分享到:

ICR小鼠胚胎干细胞的分离、培养及鉴定

以小鼠胚胎成纤维细胞为饲养层,收集受孕3.5 d ICR小鼠的囊胚和桑椹胚进行培养,筛选纯化ES细胞集落,使其稳定传代后,对其形态学和生物学性状进行初步鉴定。结果表明,ES细胞有其  (本文共5页) 阅读全文>>

扬州大学
扬州大学

小鼠和山羊胚胎干细胞的分离与培养

近年来,胚胎干细胞(Embryonic stem cells, ESCs)以其所具有的全能性、多能性、可操作性及可塑性等诸多优点,成为医学和生命科学领域研究的热点问题之一。小鼠胚胎干细胞(mESCs)已在发育生物学、人类疾病和药物开发等研究领域中得到广泛应用,小鼠ESCs建系技术的丰富完善为建立人类和动物ESCs系提供了参照标准和理论依据。本实验以12.5~13.5d ICR小鼠胎儿制备小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)饲养层,比较了甘油和DMSO分别作为冷冻保护剂对MEF冷冻效果的影响;以3.5dICR小鼠胚胎为实验材料,探讨了胚胎不同发育阶段、血清、生长因子及传代方法对ICR小鼠ES细胞分离培养的影响。实验结果如下:1.在小鼠胚胎成纤维细胞冷冻时,采用含10%甘油的DMEM溶液作为常规冷冻保护液效果好于含10%DMSO的DMEM溶液,细胞活力分别为0.787,0.728。2. 3.5d的ICR小鼠胚胎大多为囊胚或桑椹胚,接种到ME...  (本文共76页) 本文目录 | 阅读全文>>

南京农业大学
南京农业大学

ICR小鼠胚胎多能干细胞的分离克隆研究

试验以ICR小鼠胚胎内细胞团(ICM)和原始生殖细胞(PGC)为材料,采用不同培养体系分离克隆胚胎多能干细胞,探讨ICR品系小鼠胚胎多能干细胞分离克隆的基本方法,以及一些因素对其分离、培养、克隆、传代等效果的影响。本试验对ICR小鼠胚胎多能干细胞的建系工作做了初步探索,为胚胎多能干细胞多种属广泛建系的研究打下一定基础,也为小鼠胚胎多能干细胞的深入研究积累经验并提供借鉴。研究结果如下:1.源于ICR小鼠ICM的ES细胞分离克隆研究试验以RH-CM为培养基培养处于不同发育阶段的小鼠胚胎,发现由囊胚分离的ES细胞传代后ES集落的出现率显著高于桑椹胚(P<0.05),故囊胚更适合作为ES细胞分离克隆的材料。以RH-CM为培养基的试验组ES细胞传代的平均时间间隔为38小时,对照组传代的时间间隔平均为78小时,两者差异是显著的(P<0.05)。表明RH-CM能够促进ES细胞贴壁增殖和ES集落的形成,有效的维持ES细胞未分化状态。试验中设计的...  (本文共74页) 本文目录 | 阅读全文>>

西北农林科技大学
西北农林科技大学

小鼠胚胎干细胞建系的研究

小鼠胚胎干细胞(Embryonic stem cells, ESCs)已在发育生物学、人类疾病和药物开发等研究领域中得到广泛应用,小鼠ESCs建系技术的丰富完善为建立人类和动物ESCs系提供了参照标准和理论依据。目前小鼠ESCs建系主要来自129小鼠,少部分来自C57BL/6J和BALB/c小鼠,除129及杂交小鼠ESCs建系比较容易外,其他品系小鼠ESCs建系比较困难,建系效率很低。昆明(KM)小鼠是国内广泛使用的实验动物,但其ESCs分离建系很困难,大多数情况下只能在体外传几代,却不能充分增殖。所以,仍需要继续研究昆明小鼠ESCs。本研究在优化小鼠胎儿成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblast, MEF)饲养层制备条件的基础上,比较不同添加物对昆明小鼠ESCs分离培养的影响;以129♂×KM♀杂交F1代小鼠胚胎为材料,分离培养小鼠ESCs,建立了该杂交小鼠ESCs的分离培养体系,获得了1株传52代的类E...  (本文共136页) 本文目录 | 阅读全文>>

西北农林科技大学
西北农林科技大学

小鼠胚胎干细胞定向诱导分化成骨细胞研究

胚胎干细胞(ES细胞),是存在于早期胚胎内细胞团(ICM)的一种多潜能细胞。在体外抑制分化培养时,ES细胞可无限增殖并保持正常的二倍体核型,一旦撤除分化抑制因素,或添加适当诱导剂,ES细胞可发生谱系分化或定向分化。本研究在回顾ES细胞研究文献的基础上,进行了小鼠ES细胞的分离与克隆、ES-D3细胞系的扩增和分化能力检测,以及应用成骨细胞条件培养基、维生素C、β-磷酸甘油和地塞米松进行了定向诱导ES-D3细胞系向成骨细胞的分化。1.MEF的分离与生长曲线小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)在24孔培养板内以密度5.0×10~3/mL,每孔接种1mL,间隔2d或4d换液1次,细胞增殖缓慢,倍增时间(Td)分别为47.13和47.96h,细胞活力较差。以密度5.0×10~4/mL,每孔接种1mL,每间隔2d换液1次,MEF增殖较快,Td为53.12h,第2~3d时需及时传代,否则细胞易出现老化卷层,间隔4d换液时细胞增殖速度减慢,Td为57....  (本文共146页) 本文目录 | 阅读全文>>

甘肃农业大学
甘肃农业大学

小鼠胚胎干细胞分离、培养及鉴定研究

本实验利用ICR品系小鼠13.5dpc的胚胎制备小鼠胚胎成纤维细胞,并以小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层;收集3.5dICR小鼠的囊胚和桑椹胚进行体外培养,筛选纯化ES细胞集落,使其稳定传代后,对其形态学和生物学性状进行初步鉴定。结果表明:1. ES细胞有其典型的形态学特征:集落呈鸟巢状,边缘清楚,表面平滑,结构致密,隆起生长,细胞之间界限不清楚;单个细胞体积小、核大。2. 对ES细胞碱性磷酸酶进行检测,在AKP底物NBT、BCIP作用下,未分化的ES细胞显微镜下为黄褐色,分化的不着色。3. 通过核型鉴定,ES细胞具有正常的二倍体核型。4. 在有滋养层未加入小鼠白血病抑制因子的条件下,小鼠ES细胞在F2代时将会分化成其它细胞;在有滋养层且加入小鼠白血病抑制因子时,生长至F8代及F11代又会发生分化。  (本文共46页) 本文目录 | 阅读全文>>