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肺炎克雷伯氏菌荚膜多糖表达量评价指标的建立及发酵条件优化

经临床分离得到的肺炎克雷伯菌Kp-9株具有丰厚荚膜,前期研究表明,其荚膜多糖具有良好的免疫调节作用,极具新药开发价值。现已证实,细菌荚膜的合成、分泌和表面表达均受基因调控,但荚膜表达量受宿主本身物理条件在内的多种因素影响,体内产生丰厚荚膜的致病菌,在体外营养丰富的培养基上荚膜却不甚明显,普通培养基或长期体外培养时多数细菌荚膜将会消失[1]。因此,体外扩大培养肺炎克雷伯菌Kp-9株,使其多糖高效表达,是药物开发的关键。我们对Kp-9液体培养条件进行了优化,同时为更好的评价活性物质表达量,首先研究建立了全菌ELISA法,作为发酵工艺有效的评价指标。1材料与方法1.1菌种肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae,Kp)Kp-9株。1.2培养基1.2.1 LB液体及固体培养基[2]1.2.2 W-F(Worfrl-Ferguson)培养基[2]1.2.3种子培养基(g/L)蔗糖20,胰蛋白胨10,NaCl 2,K2SO...  (本文共6页) 阅读全文>>

天津科技大学
天津科技大学

肺炎克雷伯氏菌荚膜免疫活性物质的研究

论文采用临床分离的具有国内肺炎克雷伯氏菌(Klebsiella pneumoniae)血清型流行特征的Kp CGMCC No.1000株,对其荚膜免疫活性物质CIA的微生物高效表达条件,制备工艺以及生物活性进行了系统研究,分离纯化了荚膜多糖CPS,以慢性髓系红白血病K562细胞为模型,对CPS诱导肿瘤细胞凋亡进行了初步研究,并对其一级结构进行了表征。首先建立了对Kp荚膜免疫活性物质的间接ELISA检测法,该法的检测灵敏度为0.031μg/mL,线性检测范围为2.5μg/mL~30.0μg/mL,其精密度和准确度均能满足检测方法的要求,适用于Kp荚膜免疫活性物质样品的大批量、快速检测;同时建立了Kp全菌ELISA检测方法,该法与菌体荚膜免疫活性物的间接ELISA法的检测结果呈正相关性,为发酵工艺优化提供了重要评价指标。确立了最适Kp生长和CIA表达的发酵条件及CIA制备工艺。最佳培养基为(g/L):蔗糖40,胰蛋白胨20,酵母粉1...  (本文共133页) 本文目录 | 阅读全文>>

《畜牧兽医科技信息》2019年05期
畜牧兽医科技信息

浅议鸭肺炎克雷伯氏菌病的诊治

肺炎克雷伯氏菌病是肺炎克雷伯氏菌所导致的一种传染性疾病,主要病变有肺炎以及其它器官化脓性病,在兔、鸭等家禽上均有可能发生,并具备发病率高跟死亡率高的特点。1发病情况某农场主王某在水库边建立了养鸭场,地势略有低洼情况,并饲养鸭子1100只。在2018年9月突然开始发病,病鸭临床症状包含有精神沉郁跟腹泻等,在发病一周后陆续出现病鸭死亡,死亡数有19只。检查鸭舍饲养环境发现,圈舍中存有粪便以及垃圾,湿度比较大,通风效果不好,氨味比较严重。随后到当地的畜牧站进行诊治,带来病死鸭6只。根据病鸭的临床症状、实验室检查结果以及剖检变化结果,确诊为鸭肺炎克雷伯氏菌病。2临床症状病鸭精神沉郁、羽毛蓬乱,体温升高到42.5~43.0℃,食欲不振,缩颈、呆立和翅膀下垂等,粪便为灰黄色或灰绿色,有不同程度的呼吸困难、喘气、胸腹起伏明显,呼吸次数达80次/min以上。鸭子发病后不时发出鸣叫声,声音沙哑,抬头伸颈,在鼻和眼部位有浆液性粘液,头部向下向后弯曲...  (本文共1页) 阅读全文>>

《河北畜牧兽医》2001年07期
河北畜牧兽医

兔肺炎克雷伯氏菌病的诊治

2001年3月19日,灵寿县灵寿镇小东关村某养兔场的杨二中饲养300余只兔发病。遂来我站就诊。其称兔场今年3月 16日至19日相继死亡兔子23只,病死兔大多为刚断奶的幼兔,我站给其诊治并痊愈,现将诊治情况报告如下: 1临床表现 头一天兔子无异常表现,第二天早晨发现病兔精神沉郁,不爱运动,食欲减退,有的打喷嚏,流稀水样的鼻汁。严重的,呼吸困难,极度衰弱,不久发生死亡。 2.病理剖检 对病死兔剖检...  (本文共1页) 阅读全文>>

《中国人兽共患病杂志》1988年06期
中国人兽共患病杂志

水貂颈部脓肿穿刺液检出肺炎克雷伯氏菌

sMzc。、先锋霉素、新霉素、链霉素、卡那霉素、霉素、抓霉素敏感,对青霉素G、氨茱青霉素、青霉素、红霉素、四环素抗药。根据上述特性,为肺炎克雷伯氏菌。 水貂脓肿病灶中分禽出此菌国内未见报道。国内水貂养殖业发展迅速,对此病应予注意。目前 本市某专业户水貂养殖场的水貂,陆续因颈部脓肿引起死亡。我们从脓肿部穿刺抽取脓液,接种于血平板及普通琼脂,37℃培养18一24小时,观察菌落特征并进行涂片染色镜检、生化反应及小白鼠毒力试验,鉴定为肺炎克雷伯氏菌,现报告如下。 一、形态与培养特性本菌为革兰氏阴性短粗杆菌,小白鼠心血涂片有肥厚英膜。血平板上菌落大而湿润,灰白色、凸起、粘液样,挑取时有粘丝。普通琼脂上生长丰厚。...  (本文共1页) 阅读全文>>

《广东卫生防疫》1988年03期
广东卫生防疫

肺炎克雷伯氏菌腹泻一例报告

由肺炎克雷伯氏杆菌所致的严重腹泻较少见。现将1 987年9月我市发现的肺炎克雷伯氏菌腹泻一例报告如下。患者欧某,男性,70岁,中山市小视镇某厂工入。因腹泻1天30余次、伴呕吐2次,于1987年9月2日下午入小视入民医院,翌晨,该院以t’i、急性胃肠炎,2、副霍乱待排除”报我站。患者一向在单位食堂就餐,入院前一天(9月1日)中午在食堂食豆腐。当日下午三时,觉腹部隐痛,继而腹泻,排黄色水样粘液便。同一食堂其他进餐者,未发现类似情况。 .入院时体检,T36℃,P68次/分,R16次/分,仑P106/70mmHg,患者神志清楚,倦怠,唇轻度发纷,眼窝凹陷,皮肤弹性略差,无黄染。桶状胸,心音遥远,律整,未闻及病理性杂音。双肺呼吸音减弱,未闻哆音。腹平软,无包块,矛明显压痛,肝脾未们及,肠鸣音亢进。实验室检查,RBC54o万/mm3,H b 179%;WBCl000o/mm,,杆状7%,分叶77%,淋巴16%,血钾21.8mg%,血钠3ol...  (本文共2页) 阅读全文>>

《生物技术通报》1989年07期
生物技术通报

固氮作用

892245携有与肺炎克雷伯氏菌nifE,nifN,nifX,nifs和nifV同源基因的R打odobae-tercapsulatuo nif基因区段的核普序3jJ〔会,英〕/Moreno一Vivian,C.…了7th Internatl。Cong。Nitrogen Fixation,Book of Abs一1988一7一03 R.ca川心心。基因至少有三个不连锁的nif基因簇。一个称为nif区段A,携有能与肺炎克雷伯氏菌(Kleb:‘。11。力。。。。o。i-ae)nifE,nifs,nifA和nifB探针杂交的片段。nifE同源片段和邻近区段已分析了DNA序列.在已测序列的DNA片段中有三个开读框净将这三个开读框的已推断出的氨基酸序列与肺炎克雷伯氏菌和首稽根瘤菌相应蛋白比较,鉴定了R.eaPs“la才uo中类似nifE,nifN和nifX的基因。一个nif同感启动子序乒{是在R.eaPsola了uonifE基因前区28bp处...  (本文共3页) 阅读全文>>