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幽门螺杆菌粘附素基因的原核表达

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是上消化道疾病的主要病原菌,该菌集中定植于胃窦部,散在定植于胃内其他部位。它的感染不但与B型胃炎和消化性溃疡的发生有密切关系,而且与非溃疡性消化不良,MALT淋巴瘤和胃癌也有重要关系,并已被世界卫生组织列为胃癌等肿瘤发生的相关致病菌〔1-4〕。Hp在胃内定植的关键环节是粘附,依赖于粘附分子上某些特定的氨基酸位点与受体的结合。Hp粘附素基因hpaA(Helicobacter pylori adhesinA,hpaA)全长783bp,较保守,为Hp所特有,有良好的抗原性和免疫原性〔5-8〕。可激发宿主产生相应抗体,引起粘膜和全身性免疫应答,针对它所产生的抗体不与非Hp细菌和人胃粘膜组织发生交叉反应,是Hp的保护性抗原之一。我们根据基因文库中提供的hpaA序列,以临床分离的HP基因组为模板,经PCR扩增,获得hpaA基因片段,克隆至原核表达载体pQE30中,在大肠杆菌DH5α中...  (本文共4页) 阅读全文>>

复旦大学
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表皮葡萄球菌细胞间粘附素基因功能及表达调控的研究

表皮葡萄球菌是一种重要的条件致病菌,主要在免疫力受损人群,尤其是在使用高分子材料留置物的病人中容易引起感染。表皮葡萄球菌致病机理与其能粘附在高分子材料表面并形成生物膜有关。研究生物膜形成相关基因,阐明表皮葡萄球菌致病机理是研究预防和治疗由表皮葡萄球菌引起的插管等留置物相关感染的关键。微生物全基因组测序以及在此基础上进行的比较基因组学研究为病原微生物的研究提供了一个全新的平台。本文以对生物膜阴性的表皮葡萄球菌ATCC 12228进行全基因组测序为基础,通过其与金黄色葡萄球菌N315,生物膜阳性表皮葡萄球菌RP62A进行全基因组比较,分析了表皮葡萄球菌生物膜相关基因,重点研究了细胞间粘附素基因(ica)的功能,并对其表达调节进行了初步研究。通过对金黄色葡萄球菌与表皮葡萄球菌的全基因组比较,发现表皮葡萄球菌缺乏一系列编码毒素和侵袭性胞外酶的基因,从遗传物质水平解释了金葡菌和表葡菌致病能力和致病机制的差异。比较生物膜阴性表葡菌株ATCC...  (本文共131页) 本文目录 | 阅读全文>>

福建农林大学
福建农林大学

嗜水气单胞菌主要粘附素基因序列及其重组基因表达产物功能分析

为了深入探讨不同嗜水气单胞菌(Ah)之间主要粘附素基因在序列方面的差异以及主要粘附素的功能,了解主要粘附素在菌体侵入宿主和介导宿主产生免疫过程可能扮演的角色,对6株Ah菌主要粘附素基因进行克隆、测序,同时对Ah菌ZN1株主要粘附素重组基因的表达条件进行了优化,并对表达产物的部分生物学功能进行了分析,获得如下结果。核苷酸和氨基酸序列分析结果表明:6株Ah菌主要粘附素基因核苷酸和氨基酸同源率范围分别为35.6%~99.6%和34.2%~99.5%;相同来源且相同血清型的菌株BL①和BL④之间,主要粘附素基因核苷酸同源性最高为99.6%,对应氨基酸的同源性为84.6%;不同来源且不同血清型的菌株BL①和TPS-30之间主要粘附素基因核苷酸同源性为98.1%,对应氨基酸的同源性仅42.3%;此外,菌株ZN1(血清型为O:10501、分离自欧洲鳗鲡)的主要粘附素氨基酸序列与其他菌株差异较大同源率仅为34.2%~63.6%。结果提示嗜水气单...  (本文共60页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国人兽共患病学报》2011年02期
中国人兽共患病学报

鳗源嗜水气单胞菌主要粘附素基因克隆表达及产物粘附功能分析

嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)普遍存在于土壤和水体环境中,是一种人兽共患病原菌,对水产养殖动物危害尤为严重,是引起鱼类暴发性疾病的重要病原之一[1-2],大量的研究表明,气单胞菌外膜蛋白在感染宿主和免疫保护过程中扮演着重要角色。董传甫等[3]用不同血清型嗜水气单胞菌主要外膜蛋白(major outer membrane protein,MOMP)免疫欧洲鳗鲡,能够诱导欧洲鳗鲡产生对不同菌株的交叉免疫保护,免疫保护率在80%~100%。细菌感染首先要通过粘附素定植于宿主,而后繁殖并对宿主发挥毒性作用。嗜水气单胞菌的粘附因子包括:O-抗原脂多糖[4]、鞭毛[5]、Ⅳ型菌毛[6]、S-层蛋白[7]和细菌外膜上的某些糖反应外膜蛋白[8]。S Y Lee等[9]证实43kDa外膜蛋白为嗜水气单胞菌主要粘附素,Fang M H等[10]报道嗜水气单胞菌43kDa外膜蛋白可阻断不同血清型强毒、弱毒菌株对EPC(epi...  (本文共6页) 阅读全文>>

福建农林大学
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嗜水气单胞菌主要粘附素基因克隆表达及其产物特性分析

从鳗源嗜水气单胞菌ZN1克隆到其主要粘附素基因(maior adhesin gene,Mah)。该基因开放阅读框为1074bp,编码357个氨基酸,推导的蛋白分子量为39.606kDa,前22个氨基酸残基构成一明显疏水信号肽。DNA序列分析比较表明ZN1主要粘附素基因与其它嗜水气单胞菌主要粘附素基因同源率约为70%,在系统进化树中,属于嗜水气单胞菌主要粘附素基因的一个新亚群。将Mah重组到pET-32a表达载体中并转化E.coliDE3(BL21),获得高效表达。表达产物验证与功能分析结果表明:(1)ELISA结果显示鼠抗ZN1主要外膜蛋白血清能识别表达产物Mah-TrxA(硫氧还蛋白与主要粘附素形成的融合蛋白)及野生型菌株ZN1表达的主要外膜蛋白(含主要粘附素),抗体滴度分别达到1∶3200和1∶12800;鼠抗Mah-TrxA融合蛋白血清可识别Mah-TrxA及野生型菌株ZN1表达的主要外膜蛋白,抗体滴度分别到达1∶1280...  (本文共55页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中华微生物学和免疫学杂志》2003年04期
中华微生物学和免疫学杂志

幽门螺杆菌粘附素基因babA_2的克隆及免疫应答的初步研究

目前 ,幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)疫苗的研制仍处在抗原的筛选阶段 ,已经评价的基因重组抗原基本上是着眼于阻断Hp的毒力因素 ,而与Hp定植密切相关的粘附素评价较少。babA是迄今为止唯一明确受体的Hp粘附素 ,研究表明babA基因存在两个等位基因 :babA1和babA2 ,其中只有babA2 具备与Leb 结合的功能〔1〕。本实验对babA2 基因进行了克隆和表达并研究了其免疫反应。材料和方法材料 :大肠杆菌BL2 1(DE3)及质粒pET 2 2b( +)由军事医学科学院生物工程研究所提供。幽门螺杆菌SS1为澳大利亚悉尼新南威尔士大学微生物与免疫学教授AdrianLee惠赠。限制性内切酶NotⅠ、NcoⅠ及T4DNA聚合酶、VentDNA聚合酶购自NewEn glandBiolabs公司 ,TaqDNA聚合酶、DNA分子质量标准λDNA EcoRⅠ +HindⅢ购自华美生物工程公司 ,琼脂糖、...  (本文共2页) 阅读全文>>