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梅毒螺旋体特异抗原 P15、P47的克隆表达和临床应用

梅毒是一种传染性很强、危害性极大的疾病 ,其发病率目前在我国呈明显的上升趋势。国内目前对梅毒感染的血源筛选主要采用 RPR和 TRUST方法 ,其主要缺点是缺乏特异性 ,许多非梅毒性疾病 ,包括类风湿关节炎 ( RA)、系统性红斑狼疮 ( SLE)、慢性迁延性肝炎 ( CPH)等均可呈阳性反应。而荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验 ( FTA-ABS)和梅毒螺旋体血凝试验 ( TPHA)虽大大改善了检测的特异性 ,但是需制备大量病原体 ,对人员和环境具有潜在的威胁 ,且质量难以控制。因此 ,根据国外对引起梅毒感染的苍白螺旋体 ( Treponema pallidum)的各种特异性抗原的研究[1 ] ,拟克隆和表达其中的 P1 5和P4 7两种抗原 ,并建立 ELISA方法对梅毒感染进行检测。1 材料和方法1 .1 材料 限制性内切酶、T4DNA连接酶、DNA分子量标准品购自 MBI公司。 BL2 1菌株、GSTrap亲和柱、低分子质量蛋...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国实用口腔科杂志》2015年11期
中国实用口腔科杂志

口腔鳞癌组织中p15表达及其临床意义

细胞增殖遵循着一个严格有序的过程,我们称之为细胞周期,这一过程由细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinasea,CDKs)调节。细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(cyclin-depen-dent kinasea inhibitors,CDKIs)可与CDKs结合并抑制其激酶活性[1]。p15属于Ink4家族细胞周期抑制因子,通过与D型cyclins结合,抑制CDK4和CDK6的蛋白催化活性,引起细胞G1期阻滞[2]。肿瘤的一个重要的生物学特征是细胞生长失控,近年来研究发现多种肿瘤组织中存在着p15表达降低或突变,与肿瘤的发生发展密切相关[3-6]。然而在口腔鳞癌组织中p15的表达和临床意义尚未明确报道。本研究采用免疫组织化学及RT-PCR法检测p15的蛋白及基因的表达情况,探讨其与口腔鳞癌的临床病理关系,为临床诊断及预后判断提供新的线索。1材料与方法1.1标本及试剂来源选取2000—2011年间在上海交...  (本文共4页) 阅读全文>>

《菏泽医学专科学校学报》2006年04期
菏泽医学专科学校学报

p15基因在胆管癌中的表达及意义

p15基因是近年研究发现的多肿瘤抑制基因,对细胞周期有负调控作用,国内缺乏在胆管癌中检测p15基因表达缺失的报道。本试验采用超敏免疫组化方法检测p15基因在胆管癌中的表达情况并探讨其临床意义。1材料与方法1.1标本来源38例胆管癌标本为广西医科大学一附院病理科保存1993-2003年住院病人手术标本,均经福尔马林固定、石蜡包埋。其中男性24人,女性14人,年龄34-78岁,平均年龄55.40岁。按Broder分级和UICC分期标准:Ⅰ-Ⅲ级分别为13例,19例,6例;Ⅰ-Ⅳ期分别4例,7例,12例,15例。HE染色确认后,连续4um切片备用。1.2试剂鼠抗人单抗克隆抗体p15、超敏S-P免疫组化试剂盒、DAB显色试剂盒、苏木素均购于福州迈新生物技术开发公司。1.3方法超敏SP免疫组化染色:常规石蜡切片脱蜡至水,SP染色程序按说明书进行,以已知结肠癌p15阳性片做阳性对照,以PBS代替一抗做阴性对照。1.4结果判断胞核胞浆出现棕黄...  (本文共2页) 阅读全文>>

《中国骨肿瘤骨病》2004年03期
中国骨肿瘤骨病

p15蛋白在骨巨细胞瘤中表达的研究

骨巨细胞瘤在我国发病率较高 ,仅次于骨软骨瘤 ,具有恶性潜能 ,常采用Jaffe分级 ,其Ⅲ级即恶性 ,现被归于骨巨细胞瘤恶变或其他含巨细胞的肉瘤[1] 。p1 5 [2 ] 基因既是固有的细胞周期调控基因 ,又是新近发现的候选的肿瘤抑制基因 ,其转录产物p1 5蛋白可特异地结合并抑制CDK4/6的活性 ,作为细胞生长的负性调节剂 ,使细胞静止于G1期 ,细胞周期停滞。目前认为它与多种肿瘤的发生有关。但p1 5蛋白与骨巨细胞瘤关系的研究国内未见相关报道。材料与方法所有标本取自中国医科大学病理科 ( 1 989-2 0 0 0年 ) ,标本经福尔马林固定 ,常规石蜡切片 ,厚度 5 μm。所有标本经HE染色和组织学观察确定。其中 ,骨巨细胞瘤 42例 ,按照Jaffe分级 :Ⅰ级 1 3例 ,Ⅱ级 1 9例 ,Ⅲ级 1 0例 ;本实验中将Ⅰ级和Ⅱ级分成一组 (Ⅰ~Ⅱ级组 ) ,Ⅲ级分成一组 (Ⅲ级组 )。并以 2 0例骨软骨瘤标本...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中华实验外科杂志》2004年12期
中华实验外科杂志

抑癌基因p15对人胆管癌细胞增殖的影响

抑制基因替代疗法是肿瘤基因治疗的热点之一 ,p5 3、p16作为其中重要的目的基因已经得到了广泛的研究[1 3] 。而与 p16来自同一家族的 p15也得到了各领域学者的关注[4 ] 。我们构建了稳定高表达 p15的人胆管癌细胞模型 ,并利用此模型探讨了p15对人胆管癌细胞增殖的影响。材料与方法1.材料 :人胆管癌细胞系QBC939由同济医科大学附属同济医院秦仁义教授惠赠 ,采用DMEM培养基加 10 %小牛血清于 37℃含 5 %CO2 的培养箱中培养 ;p15cDNA由美国冷泉港实验室DavidpcDNA3 neo购于Invitrogen公司 ;限制性内切酶、高保真Ex Taq酶、T4 DNA连接酶 (Takara公司 ) ;柱式PCR产物纯化试剂盒 (Sangon公司 ) ;Lipofectine转染试剂购于Clontech公司 ;G4 18购于美国Gibco公司 ;p15、p16多克隆抗体购自美国SantaCruz公司...  (本文共3页) 阅读全文>>

《实用临床医药杂志》2004年05期
实用临床医药杂志

p15对人胆管癌细胞增殖影响的实验研究及机理的初步分析

抑癌基因替代疗法是肿瘤基因治疗的热点之一 ,p5 3、p1 6作为其中重要的目的基因已经得到了广泛和深入的研究[1~ 3] 。而与p1 6同一家族的p1 5 ,自 1 994年美国冷泉港实验室DavidBeach研究组首次报道[4] 以来 ,也得到了各领域学者的广泛关注。目前认为 ,p1 5是重要的多肿瘤抑制基因MTS2 ,在很多人类原发性肿瘤和细胞株中发生了变化[5,6] ,但其在细胞增殖和转化中的作用及其机理有待进一步的研究揭示。有研究发现 ,p1 5在胆胰系统肿瘤中突变及缺失发生率较高 ,显示出较为明显的器官特异性改变[7] 。为此作者构建了稳定高表达 p1 5的人胆管癌细胞模型 ,并利用此模型探讨了 p1 5对人胆管癌细胞增殖的影响。1 材料与方法1 1 材料人胆管癌细胞系QBC939由同济医科大学附属同济医院秦仁义教授惠赠 ,采用DMEM培养基加 1 0 %小牛血清于 37℃含 5 %CO2 的培养箱中培养 ;p1 ...  (本文共4页) 阅读全文>>