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竞争性RT-PCR法定量检测糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D基因的表达

糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D (GPI PLD)是目前在人体内发现的唯一能水解GPI锚定蛋白的磷脂酶。人血浆中含有丰富的GPI PLD ,主要来源于肝脏、胰腺和骨髓[1 ] 。白细胞以及白血病细胞株如K5 6 2 ,HL6 0等均有表达[2 ] 。有研究表明白血病病人的血浆GPI PLD活性明显低于正常人[3] ,但是导致该酶活性下降的分子机制还不清楚。在白血病、肝癌、肾癌等恶性肿瘤中 ,与信息传导及免疫抑制有关的GPI锚定蛋白 ,如CD2 4 ,CD6 6 ,CD87,CD5 5和CD5 9等呈高度表达[4~ 7] 。因此 ,研究GPI PLD基因的表达水平与它们之间的联系将具有重要的临床意义。目前检测GPI PLD基因表达水平的常用方法是RT PCR ,它用 β actin作为外参照 ,通过计算GPI PLDcDNA与 β actincDNA的比值来表示GPI PLD基因的表达量 ,这样只能得到GPI PLD基因的相对表达...  (本文共5页) 阅读全文>>

《湖北农业科学》2014年05期
湖北农业科学

磷脂酶D的抗逆特性及其活性检测研究

1概述1.1磷脂酶概述磷脂又称磷酸甘油脂,广义上是指磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)和神经鞘磷脂(SM)的复合物,狭义上即为磷脂酰胆碱[1],是构成生物细胞膜骨架的主要成分,对维持细胞结构的稳定具有重要意义,并且参与细胞代谢和神经细胞的信号传递,同时其水解产物能参与多种生理过程以及环境刺激所引起的细胞反应[2],在细胞的生命活动中起着重要的作用。磷脂的降解酶有多种,而磷脂酶则是催化降解磷脂第一步反应的关键酶[3],此过程是在植物细胞膜上普遍存在的信号转导途径。磷脂在磷脂酶作用下水解为脂肪酸、肌醇三磷酸(IP3)、磷脂酸(PA)、二脂酰甘油(DAG)及乙酰胆碱等。根据其水解磷脂的部位不同可以把磷脂酶分为5类,即磷脂酶A1(Phospholi-pase Al,PLA1)、磷脂酶A2(PhospholipaseA2,PLA2)、磷脂酶B(Phospholipase B,PLB)、磷脂酶...  (本文共4页) 阅读全文>>

《化工学报》2012年03期
化工学报

产磷脂酶菌株的筛选鉴定及其应用

联系人:李春。第一作者:姜芳燕(1984—),女,博士研究生。Received date:2011-07-06.Corresponding author:Prof.LI Chun,lichun@bit.edu.cnFoundation item:supported by the National S&T Major WaterProject of China(2008ZX07207-003-03).引言磷脂酶(phospholipase,PL)是一类能水解磷脂酯键的水解酶,可广泛应用于油脂精练、磷脂改性、饲料添加剂和医药等方面[1]。在油脂精炼中,磷脂酶主要应用于脱胶过程,即酶法脱胶。其原理是利用磷脂酶将毛油中非水化磷脂水解掉一个脂肪酸,生成溶血磷脂。而溶血磷脂具有很好的亲水性,遇水时可形成液态水合晶体,从油中析出脱除[2]。与传统脱胶法相比,酶法脱胶具有反应条件温和、速度快、副产物少、用水量少和废水排放少等特点,所以酶法脱胶作...  (本文共7页) 阅读全文>>

《江西农业大学学报》2011年05期
江西农业大学学报

水稻磷脂酶A活性测定方法的研究

磷脂酶广泛参与了动、植物的信号转导过程,是由胞外信号到胞内信号过程中的关键性的调节酶。其中,磷脂酶A(Phospholipase A,PLA)在植物激素茉莉酸(Jasmonic acid,JA)生物合成前体物α-亚麻酸(Linolenic acid,LA)的形成中起重要调节作用。植物体在受到外界刺激后,PLA活性提高,促进细胞膜磷脂水解而释放出LA,LA进入JA生物合成途径形成JA[1-3]。以JA和茉莉酸甲酯(Methyl jas-monate,MeJA)为代表的茉莉酸类(Jasmonates,JAs)是对植物生长发育具有广泛生理效应的一类新型植物激素[4-5]。研究表明JAs在植物生殖调控中发挥重要作用。JAs参与拟南芥的雄性育性的表达[6-8];MeJA可使不育光温条件下的光敏核不育水稻N5088S的育性在一定程度上得到恢复[9];MeJA能抑制水稻和油菜花粉萌发[10-11];JAs能诱导水稻等禾本科植物的颖花开放[12...  (本文共4页) 阅读全文>>

《粮油加工》2010年07期
粮油加工

磷脂酶D制备及应用的研究进展

磷脂酶是指能催化磷脂各种水解反应的一类酶,根据其水解磷脂位置的不同,可分为4类:磷脂酶A1、磷脂酶A2、磷脂酶C和磷脂酶D(PLD)。磷脂酶D(EC3.1.4.4)是作用于磷脂分子中磷酰氧键(P-O)的一类酶,可催化发生两种反应:其一,水解磷脂生成磷脂酸和羟基化合物;其二,当有另一种含羟基的化合物存在时,可催化其结合到磷脂的碱基上,形成新的磷脂,此为PLD的转磷酯化反应或碱基交换反应。PLD广泛存在于各种动植物和微生物(细菌、真菌)体内。植物PLD主要集中分布在植物叶子、根和种子等器官中,动物PLD主要分布于脑、肝脏等组织中。微生物PLD的研究始于20世纪70年代,产PLD的微生物种类繁多,如细菌、酵母等,尤其是产自链霉菌的PLD,表现出较好的水解和转磷酯活性。PLD具有宽泛的底物特异性,能广泛地作用于多种磷脂及其衍生物,其应用研究主要集中在两个方面:一是通过转磷酯化反应,从卵磷脂出发,富集自然界含量较少的磷脂化合物,如磷脂酰甘...  (本文共3页) 阅读全文>>

《内蒙古林业科技》2009年01期
内蒙古林业科技

植物的磷脂酶D

磷脂酶D(Phospholipase D,简称PLD)即磷脂酰胆碱磷脂水解酶(EC3·1·4·4),属催化磷酸二酯键水解和碱基交换的一类酶的总称。早在1947年Hanahan和Chaikoff[1]就从胡萝卜和白菜叶的提取物中发现了具有活性的PLD,但由于其多型性和不稳定性致使在此后的很长一段时间没有得到充分的利用。直到1994年Kansas州立大学的王学敏教授利用萌发中的蓖麻种子的子叶作为试验材料,经过提取、分离与纯化,获得有活性的PLD,利用反转录技术获得cDNA[2]。现已从白菜、胡萝卜、黄瓜[3]、罂粟[4]、草莓[5]甘蓝[6]、花生[7]、番茄[8]、水稻[9]、玉米[9]、葡萄[10]等多种植物中发现并提取PLD。1 PLD基因的生化结构特点PLD基因属于多基因家族,具有多分子异质性,在植物中PLD至少有6种类型12个成员,即PLDα1,PLDα2,PLDα3,PLDβ1,PLDβ2,PLDγ1,PLDγ2,PLD...  (本文共3页) 阅读全文>>