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嗜热芽孢杆菌β-半乳糖苷酶发酵条件研究

β-半乳糖苷酶(EC.3.2.1.23),又称乳糖酶。它能水解乳糖生成半乳糖和葡萄糖,有些酶还具有催化半乳糖苷转移反应,生成半乳糖低聚糖(GalOS)[1]。β-半乳糖苷酶用来治疗乳糖不耐症和处理加工牛乳、乳清等,生产低乳糖牛奶和低乳糖乳制品及减少环境污染。近年,利用β-半乳糖苷酶生产低聚半乳糖也受到重视。β-半乳糖苷酶存在于动物、植物和微生物中,以微生物居多。国外已有报道。国内的研究较少,郑铁曾对产β-半乳糖苷酶菌株进行筛选[2];曾元光等研究大肠杆菌β-半乳糖苷酶纯化与鉴定[3]。目前,人们注重对耐热β-半乳糖苷酶的研究,因为这些酶的反应温度较高,这对于酶在乳品工业的应用有两个优点:加快反应速度和减少微生物的污染。文献已有一些关于嗜热和耐热菌β-半乳糖苷酶纯化及特性方面的报道[4],但还未见有关嗜热芽孢杆菌(Baci-llussp.)β-半乳糖苷酶发酵方面的研究。本文以Bacillussp.为出发菌株,对发酵培养基成分和发酵...  (本文共5页) 阅读全文>>

《复旦学报(自然科学版)》1989年04期
复旦学报(自然科学版)

脂肪嗜热芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus)产生的限制性内切酶BstFI、BstSI的分离鉴定

好热细菌所产生的限制性内切酶能用于高温(60℃~65oC)下的酶切反应,高温条件下进行DNA酶切有许多优点:(1)能抑制好温生物DNA提取中各种核酸酶的作用,(2)好温生物中特别是真核生物染色体DNA中的冬T富集区会局部解链,以致限制性内切酶不能酶切这些区域内的位点,故能得到分子量较大的DNA片段[l1;(3)A--T富集区往往是转录活性区域[,],用热稳定性高的限制性内切酶在高温中进行酶切,能得到较多完整的、有转录活性的基因[’]. 压nd Hl和Aval最早是分别从流感嗜血杆菌(Hae饥。户““感可l“哪“)和变异链蓝藻形球菌(Na阮呱a。而ab祝翻)中分离得到的[’l“〕.现已发现不少细菌具有Hind IH的同切酶,但只有极少数菌中有Aval的同切酶.但在好热性细菌中还未见有产生Hind111和Aval的同切酶的报道.我们从两株脂肪嗜热芽抱杆菌FH58和5183中分别分离到功nd nl和Aval的同切酶BstFI和BstS...  (本文共6页) 阅读全文>>

福州大学
福州大学

嗜热芽孢杆菌基因重组CGTase表征及高效表达

为了提高嗜热芽孢杆菌CHB1产CGTase的工业化潜力,本论文对嗜热芽孢杆菌CHB1来源的CGTase基因进行克隆表达,研究其酶学特性,并从信号肽筛选、发酵条件优化和添加化学通透剂等方面探讨重组CGTase胞外分泌。论文主要研究内容与结果如下:1.将来源于嗜热芽孢杆菌CHB1的CGTase基因插入到分泌型原核表达质粒pET22b(+)的PelB信号肽序列下游,构建重组表达质粒pET22b(+)-cgt,并将其导入E.coli BL21中诱导表达,实现了重组CGTase的胞外分泌。2.采用镍柱进行一步亲合层析,获得电泳纯的重组CGTase。以α-环化活性为指标,重组CGTase的最适反应温度为60℃,最适反应pH为5.0;该酶在40℃保温1h,酶活稳定,在50℃~80℃条件下,半衰期为35min~15min;Ca~(2+)、Mg~(2+)、Li+、Ni+对酶活具有促进作用,Na+、Zn~(2+)、Cu~(2+)、Fe~(3+)等金...  (本文共93页) 本文目录 | 阅读全文>>

《遗传学报》1979年01期
遗传学报

产α-半乳糖苷酶嗜热芽孢杆菌的选育

二半乳糖普酶催化棉子糖的水解,可以提高甜菜制糖中的蔗糖得率。我们从专性嗜热芽抱杆菌中筛选到产二半乳糖普酶的菌株T 59(尚未鉴定)。该菌株生长温度在45一60℃范围内,本实验培养温度为”℃。 T59的a-半乳糖普酶为半组成型,棉子糖等对于二半乳糖普酶的诱导能力的大小次序是:蜜二糖、半乳糖棉子糖、乳糖。 用亚硝基孤诱变,再在含有蜜二糖或葡萄糖的完全固体培养基上交替培养10次,选出在不含棉子糖的完全培养基上显示较高酶活力的组成型菌株NZ一34。该菌株在诱导培养基上生长时酶活力约为原有菌株的2.5一3.5倍。N厂34培养在含葡萄糖(0.5多)和棉子糖(0 .2%)的完全培养基上时,生长和酶活力都显然受到阻遏。相同菌浊度所含的酶的活力只有生长在含棉子糖的完全培养基上的菌液的1/4。 用亚硝基孤对N厂34再进行诱变,在含1务葡萄糖的完全培养基上筛选得到生长速度加快的菌株N厂3468。该菌株不再受葡萄糖阻遏,在含。.5多葡萄糖的完全培养基上...  (本文共1页) 阅读全文>>

《遗传学报》1983年05期
遗传学报

脂肪嗜热芽孢杆菌质粒pFD101的限制性内切酶图谱

、从高温细菌中分离得到斗株含有质拉的脂肪嗜热芽抱杆菌(江行娟等“高温细菌质拉调查J,,微生物学报,待发表),我们对其中1株T525所含的质粒pFD101进行了限制性内切酶酶解分析,为进一步研究常温细菌和高温细菌的杂种质拉提供资料。 沙弓一子 方法和材料一、·‘ 养培基成份、培养方法、质拉抽提与纯化,以及电泳和电镜所用方法参见江抒娟等“高温细菌质粒调查,,一文(微生物学报,待发表)。一、 限制性内切酶:月户召n为美国New England公司产品;Hi耐m、命11、石印班、肠,Hl、凡红为美国Miles公司产品。 限制性内切酶反应液:H坛dIH按美国Mile:公司产品说明书所载,略去BS人(‘mM升i:,pH7.5,。omMNacl;6mM MgCI:配成lox母液备用)。其他酶反应液均按Bing抽切等闭的方法。双酶解时则一律使用Hi耐m的反应液。DN,I对质粒DNA作局部酶解时按Roth等闭的方法。 结果 (一)从两个实验结果可...  (本文共5页) 阅读全文>>

《乳业科学与技术》2011年01期
乳业科学与技术

牛乳超高温灭菌前后芽孢杆菌分离鉴定

超高温灭菌奶的工艺流程为:原奶接受→标准化→均质和巴氏杀菌→配料→超高温杀菌(UHT)及均质→无菌灌装。整个过程中,原料奶中原有的部分微生物会生长繁殖,而在运输、贮藏过程中又难免会沾染空气、管道、储藏罐等中的其他微生物。因此超高温灭菌作为最后一道灭菌工序显得极为重要。UHT热处理(Ultra High Temperature Heart Treatment)通常指原料乳被加热到137℃~150℃并在此温度下保持2 s~20 s的热处理过程。经过这一温度/时间组合的热处理后,乳制品中将不再含有在室温贮存条件下可生长繁殖的微生物,达到商业无菌的要求。依据细菌的最适生长温度区域,可把细菌分为低温菌、嗜冷菌和嗜热菌。嗜冷菌、嗜温菌和低温菌的营养体对对UHT处理很敏感,在UHT处理过程中将会失活,但是嗜温菌的芽孢,包括绝大部分的需氧芽孢和部分厌氧芽孢(如柱状芽孢杆菌)和耐热菌的芽孢却是很耐热的。因此,UHT处理的重要对象是芽孢。芽孢杆菌属...  (本文共4页) 阅读全文>>