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原位杂交染色法检测PTENmRNA,P73mRNA在肝外胆管癌中的表达及临床意义

肝外胆管癌(extrahepaticcholangiocarcinoma,E HCC)在临床上发病率不高,但其恶性程度很高,临床疗效很差。肿瘤细胞对PTEN失去反应而逃避PTEN信号转导途径的生长抑制作用,这种反应的丢失与PTEN的变异密切相关。P73基因所在的位置以及P73蛋白与P53蛋白在结构上的相似性,使其曾经被认为是一个肿瘤抑制基因,后来大量研究显示在一些癌细胞中P73蛋白是高水平表达[1]。本研究在分子水平上应用原位杂交法研究PTENmRNA,P73mRNA在胆管癌中的表达及相互关系,并分析它们与胆管癌的临床及病理分类、分化程度、转移情况等的关系,探讨它们与肿瘤生物学特性的关联及临床意义。1资料和方法1.1临床资料收集南通医学院附属医院1998年1月至2003年10月间手术切除并经病理证实的肝外胆管癌标本42例。其中男性27例,女性15例;平均发病年龄55岁(46~76岁);临床病理分期按TNM分期标准分:0~Ⅱ期25...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国医疗器械杂志》2017年03期
中国医疗器械杂志

全自动免疫组化和原位杂交染色机染色失败解决方案

沈萍,金晓婷上海儿童医学中心,上海市,200127该文分析总结了Leica Bond Max全自动免疫组化和原位杂交染色机染色失败的原因,以及对常见人员操作失误与机器自身故障进行了总结,并提供了对应的解决方案。全自动免疫组化和原位杂交染色机;染色失败R361.2SHEN Ping,JIN XiaotingShanghai Children’s Medical Center,Shanghai,200127To analysis the cause of dyeing failure of Leica Bond Max fully automatic immunohistochemical and hybridization insuit dyeing machine,we summarize people’s misoperating and own fault,then offer the corresponding solut...  (本文共2页) 阅读全文>>

《解剖科学进展》2002年02期
解剖科学进展

原位杂交染色的经验

近年来 ,分子生物学技术正以惊人的速度渗入医学和生物学的各个领域 ,原位杂交技术被广泛应用于医学科研中 ,但在具体实验过程中常常会遇到脱片、背景颜色深 ,着色不理想等问题 ,本实验组在实验过程中总结了一些经验 ,以供参考。1 材料与方法玻片处理 :将玻片洁净后用锡纸包好 ,置 180℃烤箱中烤4h ,分别用下列方法涂粘片剂 :①玻片于 1∶5 0的APES中浸泡 10sec ,室温干燥 10sec ,然后入丙酮Ⅰ中洗涤 10sec ,再入丙酮Ⅱ中洗涤 10sec。②将 0 0 1%PLL1小滴约 5 μl滴至玻片上 ,再用另一玻片紧贴于其上 ,相互摩擦以使两玻片相对的一面涂上PLL。③APES加PLL ,即用方法①处理玻片后再用方法②处理。以上三种方法制备的玻片 ,均分别于室温、37℃恒温箱、6 0℃恒温箱中干燥。比较干燥玻片的温度与组织片脱落的关系。④将明胶 2 4g、甲明矾 2 4g溶入 10 0 0mlDEPCI水中加...  (本文共1页) 阅读全文>>

《临床与实验病理学杂志》2004年04期
临床与实验病理学杂志

大鼠脑组织原位杂交染色的几点体会

近年来 ,原位杂交技术的发展和方法的不断改进 ,已广泛地应用于组织内的靶RNA定量定位分析。但由于组织的来源不同 ,进行原位杂交染色组织的各期处理也不尽相同 ,尤其是脑组织中其含大量磷脂成分 ,质地柔软 ,原位杂交染色一直难以取得令人满意的结果。本实验室采用大鼠脑缺血模型进行caspase 3原位杂交染色 ,结果较为理想。1 材料与方法1.1 材料  5 8例大鼠脑缺血模型 ,caspase 3原位杂交检测试剂 (购于武汉博士德公司 ) ,DAB显色液 (购于福州迈新生物技术开发有限公司 )。1.2 方法1.2 .1 脑组织的固定 先进行内固定 ,方法是把缺血模型的大鼠 ,用 10 %水合氯醛腹腔麻醉后 ,在手术显微镜下取出栓线 ,使血流再通。然后剪开胸腔 ,暴露心脏。从左心尖插入 7号针头 ,滴入 0 9%的温生理盐水 ,剪开右心耳 ,待右心耳流出的液体颜色变淡时 ,改用 4 %多聚甲醛液灌注 30min。大鼠四肢抽搐、震颤...  (本文共2页) 阅读全文>>

《肿瘤研究与临床》2005年01期
肿瘤研究与临床

原位杂交染色技术改进

0 引言近年来,原位杂交技术广泛应用于临床医学和基础医学的研究中,此技术是应用已知碱基顺序并带有标记物的核酸探针与组织、细胞中待测的核酸按碱基配对的原理进行特异性结合形成杂交体,然后应用与标记物相应的检测系统,通过免疫组织化学方法在核酸原有的位置进行细胞内定位。该技术步骤繁琐,实验过程中常会遇到组织脱片、背景着色深浅不均等,对判断结果影响很大。我们经过反复实验和长时间的积累得到了一些经验,以下以前列腺干细胞抗原的原位杂交实验为例,介绍如下。1 材料与方法1.1 标本前列腺癌及癌旁组织各50例取自山西省肿瘤医院病理科,术后均经病理证实。组织标本经10 %甲醛固定、常规石蜡组织包埋,5 μm厚的组织切片于60 ℃烘烤过夜备用。1.2 试剂PSCA原位杂交试剂盒购自博士德生物公司。1.3 方法1)切片常规脱蜡。2)0.2 mol/L HCl室温浸泡30 min。3)蒸馏水冲洗,滴加蛋白酶K 37 ℃恒温消化30 m...  (本文共1页) 阅读全文>>

《第三军医大学学报》2004年24期
第三军医大学学报

小鼠脑发育中CDK5 mRNA表达变化的研究

细胞周期素依赖性蛋白激酶 5 (cyclin dependentkinase 5 ,CDK5 )作为CDKs家族的成员之一 ,并不像其他CDKs成员参与细胞周期的调控 ,而是参与分裂后神经元的靶蛋白磷酸化 ,从而调节神经元的迁移、突起的生长[1] 和轴突模式的形成。成年动物的大脑是惟一一个含大量CDK5蛋白激酶活性的器官[2 ] 。最近的研究[3 ] 提示CDK5酶活性失调被证实与阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease ,AD)的发病有关。为了更多的了解CDK5基因在中枢神经系统发育中的生物学功能及病理作用 ,我们利用全胚胎及脑切片原位杂交技术观察了CDK5mRNA在脑发育中的表达及分布规律 ,尤其是神经胚形成这一阶段的表达变化规律 ,为进一步认识CDK5的功能、认识神经的发生与退变机制提供实验资料。1 材料与方法1 1 实验材料1 1 1 动物  成年昆明种小鼠 ,本校实验动物中心提供。动物喂养在昼 /夜循环为 1...  (本文共4页) 阅读全文>>