体聚集检测点蛋白(mitotic arrest deficiency 2,MAD2)非共价结合,而此蛋白负责在有丝分裂时保持纺锤体的完整性,MAD2功能受到抑制则导致染色体不稳定,这是许多肿瘤发生的重要特征。已有发现肝癌、宫颈癌、卵巢癌、直肠癌、胰腺癌及小肠腺癌等FAT10表达明显上调,表明FAT10在肿瘤发生中起到一定作用。p53基因是一种肿瘤抑制基因,定位于人类17号染色体短臂,分为野生型p53(wt-p53)和突变型p53(mt-p53)两种,编码p53蛋白。人类一半以上恶性肿瘤都显示出p53基因突变或p53蛋白缺失。p53的突变在胃癌发生发展中也发挥着重要作用,许多...  (本文共93页) 本文目录 | 阅读全文>>

山东大学
山东大学

子宫内膜癌和卵巢癌发病机制研究

子宫内膜癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一。在欧美等发达国家,其发生率位居首位。在我国,其发生率仅次于宫颈癌。目前据统计,随着人口老龄化和人类寿命的延长,子宫内膜癌的发生率呈现上升趋势。目前来看,对于子宫内膜癌的研究,已经形成一个公认的“二元论”的发病模式,即将子宫内膜癌分为Ⅰ型和Ⅱ型。虽然二者均来自子宫内膜腺体,但实际上被看做是两种完全不同的疾病。相对Ⅰ型而言,Ⅱ型子宫内膜癌的研究较为滞后。由于其病因尚不清楚,通过确立其癌前病变,明确相关发病机制对于早期诊断、改善预后具有重要临床意义。卵巢癌的死亡率在妇科恶性肿瘤中一直高居首位。其主要原因,一是早期诊断困难,75%的患者就诊时已属于晚期。二是由于一直以来,卵巢癌的癌前病变和发病机制的研究尚不清楚。基于此,本课题的研究内容包括以下两部分:1.子宫内膜腺体异型增生(EmGD)中p53基因突变的研究2.Prohibitin介导的促性腺激素平衡机制在卵巢癌中的研究第一部分:子宫内膜腺体...  (本文共179页) 本文目录 | 阅读全文>>

山东师范大学
山东师范大学

慢病毒介导的人p53基因过表达及稳定感染细胞系的建立

p53基因作为肿瘤抑制的关键基因,主要功能是修复与细胞周期G、S期有关的DNA损伤,并且在DNA损伤严重时诱导受损细胞的凋亡。因此,p53基因在维持基因组的稳定与预防癌症发生方面具有重要的作用。在等摩尔比例下,具有正确DNA结合结构域的野生型p53蛋白比突变型p53蛋白活性更强,野生型p53蛋白不仅可以抑制突变型p53蛋白的获得性功能,而且可以诱导由突变型p53蛋白引起的肿瘤细胞的凋亡。由于在所有恶性肿瘤中,该基因的突变率在50%以上。因此,p53基因及其表达产物可以起到预防肿瘤细胞发生和发展的重要作用。本研究设计并构建了两种慢病毒表达载体pWPI-p53WT-Neo和pWPI-PTEN-Neo,并将上述两种慢病毒载体和包装质粒(packaging plasmids)组成的包装系统共转染293T细胞,收集慢病毒颗粒并测定pWPI-p53慢病毒和pWPI-PTEN慢病毒的滴度。按实验设计流程将两种病毒感染靶细胞CF-1,利用G41...  (本文共58页) 本文目录 | 阅读全文>>