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重组人骨形成蛋白2基因转染大鼠自体骨髓基质细胞成骨能力研究

骨形成蛋白在细胞分化和组织形态发生方面具有重要作用 ,其中骨形成蛋白 2被认为是活性最强的惟一能单独诱导成骨的因子[1] 。本实验利用重组人骨形成蛋白 2 (recombinanthumanbonemorphogeneticprotein 2 ,rhBMP2 )噬菌粒表达载体对大鼠骨髓基质细胞进行基因转染并复合含孔磷酸钙陶瓷 ,研究其自体异位种植成骨能力 ,探索组织工程与基因工程联合应用于骨缺损修复的可行性。1 材料和方法1.1 材料LipofectAMINETM2 0 0 0 (简写LF2 0 0 0 ) (Gibco公司 ,美国 ) ,Ge neticin (简写G_4 18) (Gibco公司 ,美国 ) ,DMEM培养基 (Gibco公司 ,美国 ) ,FBS血清 (Hyclone公司 ,美国 ) ,α_MEM培养基(Hyclone公司 ,美国 ) ,pBK_BMP2 噬菌粒表达载体 (司晓辉构建[2 ] 并惠赠 ) ,...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国比较医学杂志》2007年12期
中国比较医学杂志

大鼠脂肪基质细胞分离培养探讨

近20年,骨髓间充质干细胞(bone marrowmesenchymal stem cells,marrow stromal cells,MSCs)成为干细胞研究领域的重点,MSCs的一些特性在许多疾病的细胞治疗方面显示出相当大的潜力。与骨髓相似,脂肪组织也是中胚层来源的组织,包括微血管内皮细胞、平滑肌细胞和干细胞等一系列成分。作为干细胞组织来源,脂肪有其特殊优势:与骨髓相比,具有损伤小、获取量大、可以多次取材的优势。本实验旨在探讨体外分离和培养大鼠脂肪基质细胞(adipose-derived adult stromal cells)的方法,观察细胞生长形态增殖情况,以及细胞表型鉴定。并探讨不同部位(皮下、肠系膜)脂肪基质细胞的产率,并对不同来源脂肪基质细胞的性状加以初步研究。1材料和方法1·1实验动物近交系BN(Brown Norway)棕色大鼠,250 g左右,雌性,1958年由Silvers和Billingham用D.H....  (本文共5页) 阅读全文>>

《四川大学学报(医学版)》2006年05期
四川大学学报(医学版)

绿色荧光蛋白标记人脂肪基质细胞成骨分化能力体外实验研究

脂肪组织与骨髓都来自于胚胎中胚层,其基质中存在具有自我更新和一定的分化潜能,处于全能细胞和成熟细胞之间的成体干细胞。但是脂肪基质细胞多向分化潜能的调控机制迄今仍不清楚,因此,寻找合适的标记物,追踪观察脂肪基质细胞谱系及其体内诱导分化机理研究,成为组织工程和基因治疗研究中一项重要的课题[1,2]。本实验通过比较研究重组绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)基因的腺病毒载体介导感染脂肪基质细胞和用脂质体介导质粒pEGFP-C1转染脂肪基质细胞两种方法的转染效率,并检测细胞转染后的生物学特性和成骨能力,旨在为脂肪基质细胞分化机理研究和应用于组织工程及基因治疗的研究提供一种方便、高效的示踪工具。1材料和方法1.1材料克雷布斯-林格氏碳酸氢盐液(KRB),型胶原酶,牛血清蛋白(BSA),地塞米松,L-抗坏血酸,β磷酸甘油钠,噻唑蓝(MTT)试剂,维生素D3,均购自美国Sigma公司;胎牛血清(FBS)...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中华放射医学与防护杂志》1960年10期
中华放射医学与防护杂志

小鼠脾基质细胞特性与功能研究

小鼠脾基质细胞特性与功能研究于洪臣,张红梅,凌翎,于志强,刘及摘要作者用体外液体单层和器官培养技术研究了小鼠脾基质细胞某些特性和功能。结果发现,大剂量照射后骨髓细胞与脾基质细胞混输组较单输BMC组受体CFU-S及CFU-F数明显增高(P<0.01);脾CFU-F的D0值为2.8Gy;低剂量照射后对基质细胞增殖有刺激效应;基质细胞周围可见有造血免疫细胞生长。关键词脾基质细胞,辐射敏感性,微环境有人认为脾基质细胞是淋巴造血微环境中的多功能成分,它们可能是复合细胞因子介导的网络中的活跃组分[1]。国内研究脾基质细胞特性及功能的报道较少,我们主要利用多器官培养方法[2],辅以体外液体单层培养法研究了小鼠脾基质细胞的某些特性及功能。1材料和方法1.1实验动物:实验用C57BL/6小鼠,体重20±2g,由我校实验动物部提供。1.2照射剂量:实验动物在Philips深部X射线治疗机上行单次全身照射(剂量率为0.435Gy/min)0,0.75...  (本文共2页) 阅读全文>>

《白求恩医科大学学报》1988年06期
白求恩医科大学学报

输注离体照射骨髓基质祖细胞对造血辐射损伤恢复的影响

目前,骨髓移植在造血损伤修复中的作用日益受到人们的重视〔1),并已取得进展。多数学者侧重在实质细胞的移植,而作为支持、诱导造血干细胞增殖、分化的微环境的主要成分基质祖细胞(CFU一F)的作用却常被忽视。业已发现,重度放射损伤时,若无造血基质细胞的迅速恢复,则骨髓移植的疗效亦难显现。因为在许多造血疾病时,如大剂量照射下,由于基质细胞的损伤,造血微环境遭受破坏,造血组织便难以再建。故在造血的最终恢复中,基质微环境起有重要作用(2“5〕。 现已确定,造血基质细胞不仅可经血行迁徙〔幻,而且还发现,不同亚群的基质细胞的放射敏感性和功能也各不相同〔7‘,〕。本室曾以造血基质细胞与骨髓细胞混输给重度放射损伤的动物后,见有明显促进造血再生的作用。但各亚群间的促进效果是否存有差异,尚不清楚。为了优选高效基质细胞和便于临床应用起见,特以不同剂量体外照射基质细胞,经培养富集后,再与一定量的骨髓细胞混输,观察其促进造血再建的效果。现将实验结果报告如下。...  (本文共4页) 阅读全文>>

《军事医学科学院院刊》1988年03期
军事医学科学院院刊

人、犬和小鼠骨髓基质细胞的细胞骨架观察

骨髓基质细胞是造血微环境的重要组成成分,可能在造血的早期阶段,即造血干细胞阶段起调节作用(l)。不同作者强调不同骨髓基质细胞在支持造血功能中的重要性(卜,〕。各作者所描述的各类骨髓基质细胞的形态不甚明确,且有不一致之处。骨髓基质细胞包含多种类型。这些类型的基质细胞在体外培养条件下的形态与原位骨髓相比可有较大的差异,故而难以辨认。 许多细胞都有复杂的微管和微丝结构冤集成细胞骨架。细胞骨架中微丝微管数量、分布和构型可因细胞种类不同而有差异。本文用Coomassie blue作细胞骨架染色,观察人和犬以及小鼠骨髓基质细胞细胞骨架的异同。材料和方法 骨髓基质细胞培养人骨髓细胞取自非血液病患者的肋骨。以骨钳挤出骨髓细胞,用1 640培养液适当稀释后,以比重为1.077的淋巴细胞分层液分离出单个核细胞备用。 犬骨髓细胞悬液自骼骨脊或肋骨抽吸而得。同上分离得单个核细胞备用。 小鼠骨髓细胞悬液取自LACA小鼠股骨和尸胫骨,以1 640培养液制成...  (本文共4页) 阅读全文>>