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寡核苷酸探针在法医学上的应用研究

寡核苷酸探针在法医学上的应用研究齐守文,杜立新,谭丽,申成斌(河南省高级人民法院郑州450003河南医科大学第二附属医院妇产科郑州450003河南省公安厅郑州450003)摘要采用寡核苷酸探针(CAC)_5对河南汉族50名无关个体和两个家系10名成员进行了DNA指纹检验。结果:得到了清晰可辨的寡核苷酸指纹图谱。经统计学处理,无关个体的相关机率为9.8×10~(-10)。家系调查表明,亲代与子代之间,杂交片段的遗传符合孟德尔法则。提示:寡核苷酸探针(CAC)_5在法医学个人识别和亲权鉴定中具有重要的实用价值。关键词寡核苷酸指纹;(CAC)_5探针;法医学;应用中图分类号R89在人基因组的基因间区或内含子等非编码区内,散在分布着与小卫星相似的另一类简单重复DNA(simplerepeatitiveDNA)[1],如GATA、GACA、CA、CAC等,由于这些重复单位在人基因组中出现的数目和频率不同而表现出多态性。用这些简单重复单位或...  (本文共4页) 阅读全文>>

《遗传学报》1993年05期
遗传学报

寡核苷酸探针进行DNA指纹分析在法医学上应用的评价

我们在文献〔l]中报道了(CAC),/(GTG),探针在北京地区人群中两个无关个体间钓相关机率为3.8 x 10一l.,其杂交带在亲代与子代间的传递符合孟德尔遗传规律。本文就与法医学实际应用有关的问题,对该探针进行了进一步的研究,现将研究结果报道如下。 材料和方法 (一)材料 1.陈旧血痕由本实验室制备,室温保存时间分别为2周、1年和3年。 2.混合斑由本所人员自愿提供,并同时提供血液。 3.肌肉、肝脏、脾脏等组织由本所法医室提供。 4.限制性内切酶Hiofl、Haelll美国New England Biolab公司制备。 一5.T4多核昔酸激酶美国New England Biol;b公司制备。 石.同位素1一,甲一ATP中国原子能科学院同位素所生产。 7.蛋白酶K购自北京化学试剂经营部。 8.琼脂糖上海东海制药厂生产。 ,.x光胶片天津感光胶片厂生产。 10.探针(CAC),/(GTG矢由本所合成,其碱基顺序在文献[1]中报道...  (本文共7页) 阅读全文>>

《生物技术通讯》2010年04期
生物技术通讯

寡核苷酸探针制备的优化

生物芯片技术起源于20世纪80年代后期,伴随着人类基因组计划的进展而发展起来。其高通量、集成化的优势已被应用于突变检测、多态性分析[1]、药物筛选[2-3]、基因诊断及预测疾病转归[4-5]等多个领域,具有明显的产业化前景。基因芯片包括DNA芯片、cDNA芯片、RNA芯片等,是生物芯片技术发展最早、最为完备的一个分支。基因芯片的技术流程大概有3个步骤,即微阵列的构建、靶基因的制备和杂交、检测和数据分析处理。无论何种芯片,微阵列的制备都是芯片技术的前提。目前各类文献中应用的芯片多以生物技术公司制备的商品化芯片为主,其密度高,稳定性尚可,但价格十分昂贵,且涉及基因范围有限,这在一定程度上限制了芯片的推广和应用。国内有多家研究机构在尝试从玻片或其他基质上自行构建微阵列,但各自报道的技术流程差别很大,结果也有待标准化。我们探讨了在微阵列制备中探针缓冲液不同pH值、离子强度及探针浓度等条件对分子杂交的影响。1材料与方法1.1材料PCR试剂...  (本文共4页) 阅读全文>>

《四川大学学报(医学版)》2009年02期
四川大学学报(医学版)

癌症诊断芯片的癌-睾丸基因的寡核苷酸探针的设计

癌-睾丸(cancer-testis,CT)基因,在睾丸中能够正常特异性表达,在体细胞组织中受到抑制,而在一些肿瘤中异常表达。由于大多数CT基因在癌症患者体内诱导产生免疫响应,因此又被命名为“癌-睾丸(CT)”抗原[1]。目前大约已鉴别了44个CT抗原家族成员,但它们在肿瘤发生过程中所发挥的作用还有待研究[2]。这种睾丸特异基因在肿瘤中的异常再表达,是癌细胞中基因表达整体反常的结果,也可被用作癌组织中整个基因组表达失调的“传感器”。基因芯片(gene chip),又称DNA微阵列,其基本原理是通过杂交检测DNA信息,即样品DNA/RNA通过PCR/RT-PCR扩增后用荧光标记,当带有荧光标记的样本核酸序列与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时,通过确定荧光强度最强的探针位置,获得一组序列完全互补的探针序列,据此可重组出表达最强的靶核酸的序列并同理获得样品中与芯片探针互补的其他基因序列及表达的信息[3]。利用基因芯片,可以对...  (本文共5页) 阅读全文>>

《生物化学杂志》1990年03期
生物化学杂志

化学法合成生物素标记寡核苷酸探针

目前发展起来的非放射性标记探针有生物素探针,酶联探针以及以荧光物质、半抗原、金属或糖基标记的核酸探针等〔2一‘,‘2,。其中以生物素探针研究应用最为广泛,其探测的灵度可达0.5一ipg[,]。 若待测核酸序列是已知的,根据序列,人工合成20个左右的寡核昔酸,用沪ZP ATP在其5‘OH基上标记’ZP,得到人工合成的探针,它在生物技术研究中已广泛被应用。但由于’ZP探针的半衰期短,价格贵及防护、污染等问题,和应用非放射标记核酸一样,人们也在研究非放射性标记的寡核昔酸作为基因分析的工具。用生物素标记寡核普酸已有不少研究。以Bi。一n一dUTP为底物在末端转移酶的作用下,在寡核普酸的3‘oH上加上一个生物素标记的dUMP,方法简单易行【“〕。也有人利用化学法将生物素连接到寡核昔酸的5‘端〔7,。最近我们已报道了酶促生物素寡核普酸探针及其应用〔’5」,本文又进一步研究了化学法生物素标记寡核昔酸,并与酶标法进行了比较。材料与方法一、试剂与...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中国微生态学杂志》1991年02期
中国微生态学杂志

遗传聚类群特异的寡核苷酸探针

近十几年来,随着分子遗传学的不断发展和基因工程研究的深入,人们已清楚地认识到,不同种生物体含有不同的DNA序列〔’〕。于是我们可以利用核昔酸咸基序互补的原理,通过核酸杂交阐明细菌间的亲缘关系。核酸杂交探针广泛地应用于微生物的鉴定、传染病诊断、流行病学调查、环境中遗传变异的检测和微生物生态系统中群体结构和动力学的研究[zj。用于微生物鉴定的探针是高度特异的,它常常是从某一特异微生物的DNA中克隆的。近年来发展起来的寡核昔酸探针已用于微生物特异寡核普酸探针的选择是以这一微生物核酸一级结构的研究为基础的。由于微生物的DNA较长,难以一时弄清其核酸序列,而rRNA较短,并已发展了多种rRNA序列分析法,因此,人们常常通过分析rRNA序列,找出某一微生物特异的片断,然后合成与之互补的20一30个碱基长的寡核昔酸探针。由于:RNA在进化上的保守性,使这种寡核昔酸探针具有传统DNA探针所不具备的某些特点。根据rRNA在进化分类上的特征,我们可...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国医学科学院学报》1988年03期
中国医学科学院学报

生物素标记寡核苷酸探针探测扩增的病理性突变基因

碱基突变可直接影响人类基因的功能,导致各种遗传病的发生。本文作者建立了用生物素标记寡核普酸探针探测扩增的病理性突变基因的方法.标记时寡核普酸的用量仅需6ng,在末端转移酶的催化下,把生物素标记的脱氧核普酸连接到寡核普酸的3’羚基末端。经分离纯化后,进行斑点杂交和Southern印迹杂交,最后用ABC系统(即:Avidin一Biotin一碱性磷酸酶复合物)酶标显示杂交信号.用两种寡核普酸探针(尹‘卜42及日气:一‘:等探针)分别与克隆化扩增的正常和突变的日一珠蛋白基因DNA杂交,结果表明:‘,P探针与生物素探针都具有高度特异性,后者的灵敏度略低。进一步将探测Hbs的两种寡核普酸19聚体(民S和队^)用”P和生物素标记,将Hbs杂合子病人白细胞DNA进行基因扩增,并以正常p一珠蛋白基因DNA作对照,与两种探针分别进行斑点杂交、两结果完全一致:Hbs杂合...  (本文共1页) 阅读全文>>