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诱导型一氧化氮合酶基因真核表达载体的构建

目的 构建含有人诱导型一氧化氮合酶基因真核表达载体pcDNA3 iNOS。方法 采用分子生物学技术 ,以HindⅢ和XbIⅠ双酶切pSPORT iNOS,电泳回收 3.96kb编码人iNOScDNA序列 ,克隆入真核表达载体pcDNA3 的HindⅢ和XbIⅠ位点。  (本文共3页) 阅读全文>>

《肝胆外科杂志》2003年06期
肝胆外科杂志

诱导型一氧化氮合酶基因真核表达载体的构建与表达

目的 构建诱导型一氧化氮合酶基因真核表达载体 pc DNA3/ i NOS,并以脂质体为介导观察其在肝窦内皮细胞中的转染效率及表达情况。方法 先用限制性核酸内切酶 Hinc +Cla 酶切质粒 PSP/ i NOS和 PU C6 s,构建 PU C6 s/ i NOS中间质粒 ,再用 Hind +Xhol酶切质粒 PUC6 s/ i NOS和 pc DNA3,构建 pc D...  (本文共3页) 阅读全文>>

第三军医大学
第三军医大学

重组人诱导型一氧化氮合酶基因转染血管平滑肌细胞及对其增殖的影响

背景:一氧化氮(Nitric oxide, NO)是体内一种重要的生物信使分子和效应分子,广泛参与机体的多种生理、病理过程,近年研究发现,心脏内膜、外膜、心肌组织和心肌血管内皮、血管平滑肌都能产生NO。血管内皮细胞分泌的NO是一种重要的舒血管因子,它具有促内皮生长,抑制平滑肌细胞增殖、迁移,抑制血小板和白细胞在血管表面聚集,逆转异常的内皮氧化还原状态,在胶原合成和分泌其它细胞因子等方面也起调节作用。许多心血管系统疾病,如动脉粥样硬化、血管成形术后再狭窄、高血压、肺动脉高压和脑血管痉挛,都与内皮功能不足和一氧化氮分泌减少有关。促进受损内皮再生,恢复血管周围NO的保护性功能,在治疗这些疾病中具有重要意义。目前有研究用病毒载体将NOS基因经血管腔进行转染,通过外源基因的表达,增加损伤血管局部NO的分泌,以达到治疗血管损伤性疾病的目的,并已在动物实验中取得了良好的治疗效果。但病毒载体进入机体可以引起致命的免疫反应和急性炎症反应,限制了其...  (本文共70页) 本文目录 | 阅读全文>>

南京农业大学
南京农业大学

猪细小病毒体外增殖的抑制因素、VP2基因变异及核酸疫苗的研究

猪细小病毒(Porcine Parvovirus,PPV)自二十世纪六十年代被发现以来,许多国家先后分离到该病毒和检查到其抗体,抗体检出率为50%~80%,其中我国高达80%。该病毒感染能引起以母猪繁殖障碍为主要特征的病毒性传染病,孕前期受到感染时,经胎盘使胚胎或胎儿受到侵袭,引起母猪流产、不孕、胚胎死亡、胎儿畸形及木乃伊化等,同时还可引起仔猪的皮炎和腹泻,给养猪业造成巨大的经济损失。本文主要是探讨PPV地方毒株和标准毒株在体外增殖的基本特性与规律,NO和硒对PPV体外增殖的影响,不同毒株和不同代次的分子变异规律,研制PPV的核酸疫苗,以期为猪细小病毒病发病机理的阐明和临床上该病的防治提供实验依据。研究內容如下:1.应用免疫荧光法较为系统地研究了猪细小病毒南京株1(NJ-1)、南京株2(NJ-2)和7909株在PK-15细胞上增殖的基本特性与规律。结果显示,三个毒株的增殖规律基本相似,均在感染后12h开始产生子代病毒粒子,随后逐...  (本文共140页) 本文目录 | 阅读全文>>

《医学研究生学报》2003年07期
医学研究生学报

大鼠谷氨酰胺酶反义真核表达载体的构建及鉴定

目的 :构建大鼠谷氨酰胺酶 (GA)反义真核表达载体。 方法 :采用分子克隆技术将rGAcDNA反向克隆到真核表达载体pcDNA 3.0中...  (本文共2页) 阅读全文>>

《医学研究生学报》2012年01期
医学研究生学报

人环指蛋白11真核表达载体的构建及表达

目的构建含有标签蛋白的人环指蛋白11(ring finger protein 11,RNF11)的真核表达载体,并观测其在293T细胞中的表达。方法使用MEGA5.0等生物学软件构建人RNF11的分子进化树;应用RT-PCR从4种人胃癌细胞系中检测到该基因的表达,并将其克隆到pEASY-Blunt载...  (本文共4页) 阅读全文>>

《临床肝胆病杂志》2012年11期
临床肝胆病杂志

HBeAg真核表达载体的构建及其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

目的克隆HBeAg基因,构建重组HBeAg真核表达载体,并在中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)中进行表达。方法采用PCR法从HBeAg阳性乙型肝炎患者血清HBV DNA中扩增HBeAg基因,克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体中,构建重组pcDNA-HBeAg真核表达载体,经PCR、双酶切、测序鉴定后,将其转染入CHO细胞,G418筛选,用PCR、免疫斑点、Western Blot、免疫细胞化学方法检测HBeAg在CHO细胞中的表达。结果成功克隆到HBeAg基因,并构建了重组pcDNA...  (本文共4页) 阅读全文>>