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家蚕微孢子虫单克隆抗体的制备及鉴定

家蚕微粒子病是由家蚕微孢子虫(Nosema bom-bycis,N.b)感染引起的,因具有经卵传染性而被世界各养蚕国家和地区列为蚕种生产的惟一检疫对象[1,2]。近年来,许多单抗、多抗试剂结合间接免疫荧光试验(IFAT)检测技术已应用于鉴定检测排泄物样品和周围环境样品中的微孢子虫[3-5]。有关家蚕微粒子病免疫学诊断也有不少报道[6,7],但建立针对家蚕微孢子虫的高特异性IFAT检测体系的关键试剂———种间特异性抗体试剂仍未见报道。本研究通过研制家蚕微孢子虫单克隆抗体,旨在为快速检出家蚕微孢子虫提供合适的免疫试剂,同时在家蚕微孢子虫孢壁蛋白的研究中发挥作用。1材料与方法1.1家蚕微孢子虫家蚕微孢子虫分离株CQ1,由西南大学蚕病室分离,保存于中国兽医微生物菌种保藏管理中心(CVCC),保藏号CVCC102059。1.2细胞与试剂DMEM、无血清培养基、HAT和HT(美国GIB-CO公司),PEG-1500(Roche公司),羊抗小...  (本文共4页) 阅读全文>>

西南大学
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家蚕微孢子虫检测及微粒子病预报研究

微孢子虫(microspordia)是自然界普遍分布的一类细胞内专性寄生的单细胞真核生物,寄主范围从无脊椎动物到脊椎动物,包括人类,其感染经济昆虫及水产动物并能造成了不同程度的经济损失。目前已发现并报道的微孢子虫约有1400余种,分别归入160多个属~[1]。家蚕微孢子虫{Nosema bombycis)是1857年人类首次鉴定出的微孢子虫,它能够引发家蚕微粒子病,并通过胚胎垂直传播,是蚕业生产上的毁灭性病害,被列为蚕业生产国唯一的法定检疫对象。19世纪中叶,欧洲各国有多次微粒子病的流行的记录,蚕业生产损失惨重。目前,我国蚕业生产每年因微粒子病和带毒种造成的直接经济损失就高达数千万元。因此,防控微粒子病是蚕业界研究的重点和难点。目前对于微粒子病的检测主要方法有三类:显微镜检法、分子生物学检测方法和血清学检测方法。目前生产上还是使用150多年前创立的母蛾袋检法,具有直观、简单,经培训后方便掌握。不足之处是耗费大量的人力、物力,形态...  (本文共63页) 本文目录 | 阅读全文>>

西南大学
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家蚕微孢子虫单克隆抗体G9靶蛋白的鉴定

微孢子虫(Microsporidia)是一类细胞内专性寄生的单细胞真核生物,与其他细胞内寄生虫相似,微孢子虫具特有的侵染机制。家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)是Nageli于1857年在病蚕中分离鉴定到的,它能够感染家蚕,引发家蚕微粒子病,是蚕业生产上的毁灭性病害,因此如何在家蚕感染早期检测出家蚕微孢子虫并进行防治,在蚕业上至关重要。1870年,巴斯德创立了母蛾镜检法来检测家蚕微孢子虫,多年来此方法一直沿用至今,是生产上用于检测的传统方法。截止目前,家蚕微孢子虫的检测经历了以下阶段:显微镜检、分子生物学检测、免疫学检测。母蛾镜检方法具有简便、快速、不需要高端仪器的优点,但是此方法依赖检验人员的判断,主观性强。科学家发现利用染色可以提高微孢子虫的检出率。透射电子显微镜可以观察到孢子虫的超微结构,可以根据孢子壁厚度、极管圈数与倾角等基本确定微孢子的种类。随着分子生物学的发展,PCR(聚合酶链式反应)技术、LAMP(环介...  (本文共80页) 本文目录 | 阅读全文>>

西南大学
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家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)孢壁蛋白SWP26的研究

微孢子虫(Microsporidia)是一类细胞内专性寄生的单细胞真核生物,几乎寄生于整个动物界,包括感染人类,也是蚕桑业和渔业等的常见病害。近来许多研究揭示病原体的表面蛋白在对宿主的感染、入侵以及致病过程中扮演着重要的角色,如疟原虫子孢子和裂殖体表面蛋白可作为配体与靶细胞表面受体结合并参与入侵。关于微孢子虫,最近的研究报道,脑胞内原虫属(Encephalitozoon)孢子的孢壁蛋白能够通过其肝素结合基序识别并结合宿主细胞表面的葡聚糖,进而参与孢子粘附和宿主感染过程。而且,这种粘附机制能够增加宿主的感染率。但是,由于孢壁蛋白难以分离、序列同源性极低以及可利用的基因信息相对较少等特点,有效分离和鉴定孢壁蛋白的工作相当困难。迄今为止,被报到完整基因序列的孢壁蛋白仅11种,其中8种来源于脑孢内原虫属微孢子虫,3种来自家蚕微孢子虫。本研究首先进行家蚕微孢子虫单克隆抗体的研制、针对家蚕微孢子虫孢壁蛋白的抗体的筛选,然后,采用免疫沉淀-蛋...  (本文共131页) 本文目录 | 阅读全文>>

西南大学
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家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)功能基因组研究

微孢子虫(microsporidia)是一大群营专性细胞内寄生的真核生物的总称,能感染从无脊椎动物到脊椎动物的几乎所有动物,包括人类。微孢子虫能抵御各种环境压力,这得益于其表面一层厚厚的孢壁,其由外壁、内壁及原生质膜组成。目前微孢子虫分子水平的研究相对薄弱,对孢壁蛋白研究不够深入,目前仅鉴定并报道12个孢壁蛋白,对微孢子虫侵染的分子机制尚不明确。近年来研究发现,微孢子虫在侵染过程中有粘附的现象,而孢壁作为最先与宿主细胞接触的部分在孢子侵染宿主细胞的过程中扮演着重要角色。像其它病原(如疟原虫、弓形虫等)的表面蛋白一样,微孢子虫孢壁的重要组分孢壁蛋白被认为参与宿主细胞的粘附,在侵染过程中起重要作用。家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)是1857年人类首次鉴定出的微孢子虫,它能引发微粒子病并通过胚胎垂直传播,造成养蚕业的重大损失。家蚕微孢子虫孢壁蛋白的研究有助于阐明微孢子虫的侵染机制,从而可以为微粒子病的防治提供作用靶标。目...  (本文共124页) 本文目录 | 阅读全文>>

浙江大学
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家蚕微孢子虫侵染相关表面蛋白SP84的分离、纯化及鉴定

微孢子虫是一种专性细胞内寄生的原生动物,能感染从原生动物到哺乳动物,包括昆虫、鱼类和人类在内的几乎所有的动物,同时又是很有前途的生防制剂。微孢子虫以孢子发芽的方式侵染宿主细胞,孢子发芽是侵染的先决条件,微孢子虫表面蛋白又与孢子发芽以及侵染有关。因此,对微孢子虫侵染相关表面蛋白的研究,对微孢子虫防治和利用具有重要的意义。本论文基于目前对微孢子虫表面蛋白和有关病原微生物侵染宿主细胞的机制等方面的研究成果,通过制备特异识别家蚕微孢子虫(Nosema bombycis,以下简称Nb)表面蛋白的单克隆抗体(monoclonal antibody,Mab),研究了单抗对Nb孢子体外发芽以及入侵家蚕细胞(Bombyx mori cell,BmN)的影响,发现了一种和Nb孢子体外发芽以及侵染有关的孢子表面蛋白SP84,并对其进行了分离和鉴定,为解明微孢子虫的侵染机制提供了重要依据。1制备了特异识别Nb孢子表面蛋白的单克隆抗体。通过Nb孢子的动物...  (本文共116页) 本文目录 | 阅读全文>>