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人工合成丁型肝炎病毒抗原片段及其诊断应用

人的丁型肝炎病毒(HDV)在感染宿主时必须有乙型肝炎病毒(HBV)的辅助“。’。它与HBV可重叠感染正常机体.导致不同的临床后果。’。丁型肝炎病毒抗原(HDAg)是迄今证实的由该病毒编码的唯一单链蛋白“’。现已证实HDAg有与HDV核酸结合的活性,为HDV的复制所必需,在HDV的致病机理中有重要意义““’。由于天然HDAg材料来源困难,提取纯化过程复杂、产率低、产物稳定性差,难获得纯度高、稳定性好、足量的HDAg。我们参考现有文献资料自行选择、设计并合成了含天然HDAg上的部分片段的27肽。实验证实该合成肽具有天然HDAg上相应片段的抗原活性,能专一地为天然抗HD所识别。1实验方法1.1用合成肽抗原建立ELISA法检测抗HD 用合成肽抗原包被聚乙烯塑料板,50/~1/孔,4℃过夜。加待检原倍血清,50t~l/孔,37℃水浴l h。洗涤后,加羊抗人IgG—HRP,50t,l/’孔,37℃水浴l h。洗涤后加()PD底物显色液,50...  (本文共4页) 阅读全文>>

《甘肃畜牧兽医》2015年08期
甘肃畜牧兽医

口蹄疫病毒合成肽抗原的固相合成

1文献概述口蹄疫病毒合成肽抗原最大限度模拟病毒VP1G-H环的结构,共由61个氨基酸组成。包括诱导抗体产生的主要位点:VP1的140-160位置及VP1的C端的200-213位置,和多个B细胞抗原表位以及T细胞抗原表位:结构蛋白(VP4的20-34位,VP1的21-40位),非结构蛋白(3A的21-35位)。多肽固相合成法自Merrifield创立至今得到了很大的发展,在Boc固相合成法之外,又建立了Fmoc固相合成法,使得多肽固相合成反应条件温和,副反应减少,产率提高。以固相多肽合成法为基础发展起来的多肽合成仪也不断得到完善、应用和商品化。2口蹄疫病毒合成肽抗原的Fmoc法固相合成2.1原理多肽合成,就是采取一定的方法,把各个氨基酸单位按照天然蛋白质或多肽的氨基酸排列顺序和连接方式连接起来。氨基酸在中性条件下是以分子内的两性离子形式(H3+NCH(R)COO-)存在,因此,氨基酸之间直接缩合形成肽键的反应一般条件下难于进行。在...  (本文共2页) 阅读全文>>

《中国免疫学杂志》1992年04期
中国免疫学杂志

利用 gp41蛋白的合成肽抗原检测 HIV-1抗体

人免疫缺报病毒(HIV)是艾滋病(AIDS)的病原,枪侧抗HrV抗体是监测与预防AIDS的主要手段.根据所用包被抗原的特性,抗HIV抗体的ELIsA检侧试剂可分成三代:第一代试剂采用病毒裂解物作抗原,不但假阳性率和假阴性率高,而且重复性也不好,须采用Western印迹法进行确证试脸(1),第二代试剂采用荃因工程表达的重组抗原,虽然重复性较好,但纯化工艺复杂,纯化成本较高,而且抗原的溶解性较差‘幻;第三代试剂采用合成肤杭原,不但重复性好,特异性高,而且价格性能比合理,此外还便于实现HIV一1和HW一2的鉴别诊晰r,·幻.研制与发展Hlv合成肤诊断试剂,以满足高危人群的抗体蹄查以及Hlv感染者的跟踪随访等方面的孺要,是我国HIV监测与研究工作的重要任务.本文选用Hr铲‘1 gP41蛋白的一段代表优势抗原表位的22肤进行了化学合成,并以此建立了Hw一1血清扰体的ELISA检测方法. 材料与方法 一、合成肤的设计 设计合成肚时参考了文献...  (本文共3页) 阅读全文>>

《细胞与分子免疫学杂志》2005年03期
细胞与分子免疫学杂志

用单表位合成肽抗原荧光偏振免疫法检测抗幽门螺旋杆菌尿素酶的抗体

荧光偏振技术是分析溶液中分子结合解离反应的最有效方法之一。FP检测基于荧光素标记的小分子物质与其他分子相互作用前后相对分子质量(Mr)的变化,可用于分析荧光素标记的小分子物质与大分子物质之间的相互作用。目前,均相荧光偏振免疫分析技术(fluorescencepolarizedimmunoassay,FPIA)已在临床检验、毒品分析、药物残留量分析以及环境和食品监测等方面逐步得到推广应用[1,2]。然而,由于抗体的Mr较大,只有Mr小的抗原才适合FPIA分析,对于较大Mr的抗原则不适合FP检测。单表位合成肽抗原的Mr远小于通常的抗原分子,可完全满足FP检测的要求。本研究中,尝试了应用HpUreB的单表位合成肽抗原,建立一种基于FP检测的快速Hp免疫诊断方法。1材料和方法1.1材料WallacVictor2(1420multilabelcounter)FP检测仪,为美国PerkinElmerLifeSciences公司产品。384微...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中华实验和临床病毒学杂志》1970年10期
中华实验和临床病毒学杂志

用合成肽抗原检测Epstein-Barr病毒抗体

用合成肽抗原检测Epstein-Bar病毒抗体刘海鹰周玲邓洪周维雅J.Middeldorp曾毅Epstein-Bar病毒(EBV)进入宿主细胞后能产生多种由EBV决定的抗原,包括早期抗原(EA),壳抗原(VCA)和核抗原(EBNA)等。这些由EBV基因组编码的各种蛋白抗原均能引起血清抗体的不同反应。研究这些抗体的变化,对阐明EBV与鼻咽癌的关系以及鼻咽癌的早期诊断都有着十分重要的意义〔1~6〕。我们以EB病毒VCA-p18、EBNA-1、EA合成肽作为抗原,用酶联免疫吸附试验检测鼻咽癌病人和正常人血清中的IgA抗体,观察不同抗原的IgA抗体反应。1材料和方法11血清鼻咽癌病人血清由广西省梧州市肿瘤防治研究所和广西省人民医院提供。病人均经病理检查确诊,用免疫酶法检测病人血清均为阳性。正常人血清取自免疫酶法检测EBV-IgA抗体为阴性的健康成年人,-20℃保存。被检血清稀释度为1:100。12酶联免疫吸附试验VCA-P18,EB...  (本文共2页) 阅读全文>>

《中国人兽共患病杂志》2000年04期
中国人兽共患病杂志

人类PrP合成肽抗原构建及应用

Prion蛋白(PrP)是动物神经原细胞合成的通过磷酸肌醇系统锚定在细胞外表面的一种糖蛋白。目前研究已进入分子水平,它与具有核酸蛋白复合体的典型病毒不同,PrP无核酸,比病毒小得多。正常的PrP是无害的细胞蛋白(PrPc),当其结构发生改变,由α螺旋转变为β折叠后就变成了有害物质,具有传染性,可以复制,蓄积于脑而致病——Prion病(海绵状脑病)。并能造成人与人及人与实验动物间的感染。Prion病可导致人痴呆,预后凶险,随着英国疯牛病的流行,此病发病率亦有增多趋势,且出现一种新变异型Creutzfeldt-Jacob病。因此快速准确诊断Prion病是极其重要的。PrP抗原是制备检测试剂的必要材料。在我国Prion病诊断率低,尸检不能广泛开展情况下,天然PrP来源极其困难。因此人工合成PrP肽是获得足够PrP抗原的有效途径。本文报道PrP肽链合成、抗原构建及初步应用。1 材料和方法1.1 430A自动多肽合成仪(美国ABI公司);...  (本文共3页) 阅读全文>>