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糖胺多糖酶解产物──不饱和二糖的高效液相色谱分析

1引言糖胺多糖(Glycosaminoglycan,GAG)是细胞基质的宁要组分之~-fi有重西的生物学功能。其代谢改变与许多重要的疾病如肿瘤转移、粘多糖病、大骨节病等有密切关系。GAG的基本结构单位是二糖,不同的GAG其二糖组成不同。对硫酸软骨素裂解酶ABC敏感的GAG有透明质酸、6一硫酸软骨素、今硫酸软骨素、硫酸皮肤素和软骨素,这些GAG酶解后生成的主要不饱和二糖产物及结构如图l‘’·”。分析GAG的二糖组成有助干了解GAG的结构、性质和功能。与纸层析、薄层层析等方法相比,应用高效液相色谱方法来分析**G的二糖组成具有灵敏、快速、简便等优点。本文根据现有实验条件,拟定了GAG酶解产物不饱和二糖的高效液相色谱(HPLC)分析方法。此方法对于与细胞外基质代谢紊乱有关疾病的研究具有实用价值。2实验部分2.1材料硫酸软骨素裂解酶(*m)(自行纯化;聚丙烯酸胺凝胶电泳显单一蛋白带);不饱和二糖标准品(日本生化学工业株式会社);咋哇(日...  (本文共4页) 阅读全文>>

《食品与药品》2012年01期
食品与药品

HPLC分析来自糖胺聚糖的不饱和二糖

二糖分析对于研究糖胺聚糖(GAG)的结构是非常重要的。GAG酶解后采用HPLC法测定生成的不饱和二糖是方便可行的。目前,有多种酶可将GAG降解成组成二糖,但尚未建立HPLC法来分析这些组成二糖,尤其是对硫酸化程度较高的二糖的分析。现有报道多采用化学改性硅胶柱配以等液有机溶剂流动相系统来分析这些组成二糖,但是,这种单溶剂系统色谱难以实现所有二糖的分离。此外,这种方法要求在色谱分离前必须将二糖从酶解液中提取至有机溶剂中。本次研究表明:采用HPLC法,使用氨基键合硅胶柱,并用磷酸二氢钠线性梯度洗脱,可成功分离硫酸GAG酶解得到的大多数不饱和二糖。通过分析多种精制GAGs酶解产物中的二糖,证明该方法是可行的。1材料和方法1.1不饱和二糖对照品酶解自透明质酸、硫酸软骨素和硫酸皮肤素的9个不饱和二糖对照品(日本生化学工业),酶解自硫酸乙酰肝素和肝素的6个不饱和二糖对照品(实验室自制)。用乙酰肝素酶和肝素酶酶解源自牛肾的硫酸乙酰肝素,得到的二...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国地方病防治杂志》1994年04期
中国地方病防治杂志

大骨节病患儿尿氨基多糖组分和二糖谱研究

大骨节病(KBD)的主要病理特征是软骨的变性和坏死,故分析研究KBD患儿软骨基质的重要成分之一蛋白多糖的变化对于探讨病因,发病机理及早期诊断指标均有重要意义。以往的工作已看到KBD患儿软骨代谢的异常m和尿氨基多糖的改变0]。本实验首次分析了KBD患儿尿氨基多糖(Glycosaminoglycan G.AG)的二糖谱,同时测定了尿GAG 3组分和血、尿、发硒含量,并与正常儿童进行对比研究,旨在进一步探明KBD软骨组织的生化代谢特点及其与硒的关系。1对象和方法1.1实验对象 按永寿大骨节病科学考察制定的x线诊断标准选取实验对象,KBD患儿为陕西省耀县和彬县KBD病区x线手片阳性儿童,对照组选自陕西省长安县·(远离KBD病区的非病区)和耀县(近邻KBD病区的非病区)x线手片阴性儿童,年龄7~13岁。1.2实验方法 . 采取受试者枕部头发和24h尿液,空腹静脉采血加抗凝剂。 硒测定用2.3~~二氨基萘荧光法。按小熊鲎等方法提取尿GAG成...  (本文共4页) 阅读全文>>

山东大学
山东大学

硫酸软骨素制备工艺改进

硫酸软骨素(chondroitin sulfate, CS)是一类硫酸化酸性黏多糖(acid mucopolysaccharide),重复二糖单位是[→4GlcUAβ1 →3Ga1NAcβ1→]。根据单糖组成的不同及硫酸基位置、数量的不同,CS可分为CS-A、CS-C、CS-D、 CS-E等类别。CS在医药、医用生物材料、功能食品等领域应用广泛,其作为药物或膳食补充剂用于心血管疾病、眼科疾病、骨关节炎等。中国药典2010年版中CS主要有3个来源,即猪的喉骨、鼻中骨、气管等软骨组织;此外还有海洋动物的软骨,牛、鸟类及人类食用家禽类的软骨等。CS结构具有高度的不均一性,早期认为CS-A、CS-C是分别存在的,一般认为CS-A多存在于陆生哺乳动物软骨中,CS-C多存在于海洋脊椎动物软骨中。不同种属、不同组织来源的CS结构和含量差异较大,生理功能也有差异,导致不同来源CS制剂临床效果差异问题出现。国内CS生产应用较多的是碱性酶解法,此法...  (本文共56页) 本文目录 | 阅读全文>>

《肿瘤》1996年03期
肿瘤

肺癌等肿瘤组织糖胺多糖的研究

糖胺多糖(glycosaminoglycan,GAG)是细胞外基质、基底膜和细胞表面的重要成分。现如细胞增生、分化、粘附、迁移等多种功能都与GAG的存在有密切关系,因此GAG发生改变时将直接影响细胞或组织代谢,进而导致生理功能发生障碍或出现病理现象。近年来国外有关肿瘤与GAG代谢的研究报道逐渐增多’‘,“。这些研究提示,GAG在肿瘤细胞的复制和分化过程中可能起重要作用。国内这方面的研究报道还较少,本文从GAG分子及二糖结构单位水平研究了9例人体不同部位的癌组织和癌周非癌组织GAG总量、组成及性质的改变,以探讨GAG代谢与肿瘤发生的关系。材料和方法样品来源正常肺组织取自急死尸检材料。癌组织和癌周非癌组织来源于经临床和病理确诊的癌患者(5例肺癌,2例直肠癌,l例食管癌,l例胃癌),手术取出癌组织和癌肿周围外观上“正常”的非癌组织(简称癌周非癌组织),置一20C冰箱保存,供生化分析。试剂与仪器软骨素酶ABC(自行制备);不饱和二糖标准...  (本文共4页) 阅读全文>>

权威出处: 《肿瘤》1996年03期
《食品工业》2018年10期
食品工业

不同来源和制备工艺硫酸软骨素的二糖分析

动物软骨中含有丰富的胶原蛋白和硫酸软骨素,具有很好的营养价值,也具有独特的医药和保健价值。其中硫酸软骨素具有抗炎[1-6]、抗癌[7-9]、抗凝血[10-12]和调节血脂[13-14]等生物活性,已广泛应用于医药、保健品和化妆品等领域。随着对硫酸软骨素的深入研究和开发,其结构和生物活性已成为国内外的研究热点。硫酸软骨素是由糖醛酸(葡糖醛酸GlcA/艾杜糖醛酸IdoA)和N-乙酰氨基半乳糖(GalNAc)构成的重复二糖单位组成的大分子多糖,相对分子量为5 000~50 000 Da,根据硫酸基团在二糖单位上的位置和数目的不同而将硫酸软骨素分为11种类型[15]。不同来源的硫酸软骨素的分子量、硫酸化程度、不同硫酸化二糖的百分比以及艾杜糖醛酸与葡糖醛酸的相对数量都不同,具有明显的种属和组织差异性[16]。而不同结构的硫酸软骨素具有不同的活性,Heyashi等[17]发现MK诱导的腹膜流出液巨噬细胞的迁移可被肝素、硫酸软骨素B和硫酸软骨...  (本文共5页) 阅读全文>>