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N-甲基-N-亚硝脲诱导的大鼠视网膜感光细胞损伤模型中Müller细胞增殖和细胞因子分泌的变化

Muller细胞是脊椎动物视网膜中一种非常重要的胶质细胞,在视网膜中起重要的支持、营养和保护作用。在急慢性损伤时,Mdler细胞肥大增生,称为反应性胶质化[l一3〕。近年来研究发现,视网膜中神经元损伤时,Mdler细胞的基因表达和形态结构将发生改变,具有分化为损伤神经元的潜能。为此本实验通过建立N一甲基一N一亚硝脉(N一methyl一N--ni- troso盯ea,MNV)诱发的大鼠视网膜感光细胞损伤模型,观察感光细胞缺失对M讯ler细胞生物学特性的影响,并应用RT一PCR方法检测主要神经营养因子表达的变化,为进一步研究M沮ler细胞的增殖和分化的干细胞潜能奠定基础。1材料和方法1.1实验动物出生20d左右的51)大鼠100只,由复旦大学动物部提供。1.2主要试剂与仪器N--甲基一件亚硝脉(MNU,Sigma公司);一171一TUNEL试剂盒(博士德公司);RT一PCR试剂盒(TaKaRa公司)。1.3引物由上海生工生物工程技术...  (本文共5页) 阅读全文>>

《中国实用眼科杂志》1999年11期
中国实用眼科杂志

视网膜感光细胞的移植

近十年多来,视网膜移植的研究已取得了很大进步,它可分为视网膜植片移植和视网膜细胞移植。细胞移植的前景十分广阔,它包括基因转移作为治疗方法的潜力巨大。目前,视网膜细胞移植中研究较多是色素上皮细胞(RPE)和感光细胞的移植。视网膜感光细胞移植开始于80年代中期,对感光细胞变性的疾病,移植纯的感光细胞具有针对性,且能减少玫瑰花结构的形成。我们拟就近年来视网膜感光细胞的移植的有关问题作一综述。一、移植细胞的分离和纯化分离出足够数量和适当纯度的细胞以替代受体功能不全的细胞是细胞移植最关键的第一步。为使移植细胞能更好发育和存活,分离时应尽可能减少对细胞的损伤。目前,感光细胞的分离主要以酶消化法和机械分离为主。酶消化法是先将视网膜在无Ca2+和Mg2+的Hanks液中孵育使神经上皮层和RPE分离,再用酶消化神经上皮层,以获得感光细胞。1988年Towens-Anderson等〔1〕首次用酶分离的方法获得兔视网膜的视杆细胞,并使其保持功能至少2...  (本文共3页) 阅读全文>>

吉林大学
吉林大学

视网膜感光细胞cGMP通道对不同光照时间损伤的时效关系及防护机制的研究

目的:研究视网膜感光细胞cGMP选控通道对不同的光照时间损伤的时效反应关系,阐明防护机制。方法:将661w细胞放置于4500Lux可见光下,分别设定3天、4天和5天三个光照周期。在三个光照周期中每天只照射相应时间段(20分钟,30分钟,60分钟,90分钟,120分钟,180分钟),其余时间放于孵育箱中培养,不加其他处理。用Hoechst/PI(二苯甲亚胺/碘化丙啶)染色法检测细胞活性及计算细胞死亡率;通过Western Blot和荧光定量PCR分别在蛋白水平和m RNA水平检测cGMP选控通道标志物GCAP1和cGMP的变化。结果:1.无论在暗处还是光照环境中,661w细胞在3天内的死亡率低且相差不大,从第四天开始死亡率显著增高,光照细胞比暗处细胞死亡率高,并且光照时间越长,细胞死亡率就越高,到第五天细胞趋近于全部死亡。2.在光照三天时,cGMP调控通道中的相关因子GCAP1和cGMP在20分钟,90分钟表达显著;光照四天后,G...  (本文共62页) 本文目录 | 阅读全文>>

《国外医学.眼科学分册》2003年04期
国外医学.眼科学分册

视网膜感光细胞的药物干预研究

近年来 ,视网膜色素变性 (RP) ,年龄相关性黄斑变性 (ARMD)等眼底疾病的发病机制及其治疗引起人们的广泛关注。据估计 ,目前世界上约 2千万人患有各种视网膜变性疾病 ,是成年人盲目的主要原因之一[1 ] 。这些疾病虽然发病机制和临床特点各不相同 ,但最终均以感光细胞的渐进性凋亡以及死亡为结局 ,从而导致视力下降 ,视野缺损甚至失明[2 ,3] 。目前 ,对这些疾病还没有有效的治疗措施。其治疗研究主要集中在三个领域 ,即视网膜移植、基因治疗和药物干预。在药物干预中多种物质对感光细胞具有良好的保护作用 ,为临床提供了一种预防和治疗这类疾病的新方法。一、神经营养因子对感光细胞的干预作用研究表明[4] ,在眼组织中存在多种内源性神经营养因子 ,如成纤维细胞生长因子 (FGF)、睫状神经营养因子 (CNTF)等。它们主要由视网膜色素上皮细胞 (RPE)产生并在眼组织有相应的受体 ,对视网膜细胞的生长、发育、分化、生存有重要作用。(...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中华眼科杂志》2002年02期
中华眼科杂志

视黄酸对视网膜感光细胞增生作用的实验研究

哺乳动物中枢神经系统 (centralnervoussystem ,CNS)损伤后是否能再生的问题 ,一直是神经科学领域研究的重要课题。视网膜是CNS的一个特殊组成部分 ,由于其细胞层次高度有序的排列和易于进行活体观察 ,因而成为研究中枢神经系统疾病的突破口。 1988年 ,Berry等[1] 观察到损伤的视网膜神经节细胞的再生现象 ;1995年Li等[2 ] 也发现视网膜色素变性 (retinalpigmentosa ,RP)患者视网膜周边部残存的视杆细胞能够再生 ,由此提示损伤或病变的视网膜神经细胞具有再生的可能性。我们于 1998年12月开始研究视黄酸 (retinoicacid ,RA)对缺血和损伤成年大鼠眼的视网膜感光细胞增生的刺激作用 ,以探讨视网膜组织中神经再生与增生的机制。材料与方法1.实验分组 :32只成年健康Sprague Dawley(SD)大鼠 ,体重约 2 0 0~ 2 5 0g ,随机平均分成 4组。...  (本文共4页) 阅读全文>>

《华西医学》2002年04期
华西医学

关于视网膜感光细胞的凋亡与保护

细胞凋亡是目前非常活跃的一个研究领域。凋亡是指为维持内环境的稳定 ,由基因调控的、自主有序的细胞死亡。细胞凋亡作为一种不同于坏死的特殊形态的细胞死亡类型 ,广泛的存在于生理及病理过程中〔1〕。Kerr〔2〕等在研究中将这种细胞形态特征归纳如下〔3 5〕:细胞凋亡往往涉及单个细胞 ,而且是非同步发生的。细胞间连接及微绒毛消失是最早的变化 ,同时胞质密度增加 ,核质浓缩成一个或几个大的团块 ,进而裂解为碎块。随后细胞核被分割成为数个由细胞包裹的凋亡小体 ,其中包括结构尚完整的细胞器。凋亡小体很快被邻近的细胞吞噬。上述形态学特征是识别凋亡细胞的重要依据。1 感光细胞变性的特点在以人类遗传性视网膜色素变性 (RP)为代表的原发性视网膜变性疾病和各种继发性视网膜变性以及各种RP的实验动物模型中 ,尽管感光细胞变性的原因和特点各不相同 ,但它们致盲的共同通道为感光细胞凋亡。人类遗传性视网膜色素变性可表现为常梁色体显性遗传 (AdRP) ,常...  (本文共1页) 阅读全文>>