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促卵泡素和促黄体素对猪卵母细胞体外成熟的影响

FSH和LH在卵母细胞体内成熟的过程中起重要作用,两种激素在卵母细胞体外成熟培养中也最常用。但对它们的应用效果和应用剂量一直存在较大争议。不同的研究得出的结果差别较大,使用的剂量差别也很悬殊。由于不同的研究所使用的体外成熟培养系统不同,使用激素的纯度也存在差别,造成了培养的不同效果。所以根据不同的体外成熟培养条件,选择适合的激素及其适宜的浓度,以达到最佳的体外成熟效果是完全可行的。因此,本试验为进一步探讨FSH与LH对猪卵母细胞体外成熟的影响,确定其对猪卵母细胞体外成熟的作用,找到其合理的使用剂量。1材料与方法1.1体外成熟培养液的配制体外成熟培养液为改良的TCM-199(m TCM-199)液,其成分为含Earle’s盐的TCM 199(GIBCO)添加4.12 m m ol/L乳酸钙,0.91 m m ol/L丙酮酸钠,3.05m m ol/L的D-葡萄糖(Sigm a),根据实验设计再添加不同浓度的FSH和LH(宁波激素制...  (本文共3页) 阅读全文>>

《安徽农业科学》2007年14期
安徽农业科学

猪卵母细胞体外成熟的影响因素

卵母细胞体外成熟(IVM)的研究可为胚胎发育生物学、体外受精及转基因动物、核移植等技术的研究提供理论依据。意大利科学家Mattiol最先进行猪卵母细胞的体外培养研究,并且用体外成熟的卵母细胞进行体外受精,获得了第1例试管猪。目前体外成熟培养环境还远未达到体内的生理水平,猪卵母细胞体外成熟受多种因素影响。1卵母细胞的采集1.1卵泡大小及形态几乎所有的试验都表明,来自直径3~6 mm卵泡的卵母细胞形态最好,培养效果最佳。从育龄盛期的健康成年母猪获得的卵母细胞形态完好,体外成熟培养效果好。来自明亮卵泡的卵母细胞的成熟率明显高于来自浑浊卵泡的卵母细胞。1.2卵巢保存时间与温度卵巢离体时间越短越好,通常情况下卵巢离体时间应在3 h之内。体外成熟率、体外受精率、卵裂率有随离体时间的增长而降低的趋势[1]。较适宜的卵巢送达温度范围是32~35℃。一旦卵巢回收温度低于25℃,猪的卵母细胞将受到低温应激,温度还将通过影响猪卵母细胞的体外成熟继而影...  (本文共2页) 阅读全文>>

《安徽农业科学》2007年08期
安徽农业科学

猪卵母细胞孤雌激活的研究

孤雌生殖(parthenogenesis)一词最早由Owen(1849)提出,是指有性生殖的动物卵子不经过精子的受精作用而被激活,并开始胚胎发育的无性生殖过程。一般来说,胚胎正常生长需要雄性DNA,因为某些基因只有从父亲那里继承过来,才能被激活,并发挥它们应有的功能。而孤雌生殖的个体直接来自卵子,遗传物质与卵子一致。自然界中,孤雌生殖现象在无脊椎动物和低等脊椎动物中较常见,哺乳动物卵自发激活(Spontaneous Activation)生成畸胎瘤的现象时有发生。20世纪80年代以来,研究不断深入,尤其是进入90年代,随着哺乳动物细胞核移植研究的开展,卵母细胞的孤雌激活得以较为系统的研究,在研究动物、家畜及人卵母细胞激活方面均取得较大进展[1]。1卵母细胞孤雌激活的机制受精时,卵子的激活与成熟促进因子(MPF)的失活是由一系列的细胞内Ca2+多次持续波动引起的[2]。精子激活卵母细胞的机制有2个主要假说。其一是精子与卵母细胞外膜...  (本文共2页) 阅读全文>>

《中国农业科学》2007年07期
中国农业科学

猪卵母细胞透明带弹性系数—杨氏模量测定

0引言【研究意义】本文研究了猪卵母细胞透明带的力学性质,旨在进一步研究猪卵母细胞和胚胎在不同发育阶段的透明带弹性模量变化及其影响因素。透明带是一层包被在卵母细胞外的糖蛋白“外衣”,它保护脆弱的卵母细胞和胚胎不受外界伤害[1]。透明带也是精子进入卵母细胞的主要障隘之一。对于哺乳动物精子穿过透明带的机制,目前仍不十分清楚,机械理论和酶学理论均有一定的依据,目前人们推测顶体酶类在精子与透明带结合和进入透明带中起重要作用,而精子尾部产生的机械推动对精子在透明带中的持续前进起作用[1]。可以推测,透明带在卵母细胞成熟前后、受精和胚胎早期发育过程中可能发生一些化学和物理学变化,而这些变化可能关系到受精以及早期胚胎的发育。另外,阻止多精子受精的机制除了雌性生殖道减少精子自发到达卵母细胞表面的数目与皮质颗粒、卵质膜封闭作用和透明带反应[1]外,是否还与透明带的力学性质有关,目前还尚未见有报道。鉴于透明带对于受精生物学具有极其重要的作用,因此非常...  (本文共6页) 阅读全文>>

《中国畜牧杂志》2007年03期
中国畜牧杂志

猪卵母细胞玻璃化冷冻保存技术的研究进展

动物卵母细胞是母系遗传信息的载体,卵母细胞的长期冷冻保存,在动物繁育、遗传资源保护、资源共享与交换、挽救濒危动物和动物克隆生产等方面都具有独特的优势和应用价值。近年来,随着动物胚胎生物技术(如核移植、体外受精、胚胎体外生产等)的迅速发展,对卵母细胞的需求日益增加,仅通过回收体内成熟卵母细胞已经无法满足科研和生产的需要。而从屠宰场回收卵巢加以利用以获取大量卵母细胞,可望成为一条方便、快捷和有效的途径。自Whittingham[1]首次成功冷冻成熟小鼠卵母细胞以来,卵母细胞冷冻保存研究已涉及到多种哺乳动物。迄今为止,冷冻-解冻卵母细胞已在小鼠、兔、牛等动物及人类获得成活后代。在猪上,由于其卵母细胞胞质内含有大量的脂滴,对低温极其敏感,冷冻保存十分困难。目前,猪胚胎(尤其是桑椹胚和囊胚)冷冻保存研究已取得进展,经解冻和胚胎移植后已有多例成活冷冻胚猪产生[2],但猪卵母细胞冷冻保存一直进展缓慢,大多数报道仍仅限于猪卵母细胞的冷冻形态学研...  (本文共3页) 阅读全文>>

《黑龙江畜牧兽医》2007年07期
黑龙江畜牧兽医

促卵泡素与促黄体素对猪卵母细胞体外成熟的影响

促卵泡素(FSH)与促黄体素(LH)是参与卵母细胞成熟的最重要的蛋白质激素,在猪卵母细胞体外成熟培养中使用较多。大部分研究已经证实了促性腺激素(FSH、LH)在猪卵母细胞体外成熟培养中的重要作用。为进一步探讨FSH与LH对猪卵母细胞体外成熟的影响,确定其对猪卵母细胞体外成熟的作用,找到其合理的使用剂量,进行了试验,现报道如下。1材料与方法1.1猪卵丘卵母细胞复合物(COCs)的收集与成熟培养摘取刚屠宰母猪的卵巢,放入30~35℃的生理盐水中,在3 h内运至实验室。用带12号针头的10 mL一次性注射器抽取卵巢表面直径2~6 mm的卵泡内卵丘卵母细胞复合物(COCs),选取卵母细胞质均匀并具有3层以上致密卵丘细胞的COCs进行培养。卵母细胞培养采用微滴法,每个微滴50μL左右,覆盖矿物油,在CO2培养箱内平衡2 h以上。采集的COCs用杜氏磷酸盐缓冲液(PBS)洗3次,然后用成熟培养液洗3次,移入已平衡好的培养滴中,每滴放COCs...  (本文共2页) 阅读全文>>