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Ⅰ、Ⅲ型前胶原基因第2外显子核酶对靶RNA的体外切割活性的研究

胶原蛋白作为细胞外基质的重要组分,参与瘢痕的形成[1,2]。目前已发现至少20种胶原蛋白,由30多种前胶原基因所编码。已知的所有前胶原基因均为不连续基因[3]。在瘢痕形成期间,发现某些类型前胶原基因转录增强[4];过量胶原的沉积是引起增殖性瘢痕的原因之一。核酶作为反义RNA的一种,目前常用来作为控制特定mRNA表达的有效手段。不少人工设计构建的核酶已在体外显示了对特异RNA的切割活性,部分在细胞内亦表现出对mRNA的抑制作用[5,6]。我们利用已构建的锤头型针对α1Ⅰ型及Ⅲ型前胶原基因第2外显子片段核酶,在体外研究了2种核酶对各自靶RNA分子的切割活性及反应条件。本实验结果为后续应用核酶体内防治瘢痕的研究提供了有益的参考。1 材料与方法1.1 重组质粒pT-Ⅰ及pT-Ⅲ图1 两个核酶(rgⅠ、rgⅢ)及其相应的靶RNA(rⅠ、rⅢ)的体外转录结果Fig.1Invitrotranscriptionofthetworibozy...  (本文共3页) 阅读全文>>

《计算机工程与应用》2004年14期
计算机工程与应用

RNA二级结构表示方法及其转换算法

1引言当前理论生物学界最重要的问题和最大的挑战就是如何破译人体密码,由生物聚合体序列推测空间分子结构。众所周知,DNA是遗传信息的载体,遗传信息的作用通常由蛋白质的功能来实现,按照早先的遗传学观点,RNA在遗传过程中担负的功能非常简单,它一般是作为DNA的“附属”出现,把DNA所携带的遗传指令传递到蛋白质合成过程中,充当“信使”和“模版”。但新的研究成果揭示,RNA的作用可能被人们小看了,它不光是遗传的“信使”,在某种程度上也扮演“纠错者”和“控制者”的角色。RNA分子是细胞内部功能结构中不可缺少的组成部分,如蛋白质合成和转移、转录规则、染色体复制、RNA处理和修复以及其他一些基本生物功能。尤其是,RNA(而不是DNA)包含了病毒的基因信息如HIV,从而控制病毒的功能。正是由于RNA具有的这些特殊属性,使得它成为近年来更多关注的焦点之一,引发了致力于研究如何获得RNA结构信息的热潮。核糖核酸RNA(RibonucleicAcid...  (本文共4页) 阅读全文>>

《国外医学.药学分册》2004年06期
国外医学.药学分册

氨基糖苷类化合物与RNA相互作用的研究进展

RNA作为遗传信息的携带者和传递者 ,执行着重要的生物功能 ,随着X线单晶衍射及核磁共振技术的发展 ,发现RNA像蛋白质一样 ,可以折叠成复杂的三维结构 ,从而使小分子有可能特异性地与RNA结合并发挥作用。通过RNA与药物结合进行药物筛选 ,较用蛋白质靶筛选药物廉价和快捷。多数蛋白质需要在特定的细胞和条件下完成翻译和修饰后才具有生物活性 ,而RNA可以通过化学或酶学方法大量合成 ,且不需要体内修饰。RNA可以折叠成复杂的三级结构 ,故可提供多个结合位点。氨基糖苷类化合物作为一种广谱抗菌药 ,虽然有肾毒性、耳毒性等副作用 ,但它仍是能够与RNA作用的小分子中较有潜力的一类化合物 ,已成为研究热点。本文综述了近年来氨基糖苷类化合物与RNA相互作用的研究进展。1 氨基糖苷类化合物的结构特点氨基糖苷类化合物 ,可以分为两种结构类型[1] :(1)脱氧链霉胺 (2 DOS环Ⅱ ) 4 ,5或 4 ,6双取代骨架(图 1A ) ,如新霉素...  (本文共6页) 阅读全文>>

《新疆农业科学》2004年06期
新疆农业科学

一种有效的葡萄叶片总RNA提取方法

RNA的提取技术不仅是核酸研究技术的一个重要组成部分,同时也是现代分子生物技术的基础,是进行基因表达分析及基因克隆等分子生物学研究的基础,RNA提取的质量关系到以后工作的成败[1]。由于RNA酶活性强,故要得到无降解RNA难度比较大,尤其是植物细胞具有坚硬的细胞壁,细胞内有较大的液泡,含较多的多糖、多酚及一些不明次生代谢物,故植物RNA的提取更显困难[2]。1 材料与方法1.1 材料 新鲜葡萄叶片。1.2 方法1.2.1 试剂与实验用品的处理水饱和酚(8-羟基喹啉);氯仿/异戊醇(24∶1V/V);低盐Buffer(pH9.0,用0.1%DEPC处理);0.1Mgly-NaOH;50mMNaCl;1mMEDTANa2;2%SDS;1%SLS;5MNaCl(用0.1%DEPC处理);10%CTAB(用0.1%DEPC处理;3MNaAc(pH5.2用0.1%DEPC处理,用冰乙酸调pH);TEBufferpH8.0);10mMTri...  (本文共2页) 阅读全文>>

《石河子大学学报(自然科学版)》2004年06期
石河子大学学报(自然科学版)

库尔勒香梨总RNA的快速提取方法

分离和提纯果树组织中的总RNA,并用之合成cDNA,进行PCR扩增,是从分子水平上检测果树病毒的重要方法之一。绝大多数果树病毒属于RNA病毒,应用RT PCR技术检测果树病毒时,提取的总RNA的浓度和纯度是影响了PCR检测的最关键因素。在总RNA提取过程中,容易受到内源和外源RNA酶的降解以及蛋白质、DNA、同源和外源酚类物质的污染[1]。梨树组织富含酚类、多糖,由于酚类和糖类含量较高,氧化后酚类物质能与RNA稳定结合,从而影响RNA的分离纯化,糖类物质的许多理化性质与RNA很相似,在去除多糖时RNA也被裹携走,造成RNA产量的减少[2]。近年来,关于富含多糖、多酚植物组织RNA的提取有不少报道[3~6],但这些方法都存在着费时、费力等缺点。在尝试多种RNA提取方法的基础上,作者探讨出一种快速简便的香梨总RNA提取方法,并取得了很好的效果。1 材料与方法1 1 材料1.1.1 试验材料采集当年生或1年生的枝条、花、叶片(老叶和幼...  (本文共3页) 阅读全文>>

《生物技术通讯》2004年01期
生物技术通讯

富含多糖草莓果实总RNA提取方法的改进

近年来,随着生物技术的进步和发展,人们对植物的许多生理特性进行到了分子水平的研究。许多重要基因的克隆和表达研究,需要从植物材料中提取高纯度的DNA或RNA。由于材料本身的内源RNA酶和外源RNA酶的影响,RNA比DNA更容易降解。因此植物总RNA的提取条件比DNA要苛刻。而且很多植物材料中,或富含类黄酮和酚类化合物,或富含多糖,或含有某些尚无法确定的次级代谢产物,增加了RNA的提取难度。草莓果实因富含芳香族的酚类化合物、类黄酮类色素和多糖类化合物,使其核酸的提取变得困难。特别是总RNA的提取,常规方法很难奏效;某些一步法的试剂盒对其多糖的处理效果也不明显。本实验针对这些难题,在前人试验研究眼1-8演基础上,对常规的提取方法进行了改进。用丙酮去除大部分类黄酮类色素,用乙二醇丁醚去除大部分多糖。产物在纯度和浓度上经过试验验证,可以满足反转录、PCR、Northern杂交等分子生物学的研究需要。1材料与方法1.1材料以本研究所温室栽种...  (本文共3页) 阅读全文>>