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西瓜花叶病毒2号外壳蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

西瓜花叶病毒2号外壳蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的表达万莉,刘俊君,彭学贤,黄学森(中国农业科学院郑州果树研究所河南郑州450004;中国科学院微生物研究所北京植物生物技术开放实验室)摘要以郑州地区西瓜花叶病病叶分离物——西瓜花叶病毒2号(2-WMV-)为毒源,从繁殖寄主西葫芦病叶中分离、鉴定了病毒。以病毒基因组RNA为模板,逆转录合成cDNA,通过多聚酶链式反应(PCR),从cDNA中扩增和克隆了病毒外壳蛋白(CP)基因,其中包括3’端非编码区,完成了全部核苷酸序列分析。CP基因全长1099个苷耷酸,其中编码区长903个核苷酸,编码301个氨基酸,3'端非编码区长196个核苷酸。Z-WMV-2CP基因的编码区比A-WMV-2,U-WMV-2两株系的CP基因编码区分别长出60个核耷酸,多编码20个氨基酸。与两个株系相比,编码区的核昔酸序列同源性分别为88.5%和87.0%,氨基酸序列同源性分别为90.0%和88.7%,3,端非编...  (本文共6页) 阅读全文>>

《植物病理学报》1988年04期
植物病理学报

感染西瓜花叶病毒2号(WMV-2)的哈密瓜种子带毒的证实

瓜类感染西瓜花叶病毒WMV一2后,种子是否带毒问题,各国学者一直持有不同看法,至今没有种子带毒的直接证据的报道。我区哈密瓜种子是否带毒关系到初侵染源,是逸取留种瓜和种子处理的理论依据. 按常规办法鉴定毒源,属于西瓜花叶病毒2号(WMV一2),试验甜瓜品种为102一2,七叶龄期人工接种WMV一2,第九片叶上开始表现花叶症状,第十四叶片上留蔓座瓜,成熟后采取种子.待测种子先用肥皂水递洗后再漂洗数次,催芽.待芽长Icm左右时,分别在比色板孔内研磨成糊状(内加2滴。.IMpH7.2磷酸钾缓冲液)制备液待用。采用免疫电镜法检测种子内的带毒情况. 1.暗密瓜种子带毒率观察 随机取哈密瓜种子108粒,逐粒进行免疫电镜观察,在9粒种子中看到病毒粒子,带毒率为8.5帕.病毒粒子数最多达7一8条,至少为l条.病毒...  (本文共1页) 阅读全文>>

西北农林科技大学
西北农林科技大学

西瓜花叶病毒基因组全序列分析及其蚜虫体内受体蛋白的分离与鉴定

西瓜花叶病毒(WMV)是马铃薯Y病毒属成员,由蚜虫以非持久性方式传播,广泛分布于世界各地,主要危害西瓜和甜瓜,引起花叶病。近几年该病害发生严重,已经成为制约西瓜和甜瓜高产稳产最主要的因素之一。本文完成了我国西瓜花叶病毒的基因组全序列的测定,在此基础上,克隆和体外表达了蚜传因子HC-Pro和CP蛋白,制备了相应抗体,利用Far western blot技术鉴定了其蚜虫体内的受体蛋白,并对三者互作关系进行研究,进一步阐明了非持久性传毒的分子机制。研究结果如下:1.利用RT-PCR和5′-和3′-RACE技术,克隆了西瓜花叶病毒基因组编码区和非编码区,经序列拼接,得到了WMV RNA的全长cDNA,GenBank登录号为DQ399708,命名为中国株系(WMV-CHN)。分析发现,WMV具有单链正义RNA基因组,全长为10037个核苷酸,具有单一的开放阅读框(ORF),5′-末端和3′-末端各有一段非翻译区(UTR),3′-末端具po...  (本文共108页) 本文目录 | 阅读全文>>

新疆大学
新疆大学

西瓜花叶病毒(WMV)外壳蛋白基因的转化及其抗病分析

甜瓜(Cucumis melo L.)不仅高产、优质,而且经济效益高,其市场销售范围也很广,在新疆栽培历史悠久,也是世界重要的经济作物。素有“植物癌症”之称的植物病毒病,是影响多种农作物减产的主要原因,在瓜类作物中造成的危害尤为严重。病毒病一旦大面积发生,甜瓜就会严重减产,品质下降,甚至绝收。而且病毒在田间还会经常发生复合侵染,这使得病毒病的防治更加困难。近几年新疆瓜果产业一直受到植物病毒的影响,而主栽甜瓜品种不抗植物病毒病,所以利用基因工程技术转化病毒来源的外壳蛋白基因也是一种可行的方法,由此开展实验并得到以下结果:1.从新疆吐鲁番收集的发病叶片,分离纯化后确定为西瓜花叶病毒。克隆获得西瓜花叶病毒外壳蛋白(coat protein,CP)基因序列,经HindⅢ与XbaⅠ酶切后插入pCAMBIA2300载体中,获得植物双元表达载体。2.以厚皮甜瓜伽师为材料,建立以子叶为外植体的快速高效再生体系。甜瓜子叶外植体接种在MSB+1.5...  (本文共70页) 本文目录 | 阅读全文>>

《西北农业学报》2003年04期
西北农业学报

几种中草药丙酮提取物对西瓜花叶病毒2号的抗性研究

植物病毒病是仅次于真菌性病害的一类重要病害,全世界每年因病毒病所造成的损失就超过150亿美元[1]。由于施用化学农药易造成环境污染且对非靶标生物直接毒害,以及植物抗药性的逐渐增加等原因,化学农药的使用受到一定的限制。从植物中寻找抗病毒活性物质,利用化学和生物学的方法从植物中提取对病毒具有抑制活性的成分对植物防御病害和生长发育都具有重要意义[2~4]。本研究用丙酮浸渍法对银杏、艾蒿、大黄、紫草、青蒿以及独活等11种中草药进行抗病毒活性物质的提取,并以西瓜花叶病毒2号(Watermel-onmosaic2potyvirus,WMV-2)为供试毒源,在西葫芦上对提取物进行了室内生物学防效测定和叶绿素含量测定,并对其抗病性作用进行探讨。1 材料与方法1.1 供试中草药供试中草药均购于杨凌中药店。中草药置于60~70℃干燥箱烘干后粉碎过40目筛(孔径0.37mm),密封标记备用(表1)。表1 供试中草药样品Table1 Samplesof...  (本文共4页) 阅读全文>>

《喀什师范学院学报》2006年03期
喀什师范学院学报

西瓜花叶病毒-2新疆株的桃蚜传播特性的研究

蚜虫是许多植物病毒的重要传播介体,因而受到广泛关注[1-11],西瓜花叶病毒-2(w aterm elonm osaic v irus-2)是世界范围的葫芦科植物的重要病毒[12],在我国也发现了这种病毒[13],WMV-2对包括甜瓜在内的葫芦科植物的生产构成很大威胁,该病毒属于马铃薯Y病毒组的一个成员,已有不少论文报道了对该病毒的研究[13-15].桃蚜是在包括葫芦科植物在内的多种植物上广泛发生的蚜虫,但未见有关桃蚜(M yzus persicae)传播西瓜花叶病毒-2新疆株(WMV-2-X J)的生物学特性的研究报道,桃蚜与西瓜花叶病毒-2新疆株(WMV-2-X J)的关系一直未能明确,本文以生物学和酶联免疫吸附方法研究了桃蚜传播西瓜花叶病毒-2新疆株(WMV-2-X J)的特点,为进一步揭示西瓜花叶病毒-2新疆株(WMV-2-X J)的流行规律和防治研究提供了基础性研究结果.1材料与方法1.1病毒毒源西瓜花叶病毒-2新疆株...  (本文共3页) 阅读全文>>