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重离子辐射提高腺病毒介导小鼠黑色素瘤细胞转染率的研究

1引言基因治疗是运用分子生物学技术将目的基因导入体内治疗或预防疾病,最初用于治疗遗传性单基因缺失病的研究。随着基因治疗的迅速发展,肿瘤渐渐成为基因治疗临床研究中最重要的适应症[1]。长久以来,靶基因导入效率低是困扰基因治疗进一步发展的关键问题之一。人类腺病毒是目前临床基因治疗研究中应用最为广泛的基因转移载体之一[2],其优点有:易于培养和纯化、不整合至宿主的基因组、遗传毒性低、宿主范围广,最重要的是它有较高的病毒滴度和转移效率,能获得动物体内较高水平的外源基因表达量[3]。重离子是一种具有高传能线密度(LET)的电离辐射线,它不仅可以杀灭对低LET辐射不敏感的肿瘤细胞,而且靶区内能量沉积呈布拉格(Bragg)峰分布,是增加治疗增益因素(TGF)最理想的辐射线之一[4,5]。小鼠黑色素瘤细胞是一种难于被腺病毒感染的细胞[6],选用这种细胞有利于更好地研究辐射对腺病毒转染效率的影响。研究发现电离辐射可以提高质粒DNA的转染效率[7]...  (本文共4页) 阅读全文>>

《实用诊断与治疗杂志》2007年03期
实用诊断与治疗杂志

小鼠黑色素瘤生长动态观察

恶性肿瘤是严重威胁人类健康的疾病[1],尽管科研人员对它的研究取得了一些成果,但目前来看,人类完全战胜肿瘤仍需时日;最近有文献报道,当前抗癌的主流还是姑息疗法[2]即提高肿瘤患者的生活质量。这标志着人们对肿瘤基因水平和干细胞水平的基础研究离实际应用还有一定距离。与此同时,一些以应用研究为主的抗癌研究给了人们一些希望,如科利毒素直接针对瘤体消退而展开的研究工作取得了一些成果,但其机理迄今仍不明确[3]。肿瘤研究的现状提醒我们,抗癌研究有必要从最基本处着手,肿瘤生长的动态观察研究就属于此。本文对此进行了探讨,现报道如下。1材料与方法1.1细胞株小鼠黑色素瘤B16细胞株,购自中国科学院上海细胞生物研究所。1.2动物SPF级昆明种小鼠,购自第三军医大学实验动物研究所,雌雄各半,18~21 g,常规饲养。1.3试剂RPM I 1640干粉,购自美国G ibco公司;兔抗小鼠CD 3、CD 40抗体,山羊抗兔IgG-F ITC荧光抗体,购自...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国临床药理学杂志》2016年07期
中国临床药理学杂志

灯盏花素联合顺铂治疗小鼠黑色素瘤作用研究

刘美辉,朱劲华(江苏建康职业学院药学系,南京210029)LIU Mei-hui,ZHU Jin-hua(Department of Pharmacy,JiangsuHealth Career Academy,Nanjing 210029,China)恶性黑色素瘤(malignant melanoma,MM)是一种恶性度最高的皮肤肿瘤,具有转移早,进展快,预后差,死亡率高的特点。目前还没有很好的治疗黑色素瘤的药物[1]。灯盏花素是黄酮类化合物,具有较强的清除自由基、抗氧化、抗菌、抗血栓和抗肿瘤[2-3]等多种药理作用。因此本课题研究顺铂联用灯盏花素对黑色素瘤的治疗作用。材料和方法1材料动物C57小鼠60只,6~8周龄,雌性,体重20g左右,购自广东省实验动物中心。动物许可证号:SCYK(粤)2013-0002。细胞B16细胞,由本实验室传代所得。药品与试剂灯盏花素(Bre),规格:每支20 mg,批号:20100403,湖南恒生...  (本文共4页) 阅读全文>>

中国医科大学
中国医科大学

人RI基因在脐血干细胞中的转染表达及对小鼠黑色素瘤基因治疗的研究

目的核糖核酸酶抑制因子(Ribonuclease Inhibitor, RI)是一种酸性糖蛋白,是核糖核酸酶A(Ribonuclease A, RNase A)的抑制剂,对血管生长因子(Angiogenin, Ang)具有强烈的抑制作用。Ang是由肿瘤细胞和正常细胞分泌的在体内外均具有强烈的诱发血管生成活性的蛋白质。由于RI可以与Ang形成紧密的结合,从而可以抑制其促血管生成的活性。大量实验表明,新生血管的生成对于肿瘤的生长和转移是必需的;并且外源性限制血管的生成可以明显地抑制肿瘤的生长,甚至可以使肿瘤消退。近来一系列肿瘤血管生成抑制因子已在体内、外实验中证实具有抗血管生成作用。这些特异性内皮抑制因子的发现为肿瘤和其他血管生成依赖性疾病的治疗提供了一个重要的治疗方法。但应用这些抑制因子一个明显的不足是需要高浓度的抑制因子才可以有效地抑制肿瘤的生长,而这些抑制因子因复杂的提取过程,在应用上受到限制。基因治疗可以在一定程度上解决这个...  (本文共92页) 本文目录 | 阅读全文>>

安徽医科大学
安徽医科大学

重组IL-7/CCL21腺病毒的构建及其对小鼠黑色素瘤的体内实验研究

第一部分pAdenoG-CMV-IL-7-SV40-CCL21腺病毒载体的构建目的建立IL-7、CCL21双基因表达腺病毒载体,使之能在鼠源黑色素瘤B16F10细胞中过表达,为后续实验提供基础。方法GenBank中查找目的基因序列,设计引物,PCR扩增目的基因片段,酶切载体后重组构建IL-7-CCL21-pDONR,转化大肠杆菌感受态细胞后进行重组菌的筛选,选择阳性克隆,扩大培养,提取质粒,验证正确后进行包装、收获、纯化、测定病毒滴度,转染B16F10细胞,采用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,RT-qPCR)、酶联免疫吸附(ELISA)法测定目的基因表达情况。结果双酶切及测序结果证明目的基因正确插入载体中。转染HEK293细胞观察细胞状态,正常出毒。转染B16F10细胞后,与野生型细胞株相比较,基因在mRNA水平及蛋白水平均有过表达,且差异有显著性意义(P0.05)。腺病毒包装成功,滴度...  (本文共56页) 本文目录 | 阅读全文>>

深圳大学
深圳大学

基于TLR7的全细胞疫苗抗小鼠黑色素瘤效果研究

目的:黑色素瘤是一种常见的、恶性度极高的皮肤恶性肿瘤,具有高侵袭性、高死亡率和高免疫原性等特点。临床上用于治疗黑色素瘤的易普利姆玛在Ⅱ期临床试验中,50%的患者出现了不良反应,部分更因出现严重的胰腺炎而被迫终止用药。纳武单抗也只有在辅助手术切除治疗时才具有较长的无复发生存期。因此找到一种更有效的治疗恶性黑色素瘤的方法刻不容缓。5-azacytidine(Aza)已被FDA批准用于治疗骨髓增生异常综合征,低剂量的Aza能通过去甲基化作用使机体内沉默的ERVs表达出来,从而通过病毒防御途径激活免疫。Toll样受体是连接固有免疫和获得性免疫的桥梁,Toll样受体7(TLR7)激动剂能够有效激活免疫从而发挥对抗肿瘤的作用。本研究的目的包括:(1)合成新型的TLR7小分子激动剂;(2)探索将此TLR7激动剂与经Aza处理后的黑色素瘤细胞相偶联制备全细胞肿瘤疫苗的方法;(3)验证所制备的肿瘤疫苗于小鼠体内的抗肿瘤效果。方法:(1)用化学方法...  (本文共73页) 本文目录 | 阅读全文>>