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狂犬病病毒N基因植物表达载体的构建

狂犬病[1-4](Rabies)是由狂犬病病毒(Rabies virus,RV)引起的一种人畜共患的急性中枢神经系统传染病。临床的主要特征为恐水、怕风、咽肌痉挛、流涎、进行性瘫痪,最后因呼吸、循环衰竭而死亡。根据临床表现特点分为狂躁型(脑炎型)和麻痹型(静型)。狂犬病病毒属弹状病毒科(Rhabdoviridae),狂犬病病毒属(Lyssavirus)。狂犬病病毒是RNA病毒,病毒颗粒由脂质双层外膜、基因组RNA和核蛋白(N)、磷蛋白(P)、基质蛋白(M)、G蛋白(G)和大转录蛋白(L)组成。人和动物感染后,一旦发病,死亡率几乎100%,严重威胁着人类和动物的生命安全。目前国内主要采用灭活苗和活疫苗等预防为主,但这些预防方法都具有不同免疫劣势。转基因植物疫苗具有生产成本低、易保存及使用方便等特点[5-10]。狂犬病病毒颗粒核蛋白是一种保护性抗原。因此本试验将核蛋白基因与植物表达载体连接,转化到农杆菌中,为今后制备转基因植物疫苗奠定...  (本文共2页) 阅读全文>>

中国农业大学
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植物基因安全转化体系关键技术的研究

转基因植物安全性问题一直是各界关注的问题,本研究利用分子生物学技术优化改造传统的植物表达载体,以获得无选择标记基因、无目的基因和无目的蛋白的转基因产品,从而减轻转基因植物带来的安全性问题。利用PCR方法扩增玉米乙酰苯胺类化合物诱导启动子(In5-2启动子),并与GUS基因相连构建植物表达载体,转化烟草获得转基因烟草植株。在不同诱导时间和不同佐剂浓度条件下,对转基因烟草的GUS活性进行分析。结果表明,诱导剂的存在与GUS基因的表达呈正相关,且随着诱导时间的延长和佐剂浓度的增加,GUS活性均呈增长的趋势。利用PCR技术获得6个不同长度的玉米In5-2启动子5′端缺失片段,分别克隆到植物表达载体p1301中构建一系列植物表达载体,转化烟草获得转基因植株。GUS活性定量检测结果显示,玉米In5-2启动子的核心功能区可能位于ATG上游-1520至-1431bp之间。利用DNAMAN软件分析,在-1108至-1079bp和-891至-864...  (本文共101页) 本文目录 | 阅读全文>>

中国农业大学
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pf40基因产物的亚细胞定位以及其功能研究

植物的顶端优势是顶芽完全或部分抑制侧芽生长的现象。植物的分枝和株型在很大程度上受到顶端优势的影响。随着分子生物学的发展,人们有机会应用转基因植物和突变体从不同角度对顶端优势作用机理进行深入研究。pf40是从谷子未成熟种子cDNA文库中得到的一个克隆。在GenBank中进行blast比对,发现其与编码离子通道蛋白及一些内膜蛋白基因的核酸序列相似性很高,并且蛋白产物的氨基酸序列也很相似。不仅如此,PF40与离子通道蛋白ZIP家族在跨膜拓扑结构上极其相似。由于PF40与ZIP家族在一级结构和高级结构上均非常相似,推测PF40可能属于ZIP家族。PSORT软件预测PF40可能定位在内膜系统,具有跨膜区域,N端有信号肽序列。为了确定PF40的亚细胞定位,构建了含pf40与报告基因gfp的融合基因的表达载体,由农杆菌介导转化烟草,PCR、Southern杂交证明外源基因整合到基因组中。用荧光显微镜观察,发现PF40的亚细胞定位是在围绕核的内...  (本文共107页) 本文目录 | 阅读全文>>

东北林业大学
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天花粉蛋白基因表达载体的构建及转化杨树的研究

杨树在我国分布广泛,种类繁多,繁殖容易,栽培简便,适应性强,生长速度快,材质优良,是用材、防风、绿化的主要造林树种。但杨树的病虫害种类繁多,危害严重,加之长期使用有机化学农药,更给我国的林业生产和生态建设造成了巨大的经济损失。所以,杨树病虫害防治是目前林业生产亟待解决的问题,也是林木遗传育种工作者的首要任务。天花粉蛋白(Trichosanthin,TCS)是从葫芦科药用植物栝楼(Trichosanthes kirilowii Maxim)块根中分离得到的单链核糖体失活蛋白(Ribosome Inactivating Protein,RIP),能够抗烟草花叶病毒等7种病毒、稻瘟病菌等9种病原真菌及蚜虫等4类害虫。利用基因工程手段,将具有抗病和抗虫特性的天花粉蛋白基因转入杨树,增强杨树抗逆性,使杨树免遭病虫危害,具有无污染,不杀伤天敌,保护生物多样性,维持生态平衡等特点,且意义重大。本研究构建了含有TCS启动子及结构基因的植物表达载...  (本文共85页) 本文目录 | 阅读全文>>

复旦大学
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干旱环境胁迫下的植物分子适应机理及其应用研究

干旱是影响植物正常代谢和生长发育最主要非生物胁迫因子之一,对我国城市绿化建设和农业发展有着严重的影响。脱水素和CBF转录因子分别是植物在干旱胁迫应答过程中产生的功能性蛋白和调节性蛋白,它们在植物抗旱过程中起着重要的作用。但是目前有关它们在植物抗旱基因工程中应用的资料还很缺乏,尚需要进一步深入研究。本研究从荠菜中克隆了一条新的脱水素基因(cor29),并采用农杆菌转化法将cor29基因和CBF基因Cbcbf25的全长eDNA转入烟草,以期为植物的抗旱基因工程研究提供依据和参考。本研究的主要结果如下:1.荠菜脱水素基因cor29全长cDNA的克隆及其特征分析本研究采用序列同源克隆策略,结合RACE技术从荠菜中克隆出了一个新的脱水素基因的全长cDNA序列,命名为cor29(GcnBank,AY513787)。该cDNA全长1110 bp,包含了1个783 bp的开放阅读框(ORF),编码261个氨基酸。根据核苷酸序列推导的蛋白(COR...  (本文共123页) 本文目录 | 阅读全文>>

华中农业大学
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亚洲镰刀菌二型肌球蛋白合成基因RNAi片段功能鉴定与植物表达载体的构建

小麦是世界上重要的粮食作物之一。由亚洲镰刀菌引起的小麦赤霉病(Fusariu m Head Blight,FHB),在我国的发病面积大、危害重,赤霉病流行不仅引起小麦减产甚至绝产,还产生大量危害人畜健康的毒素,影响食品安全。由于小麦赤霉病天然抗病资源匮乏,抗赤霉病小麦品种培育进展缓慢,因此筛选鉴定抗赤霉病新资源,对于培育抗赤霉病新品种具有重要意义。本研究采取Gateway方法构建了不同亚洲镰刀菌关键生长基因的真菌表达载体,通过RNAi在转录后水平抑制靶基因的表达,筛选能抑制赤霉菌生长发育的片段;并构建了小麦表达载体,为培育抗赤霉病小麦品种提供新材料和依据。1.亚洲镰刀菌二型肌球蛋白合成基因(My2)RNAi片段的分析与鉴定。将Myo 2基因的编码区域共分为15个片段,通过引物将各个片段扩增,并在两端加上attB1/attB2位点。利用BP重组酶与中间载体pDON-201(含有attP1/attP2位点)进行重组,获得BP入门载体...  (本文共65页) 本文目录 | 阅读全文>>