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非同位素标记DNA探针初步研究

随着DNA重组技术的发展,核酸分子杂交 成为当今分子生物学研究中应用最广泛的一项技术。目前在我们实际办案中,核酸分子杂交多 采用高比活放射性同位素“ZP标记探针及放射 自显影检测方法,这是一项灵敏度高,效果好 的分析手段。但由于32p存在半衰期短、制备的探针无法长期保存、价格昂贵、有碍工作人 员的健康及放射性废物难以处理等弊端,使DNA检验技术的推广受到一定限制,因此对非放射性标记的探针和检测系统的研究逐渐开展起来。1981年美国耶鲁大学Word小组首先合成了生物素化的脱氧啼咤核昔三磷酸,缺口平移反应完成生物素标记探针〔’〕;1 988年澳大利亚Aeiaside大学合成了光生物素,不用酶可直接标记探针,受到人们重视〔2〕;同年西德Boeh-:ing。r Mannh。im公司推出了一种以地高辛为标记物的非放射性标记试剂盒。 我们采用英国Amersham公司生产的非放射性标记及检测试剂盒,将辣根过氧化物酶 (HRP)标记在以一珠蛋白...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国寄生虫病防治杂志》1992年02期
中国寄生虫病防治杂志

不同DNA探针检测疟原虫的灵敏度比较

我们已在实验室条件下用部分病人血样[1.2〕,对克隆的恶性疟原虫特异的质粒型pBFoDNA探针进行了研究,证明该探针不仅特异而且敏感性高。我们也曾从原虫基因文库中用药物平板法筛出了恶性疟特异的克隆PBF13,检测DNA时可达n8水平仁3]。还有人用恶性疟全基因组DNA检测原虫获得了很好效果[4]。为获得更适于检测疟原虫应用的探针,本文以恶性疟原虫DNA为靶,对上述3种DNA探针检测原虫的灵敏度作了比较。 材料和方法 一、恶性疟原虫基因组DNA探针的制备 按Traser法将恶性疟原虫Fcol/HN株体外连续培养[5],当原虫血症达10%左右时收集培养物,井用终浓度为0.巧%的皂素溶血,离心去血红蛋白,然后加入10倍体积的蛋白裂解液(1 omM Tris,PHS.0,1 omM EDTA,1 omM NaCI,2写SDS和100昭/ml蛋白酶K),50℃作用Zh后,加入等体积饱和酚,魂℃离心20009,]smin,2次。用上述条件以...  (本文共4页) 阅读全文>>

《生物化学与生物物理进展》1993年02期
生物化学与生物物理进展

四个探针产生的家禽 DNA 指纹图谱

多位点小卫星探针(multilocus minisate-llite probe)即多核探针(polyeore probe),都是由某一寡核昔酸(即核』合序列)多次重复而成.这些探针能与多种生物的染色体组DNA酶切片段杂交,产生具有个体特异性的DNA指纹图谱(DNA fingerprint)【‘,,,.DNA指纹技术已广泛地用于人类医学、法医学、群体遗传学和分类学等领域的有关研究上〔”一,,越来越受到重视.虽然目前多位点小卫星探针已有数十个之多,但用得最多的是人源小卫星探针”.6和33.15‘习,以及噬菌体M13(其有效序列为蛋白质111的编码区)[91.要获得信息量大、分辨力高的DNA指纹图,需根据所研究的物种和采用的探针,摸索一套合适的实验技术和方法.我们就四个探针—33.6,33.15,a珠蛋白一3,HvR(3HvR)‘10,“,和M13产生鸡、鸭和鹑鹑的DNA指纹图的技术和方法进行了探讨,获得了重复性好、清晰的DNA指纹...  (本文共4页) 阅读全文>>

《国外医学(分子生物学分册)》1993年02期
国外医学(分子生物学分册)

小卫星DNA探针及其应用

人类DNA中存在着具有高度多态性的小卫星区域,所有的小卫星区域都是某一短顺序串联重复所组成。这一顺序在不同的位点中是彼此不同的,但它们具有一致的“核心顺序”。小卫星区域的多态性是由其重复顺序重复次数的不同所决定的,因此这种超变区(HVRs,hypervariable rogions)的类型属于VNTR(variabl。numb。r of tan-dLm rep“ats,串联重复的可变数)。应用相应的小卫星DNA探针,可检测出这类小卫星区域的多态性〔’一“1。 第一个小卫星区域是1980年wyman和whit。在人DNA基因库随机片段中偶然发现的〔61。进而又发现了许多HvRs,并进一步弄清了HVRs散在分布于基因组中。基因组中的HVR“数量尚不清楚,但有证据表明多于1500个。在人肌红蛋白基因中存在着一个33bp的重复顺序串联重复了4次。Jeffreys等人用其数个拷贝首尾相接作为小卫星探针去检测人DNA,发现可检测到多个小卫星...  (本文共4页) 阅读全文>>

《临床与实验病理学杂志》1990年03期
临床与实验病理学杂志

DNA探针的扩增制备技术

核酸分子杂交是分子病理学研究中的一项新技术,近年来国内少数病理实验室已开始此项工作。但是由于DNA探针扩增制备技术在病理实验室中尚未得到广泛开展,使探针来源受限,限制了杂交技术的应用。目前虽然有较多文献对DNA探针扩增制备技术作了介绍,但由于许多探针扩增方法要依赖特殊的设备和试剂,给工作带来了诸多不便。我们在工作中参照不同的DNA探针扩增制备方法,经过摸索建立了较方便、实用的扩增制备技术,现介绍如下; 基本原理 DNA探针扩增制备的基本原理为:DNA探针本身是D NA或C D NA片段,它可在酶作用下连接到特定的细菌质粒DNA上,构成一个新的带探针的质粒,当这个质粒通过转化进入大肠杆菌后,随大肠杆菌快速生长繁殖,该质粒也大量复制,从而使探针DNA大量增加.实验一般分为4个过程。(1)制备感受态细菌:此过程是使不含有质粒的特殊大肠杆菌的膜具有一定的通过性,可允许外界质粒进入细菌内。(2)转化实验:使整合在质粒上的探针进入已被制成感...  (本文共3页) 阅读全文>>

《微生物学免疫学进展》1991年03期
微生物学免疫学进展

DNA探针的诊断应用

u 反应是基本的,并由四种成分组成(表 2)。即探 针;靶物质(含于受试样品中的核酸);检验方法 使用重组DNA技术制备特异的分子(常为(根据采用的标记物或报告基因而定)和杂交雀DNA)探针已为医学和兽医诊断实验室提高对传染 式.病、遗传紊乱、恶性肿瘤的诊断提供了新的强有力 亲2 DNA抒份象在反应的成册的工具,同时也给完成如组织分型、亲缘关系试验——二二二、.二二:二二二二:二二二二7一、二-二、:二二 1.探针这类工作提供了更灵敏感更特异的方法,该技术对:’二二_二一7:r二1二“二Y卞’丫‘”“二广”.__—一:’”Y 入靶物质法医学也是很有用的(如表1).DNA探针作为_人品二_.____、;。。、。。;。。,,。。、、。。、。,·。。、。。。r·。3.检测方法(报告基因)诊断试剂的应用或使实验室减少周转时间,拓宽所。。、__R;:n;;}iJ;;;G;;if::=zlx:”R?;&i 一了某些费力的测定以及实验室可就地...  (本文共5页) 阅读全文>>