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转染的FasL基因诱导GRC-1细胞凋亡的形态学观察

0 引言基因治疗前景诱人[1] .Fas/ Fas L系统在维持细胞群体数量稳定 ,消除恶性转化细胞及调节免疫系统的功能中发挥重要作用 [2 ,3 ] .研究 Fas L在肾癌治疗中的作用具有重要意义 .本研究拟构建 Fas L真核转基因表达载体 ,然后转染肾癌细胞株 GRC- 1,并对转染后的肾癌细胞株进行形态学观察 ,拟探讨转染的Fas L基因对肾癌细胞的影响 .1 材料和方法1.1 材料 含 Fas L基因的质粒与腺病毒载体由西京医院陈勇教授惠赠 ;GRC- 1肾癌细胞株由第四军医大学实验动物中心提供 ;16 40培养基 ,Gibco产品 ,胎牛血清、限制性内切酶、T4 DNA连接酶、Taq酶均购自原平公司 ,L ipofectin为 Gibco产品 .1.2 方法1.2 .1 表达载体的构建与鉴定 采用 H ind III与Bam HI双酶切含 Fas L的 p CMV质粒 ,回收片段 ;采用 H ind III与 Ba...  (本文共3页) 阅读全文>>

《第四军医大学学报》2002年17期
第四军医大学学报

金雀异黄素对肾癌细胞系GRC-1细胞生物学行为的影响

0 引言金雀异黄素是一种大豆蛋白提取物 ,据报道与多种肿瘤发生的低风险有关 [1] .其抗肿瘤机制非常复杂 .已经证明 ,它在体外有抗乳腺癌细胞增生、促凋亡的作用 [2 ] .Narita等 [3 ]证明金雀异黄素可抑制HB- EGF(heparin- binding EGF- like growth factor)引起的 integrin在乳腺癌细胞系表达的增加 ,从而抑制细胞增殖 .并推测其抑制肿瘤细胞增殖的机制可能为抑制酪氨酸激酶活性和抑制拓扑异构酶 .但至今尚未有酪氨酸蛋白激酶抑制剂在肾肿瘤中作用的报道 .我们使用金雀异黄素处理肾肿瘤细胞系GRC- 1,以观察它在肾肿瘤细胞系中是否具有相同作用 ,并探讨金雀异黄素应用于临床治疗的可能 .1 材料和方法1.1 材料 金雀异黄素购自 Sigma公司 (相对分子质量为 2 70 .2 ,纯度不低于 98% ) ,用 DMSO(Sigma公司 )溶解 ,配制成 10 0 mmo...  (本文共4页) 阅读全文>>

第四军医大学
第四军医大学

逆转录病毒载体介导的HSV-TK基因在人肾癌GRC-1细胞中的表达及意义的初步研究

肾癌是泌尿系统常见肿瘤之一,是仅次于膀胱癌在泌尿系统居第二位的恶性肿瘤,随着人均寿命的延长和检查技术的提高,临床发现的病例呈增多之势。肾癌细胞对化疗及放疗的效果均不理想,对生物治疗的探索成为新的热点之一。自杀基因(suicide gene)疗法,又称药物敏感基因(drugsensitivity gene)疗法,是生物治疗的主要方法之一,也是目前国外研究较多的方法之一;其中,HSV—TK基因是应用最为广泛、进展最快、且很有前途、最具前景的、典型的自杀基因。本实验利用质粒G1Na及LNTK具有相同的BamHⅠ和HindⅢ位点成功构建带HSV1—TK基因的逆转录病毒真核表达载体G1Na-TK;采用脂质体介导的DNA转染法,成功将TK基因导入GRC—1肾癌细胞中,并筛选出GRC—1/TK细胞;用DNA和RNA打点杂交及PCR检查均观察到TK基因已转入GRC—1细胞并获得表达;GRC—1/TK细胞获得对ACV的敏感性,当ACV浓度为100...  (本文共82页) 本文目录 | 阅读全文>>

《航空航天医学杂志》2012年10期
航空航天医学杂志

甲基硒酸抑制肾癌GRC-1细胞生长与脂质过氧化关系的研究

硒是一种人体必需的微量元素,其防癌抑癌作用逐渐成为人们关注的焦点。硒元素能抑制多种肿瘤的增殖,并促进其凋亡[1-2],但尚未见硒元素与肾癌的研究报道。硒在机体最重要的生理功能就是抗氧化性[3],一定条件下硒化合物可以导致活性氧产生,对细胞造成氧化损伤[4]。单甲基化形式的硒(CH3SeH)是硒在体内参与防癌抑癌的最佳活性化合物形式[5],因此本研究选取甲基硒酸(CH3SeO2H)作为干预物,使用不同浓度CH3SeO2H对肾癌GRC-1细胞进行侵染,观察细胞的生长情况,并检测细胞内活性氧ROS,脂质过氧化指标GSH、SOD、MDA的变化,探讨甲基硒酸对肾癌的作用机制及与脂质过氧化的关系。1资料与方法1.1细胞系肾癌GRC-1细胞由贵阳医学院附属医院泌尿外科张永春博士惠赠。1.2分组给予不同浓度的甲基硒酸对GRC-1细胞进行侵染,分为3个实验组:1.0μmol/L组,2.5μmol/L组,5.0μmol/L组,并设立空白对照组。1....  (本文共4页) 阅读全文>>

《白求恩军医学院学报》2003年01期
白求恩军医学院学报

金雀异黄素对肾肿瘤细胞系GRC-1侵袭能力的影响

在肿瘤细胞侵袭的早期 ,肿瘤细胞粘附于基质表面时 ,有多种依赖于蛋白酪氨酸激酶 (proteintyro sinekinase ,PTK)活性的信号转导发生。故在此过程中若阻断了PTK活性 ,可抑制基质对肿瘤细胞侵袭的调节作用 ,导致肿瘤细胞侵袭能力的下降。金雀异黄素 (genistein)是来源于豆类植物的一种异黄酮类化合物 ,属于特异性强PTK抑制剂[1] ,据以往的研究与多种肿瘤的低风险有关 ,并与肾肿瘤细胞增殖能力下降有关[2 ] 。我们运用低浓度的金雀异黄素处理肾癌细胞系GRC - 1,观察它对恶性肾肿瘤细胞侵袭的抑作用 ,以及它对侵袭相关属性的影响 ,研究PTK抑制剂应用于肾肿瘤转移抑制的可能性。1 材料与方法1.1 肿瘤细胞系和细胞的培养 肾癌细胞系GRC -1由北京大学第一附属医院泌尿外科研究所丁义于1994年建立[3] ,常规培养于含 10 %小牛血清 (四季青公司 )的RPMI - 16 40培养基 (购自G...  (本文共3页) 阅读全文>>

《临床肿瘤学杂志》2016年11期
临床肿瘤学杂志

miR-143对肾癌GRC-1细胞增殖与凋亡及其靶点HIF-1α的影响

呈现逐年增长的趋势[1]。目前,临床中肾癌的主要诊断方式除常规病理科活检外还包括CT影像分析,治疗方式包括手术及放疗化疗,而在实际临床应用中各种影像诊断方法则成为评价肾癌治疗效果的最常用手段。然而由于肾癌的高转移率以及对放化疗的不敏感性,目前肾癌在确诊时往往已为中晚期,导致肾癌的治疗效果及预后普遍较差[2]。因此,如何寻找新的肾癌特异性分子标记物及治疗靶点,辅助常规病理及放射学检验及传统治疗方法,实现肾癌的早期诊断、靶向治疗及精确的疗效评估,最大程度的提高肾癌患者的生存率及延长生存时间是目前肾癌治疗领域的一个急需解决的问题。近年来,国内外研究发现微小RNA(microRNA,miRNA)参与调控各种恶性肿瘤的发生发展,而其在肾癌中的作用也被广泛报道。之前的研究发现,miR-143在肾癌组织中明显下调,且与肾癌的发生发展及预后紧密相关[3]。然而miR-143在肾癌中的具体调控机理尚不明确,因此本研究旨在验证miR-143与其下游...  (本文共5页) 阅读全文>>