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N-甲基-N-亚硝脲诱导的大鼠视网膜感光细胞损伤模型中Müller细胞增殖和细胞因子分泌的变化

Muller细胞是脊椎动物视网膜中一种非常重要的胶质细胞,在视网膜中起重要的支持、营养和保护作用。在急慢性损伤时,Mdler细胞肥大增生,称为反应性胶质化[l一3〕。近年来研究发现,视网膜中神经元损伤时,Mdler细胞的基因表达和形态结构将发生改变,具有分化为损伤神经元的潜能。为此本实验通过建立N一甲基一N一亚硝脉(N一methyl一N--ni- troso盯ea,MNV)诱发的大鼠视网膜感光细胞损伤模型,观察感光细胞缺失对M讯ler细胞生物学特性的影响,并应用RT一PCR方法检测主要神经营养因子表达的变化,为进一步研究M沮ler细胞的增殖和分化的干细胞潜能奠定基础。1材料和方法1.1实验动物出生20d左右的51)大鼠100只,由复旦大学动物部提供。1.2主要试剂与仪器N--甲基一件亚硝脉(MNU,Sigma公司);一171一TUNEL试剂盒(博士德公司);RT一PCR试剂盒(TaKaRa公司)。1.3引物由上海生工生物工程技术...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中国实用眼科杂志》2001年03期
中国实用眼科杂志

酶分层消化法获取视网膜纯感光细胞

目前 ,分离和获取纯的视网膜感光细胞还是存在一定的难度。为了进行视网膜感光细胞的移植和研究 ,我们探讨了酶分层消化法分离纯的视网膜感光细胞的技术 ,结果证明此方法是一种分离纯视网膜感光细胞的可靠方法 ,国内外尚未见报道 ,现报道如下 :材料与方法1.材料 :二氧化碳培养箱 (美国 Cell StarQWJ30 0 TVBA) ,胰酶 (Sigma)、胶原酶 (Sigma) ,角移后供体人眼及屠宰场提供的新鲜猪眼。2 .取材 :去除角移后供体人眼及新鲜猪眼周围的筋膜组织 ,在角巩缘后 3~ 4 mm处作一切口 ,环行剪开去除眼球前段组织 ,剥离干净玻璃体 ,分离视网膜神经上皮层与色素上皮层 ,再将视网膜神经上皮层移于盛有 D- Hanks液的玻璃培养器皿中 ,多次漂洗 ,去除粘附在视网膜上的色素及色素上皮细胞 ,注意尽量保持视网膜的完整性。将待消化视网膜按象限分剪成四块平整的视网膜小片 ,再将其移到盛有 D- Hanks液和 1×...  (本文共3页) 阅读全文>>

《第三军医大学学报》2006年14期
第三军医大学学报

正常大鼠视网膜感光细胞超微结构在视觉发育关键期中的变化

许多眼底病的发病和斜视、弱视的发生与视网膜感光细胞密切相关[1]。还有学者证实实验性剥夺性近视是由于视网膜感光细胞的改变导致的[2]。目前,对视网膜感光细胞的研究大多集中在出生前和成年后,对出生后成熟前的研究则较少涉及。本实验通过观察正常W istar大鼠在关键期内及成年时的视网膜感光细胞超微结构,了解感光细胞在关键期内的动态发育变化特点。1材料与方法1.1实验动物分组及饲养条件正常健康新生W istar大鼠10只,雌雄不拘,由第三军医大学实验动物中心提供。2只成年大鼠为1组,体质量220~250 g。8只新生大鼠分为4组,每组2只,分别以出生后0、15、20、25 d各为1组。实验动物喂养于该中心的标准化饲养房,并饲以标准颗粒饲料;铁笼喂养,不限制食水;自然昼夜光线照明;室内保持良好通风,相对湿度为40%~70%;室温保持在18~22℃。1.2实验药物与方法分别将5组大鼠进行以下处理:戊巴比妥钠40 mg/kg腹腔注射麻醉,托...  (本文共3页) 阅读全文>>

《眼外伤职业眼病杂志.附眼科手术》2005年07期
眼外伤职业眼病杂志.附眼科手术

光损伤导致视网膜感光细胞凋亡的实验研究

随着现代光学技术的发展,人们在生活与工作中所接触的强光源越来越多,视网膜光损伤以及与光损伤密切相关的眼底疾病有显著增多的趋势。因此,探讨视网膜光损伤的发生规律和机制具有重要的临床意义。本研究应用白光过度照射的方法造成大鼠视网膜光损伤的实验模型,并以常规HE染色与末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(terminaldeoxynu cleotibyltransferasemediateddUTP_biotinnickendlabeling,TUNEL)技术对光损伤后视网膜感光细胞的病理学改变进行了动态观察研究,现将结果报告如下。1材料与方法1.1主要试剂末端脱氧核苷酸转移酶(terminaldeoxynucleotibyl Transferase,TdT):Promega公司;DIG_dUTP:B.M公司。1.2主要实验设备自制光损伤箱,规格0.8m×0.8m×0.5m,箱内6个面各装设20W荧光灯管3只,箱内照度为(2...  (本文共3页) 阅读全文>>

中国科学院研究生院(光电技术研究所)
中国科学院研究生院(光电技术研究所)

视网膜感光细胞自动计数与应用研究

眼睛是人类感知外界,形成色觉的重要器官。视网膜感光细胞直接负责光线的接收和转化,了解感光细胞分布状态是医学工作者对视网膜进行初步诊断的直接简便的方法,其相对数目也是医学工作者对人类视觉研究和人眼眼病病理研究的重要参数。当图中细胞数量众多,且有大量图像需要计数时,将不可能采用人工计数方式。本文提出了一种感光细胞自动计数算法,该算法遍历视网膜图像中的所有像素,自动标记出每个感光细胞的位置,并统计出最终的感光细胞数目。通过与人工计数的结果对比来评价自动感光细胞计数算法细胞计数的准确性,结果显示,该算法与人工计数的匹配率和吻合率分别超过了在94.9%到93.0%,具有较高的计数精度,另外该算法的运行时间短,也使得对视网膜的实时监控分析成为可能。在感光细胞自动计数算法研究的基础上,本文进一步研究了感光细胞的密度测量,利用Littmann公式和Bennett等人提出的眼底参数测量方法,实现了对感光细胞密度的计算,并在VISUAL C++平台...  (本文共61页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国眼耳鼻喉科杂志》2008年02期
中国眼耳鼻喉科杂志

斑马鱼视网膜感光细胞的发育及视蛋白的表达

斑马鱼是一类视觉高度发达的物种,其视网膜与哺乳动物,包括人类的结构非常相似,分层排列,包括神经视网膜和视网膜色素上皮层,神经视网膜有特征性的3个细胞层,7种主要细胞,包括6种神经元和Mller胶质细胞,其中感光细胞包括紫外线敏感和红、绿、蓝敏感的视锥细胞以及大量的视杆细胞[1]。本研究旨在了解斑马鱼幼鱼视网膜和感光细胞的发育以及视蛋白的表达,明确利用斑马鱼进行视网膜感光细胞研究的可行性。1材料与方法1.1材料野生型斑马鱼购自美国俄勒冈大学,斑马鱼养殖系统从美国Aquatic Habitats公司引进。成熟的斑马鱼在28.5℃环境中生长,14h亮灯、10h黑暗循环,喂养方案按照Zebrafish Book常规[2]进行。收集鱼卵的前一天晚上,将雄鱼和雌鱼各2~3条,放置在鱼缸内,中间用挡板将雌鱼和雄鱼隔开。第2天收集鱼卵时,移去挡板。为了确切了解胚胎的发育阶段,按照Kimmel[3]描述根据形态标准对胚胎发育阶段进行分期。受精卵...  (本文共4页) 阅读全文>>