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用ELISA法测定SPA与多种动物IgG的结合特性

自70年代以来,国内外对葡萄球菌A蛋白(SPA)进行了广泛深入的研究。由于SPA具有能与人和多种哺乳动物血清lgG分子中Fo段结合的特性,引起了免疫学家们的极大兴趣,促进了 SPA在免疫学上的广泛应用。目前,基于人蛋白的这种结合特性而建立的各种实验方法,具有敏感、特异、简便、省料和应用广泛等优点,已成为医学和生物学领域许多学科研究中常用的新技术[‘]。为了更有效地利用这一新技术,学者们正致力于进一步探索 SPA与各种动物血清 IgG FC段结台的特性。但迄今为止,所采用的研究方法主要还是四五十年代发展起来的琼脂双向扩散、对流免疫电泳等免疫学技术。这些技术虽然特异性较强,俱敏感性不高,因而难以较全面地反映 SPA结合动物兔疫球蛋白的情况。本实验拟采用先进的酶联免疫吸附试验来研究SPA与多种动物血清中IgG的结台特性。二 材料和方法1.1 实验材料1.1.1 动物血清 兔、大鼠、小鼠、小牛、绵羊、鲫鱼、鸭、赡蛛、黄缮和锗来自江西大学...  (本文共5页) 阅读全文>>

《微生物学报》1987年03期
微生物学报

小鼠IgG亚型与葡萄球菌A蛋白(SpA)的亲和性

葡萄球菌A蛋白(staph,loeoeeal protei。A,sPA)与猪、狗、兔和小鼠等多种热血动物的IgG有亲和性,但对小鼠坛G不同亚型的亲和力有差异‘”。由于sPA分子能特异结合IgG的Fc片段,并且一分子I四能结合多分子sPA[,,;一分子sPA有三个结合IgG的位点‘”,所以应用sPA检测坛G抗体能提高检测灵敏度‘4,”。近年来,在特异性免疫检测中应用标记的sPA作为第二抗体越来越广泛,并逐渐将标记sPA应用于小鼠单克隆抗体(简称单抗)的检测中。因此,了解sPA与小鼠烤G各亚型的亲和力是十分重要的,特别在单抗技术中应用时,可防止丢失阳性杂交瘤细胞。 在多次ELIsA检测长叶车前草花叶病毒(RMv)单抗的试验中“,,发现标记的sP人不能与小鼠坛G比结合。为证实这一现象,应用EL巧A间接法定性测定sPA与小鼠IgG:、和IgG,的亲和性,并用标记的羊抗鼠lgG做比较。 材料和方法 (一)材料 1.小鼠IgG:、和IgG,...  (本文共2页) 阅读全文>>

《白求恩医科大学学报》1985年01期
白求恩医科大学学报

小鼠IgG抗体的制备——IgG—SPA菌体免疫法

在实验研究领域,特别是在实验免疫学,小鼠是最常用的一种实验动物。为了研究小鼠的体液免疫应答,免疫药物和中草药对体液免疫反应的影响;为了研究小鼠速发型变态反应动物模型的建立机理;为了鉴定小鼠杂交瘤细胞所汽生的单克隆抗体的纯度、亚类及其特异性等等,都要用小鼠几的抗体。我们用IgG一SPA菌体免疫法制备了小鼠IgG抗体。此法的优点是:血清用量极少;效价高;纯度好;动物无不良反应;成本低;操作简便。方法和结果 一、菌株 本教研室传代保存的含SPA高量的Cowanl标准株。 二、制备10%的SPA菌体稳定液〔1〕 1.取Cowanl株培养物,经生物学特性鉴定后,进行纯种细菌培养。然后用pH7 .4、0.01MPBs将菌苔洗下;3,000rpm,20分钟。依此法再重复洗2次,称细菌净重。用含0.5%甲醛的PBS制成10%的细菌悬液(w/v),置冰箱过夜。 2.将冰箱过夜的10%的细菌悬液,经80℃水浴15分钟加热处理后,立即置冰水中终止反应...  (本文共4页) 阅读全文>>

《大连大学学报》1992年01期
大连大学学报

利用SPA提取鼠IgG制备兔抗鼠IgG血清的尝试

近年来,单克隆抗体在免疫学检验工作中应用越来越多。抗鼠IgG血清作为第二抗体在检验工作中也不可或缺,常常需自行制备。我们用鼠血清致敏的spA菌液免疫家兔,制备抗鼠勿G血清,得到满意结果,方法简便,可靠。现报道如下:l材料与方法 1.1材料 L 1. IC。、。I株金黄色葡萄球菌本实验室保存。 L L 22勺左右健康雄性家兔本校动物室提供。 L 1. 3 209左右昆明系小白鼠本校动物室提供。 LZ方法①1.2.1按常规方法制备spA菌稳定液川 1.2.2制备鼠匆G致敏的s尸A菌液 小鼠眼球取血,其血清l份加10%(v/v)s尸A菌液4份,混匀,37oC水浴1h,每隔]0。:。混匀一次,1h后3000,p二离心20m动,沉淀用无菌生理盐水洗6次后,用无菌生理盐水配成104*。m/机l浓度,即为鼠匆G致敏s尸A菌液。分装,4℃保存,用作免疫。 L 2.3免疫程序 首次皮下注射1.5矶1.第14日静脉注射1.0扭l,第21日静脉注射2...  (本文共2页) 阅读全文>>

《中国医学科学院学报》1986年S2期
中国医学科学院学报

不同SPA制剂分离高IgE人血清中IgG的比较

葡萄球菌A蛋白(Staphyl。。。。。al ProtcinA,SPA)是某些金黄色葡萄球菌组胞壁上的一种蛋白,可与人和多种哺乳动物血清中IgG分子的F。片段特异性结合〔,,,已广泛应用于免疫学研究。测定特异性抢E抗休时,因其含量最少,大量特异性IgG抗体的存在可产生一定干扰作用〔2,.有人利用SPA除去血清中大量的IgG,IgE的含量不受影响,且能使细胞组织胺释放增强〔3,.为了更准确测定过敏病人血清中特异性IgE抗体的实际含量,拟用SPA分离病人血情中的IgG,本实验对SP人不同制荆分离IgG的效果及对血清瑰E含量的影响进行了比较,以验证此法的可行性。 材料和方法 篙属花粉过敏病人血清取自皮试,‘十~“什者,协和医院变态反应科提供.SPA菌体试剂:上海生物制品研究所产品,批号8401 .SIGMA化学公司产品,No.孔5642。琼脂糖(CL一4B)试剂:上海生物制品研究所产品,批号55一2 .Pharmaeia Fsne C...  (本文共3页) 阅读全文>>

《安徽医科大学学报》2014年09期
安徽医科大学学报

不同亚类小鼠IgG对SpA和SpG单结构域构成的随机组合噬菌体文库的体外进化研究

金黄色葡萄球菌蛋白A(Staphylococcal proteinA,SpA)[1]和链球菌蛋白G(Streptococcal protein G,SpG)[2]是研究最多的细菌免疫球蛋白结合蛋白[3],其中SpA的分子量大约57 ku,含有5个具有Ig结合功能且重复串联的结构域,为E、D、A、B、C[4]。SpG分子量为65 ku,包含3个具有Ig结合功能且重复串联的结构域,为B1、B2、B3[5-6]。SpA和SpG均可结合于哺乳动物IgG-Fc的CH2γ和CH3γ间的分界且与IgG-Fc的结合强,已被广泛用于制备、纯化与检测抗体、免疫沉淀试验和免疫吸附治疗,在科研、检测和治疗方面成为了重要的工具[7-10]。为进一步研究SpA和SpG与Fc的结合特性,在实验室应用噬菌体展示技术对细菌免疫球蛋白结合分子SpA、SpG、PpL[11]中单结构域构成的随机组合文库进行体外进化亲和筛选,获得了A-L[11](PpL的B3结构域)、...  (本文共7页) 阅读全文>>