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基因芯片检测HBV DNA聚合酶区基因多态性

近年报道乙型肝炎病毒DNA(HBVDNA)在自然状态或药物作用下可以发生基因突变( 1~ 3) 。目前对突异株的检测多限于基因测序法、单链构象多态性分析、温度梯度凝胶电泳法以及PCR -RFLP等。这些方法烦琐、费时 ,只能检测单个位点突变。基因芯片因其高通量的特点在这方面具有巨大潜力。作者建立基因芯片检测HBVDNA多聚酶区 (P区 ,nt5 2 8/5 5 2 )基因多态性 ,并研究拉米夫定(lamivudine)治疗者YMDD编码基序发生YIDD和YVDD突变的频数分布特征 ,探讨该技术的临床应用价值。1 材料和方法样本来源  1 3 9例乙型肝炎患者为南通市传染病医院住院病人 ,根据 1 995年第五次全国传染病寄生虫病学术会议修订的病毒性肝炎防治方案 (试行 )分组 ,慢性乙肝组 (CHB) 81例 ,无症状肝炎组 (ASC) 3 8例 ,重症肝炎组(SHB) 2 0例 ,CHB组中服用拉米夫定 6月以上 1 9例。...  (本文共3页) 阅读全文>>

《现代检验医学杂志》2004年05期
现代检验医学杂志

芯片检测HBV DNA聚合酶区基因突变及其临床应用

乙型肝炎是严重威胁我国人民健康的病毒性传染病之一 ,我国约有 2亿人口携带 HBV,其中 5 %~ 1 0 %慢性乙型肝炎患者将有可能发展为肝硬化或肝癌。在 HBV持续感染的过程中 ,其基因组可自然地或在治疗诱导下出现各种变异而呈现多态性 ,这就给乙型肝炎的诊断、治疗及判断预后带来许多临床问题[1~ 3] 。目前对突异株的检测多限于基因测序法、单链构象多态性分析、温度梯度凝胶电泳法以及PCR-RFLP等 ,这些方法存在着繁琐、费时的缺点 ,只能检测单个位点突变。基因芯片因其高通量的特点在这方面具有巨大潜力。本文运用基因芯片检测 HBV DNA多聚酶区( P区 ,aa5 2 8/5 5 2 )基因多态性 ,并研究拉米夫定 ( lamivu-dine)治疗者 YMDD编码基序发生 YIDD和 YVDD突变的频数分布特征 ,探讨此项技术的临床应用价值。1 材料和方法1 .1 样本来源 乙型肝炎患者 1 3 9例来自南通市传染病医院住院...  (本文共3页) 阅读全文>>

《大学化学》2003年05期
大学化学

基因芯片检测技术的一些进展

随着人类基因组计划 (humangenomeproject)的提前完成和分子生物学相关学科的迅猛发展 ,人类和越来越多的动植物、微生物基因序列得到测定 ,基因序列数据库的信息量正在急剧增长。研究如此众多的基因的生物功能 ,自然成为后基因组时代生命科学的前沿课题。为此 ,建立高通量的新型杂交和测序方法以对大量的遗传信息进行高效、快速的检测和分析显得格外重要。另一方面 ,在临床诊断、新药开发、遗传学普查等应用领域 ,迫切需要一种低成本、高通量、高速度的基因检测技术。基因芯片以其潜在的无可比拟的高通量和快速准确地分析基因的能力受到人们的青睐 ,成为最适合于上述需求的候选技术 ,被誉为基因功能研究领域最重要的发明之一。1 基因芯片概况1 .1 基因芯片简介  基因芯片从最初的DNA生物传感器演变而来 ,它将大量核酸片段 (寡聚核苷酸、cDNA、基因组DNA)以预先设计的方式固定在玻片、硅片、聚丙烯酰胺凝胶、尼龙膜等载体上组成密集的点阵排...  (本文共6页) 阅读全文>>

《实验与检验医学》2008年05期
实验与检验医学

基因芯片检测α珠蛋白生成障碍性贫血的价值

α-珠蛋白生成障碍性贫血(α-Thalassemia,俗称α-地中海贫血)是一种由于α-珠蛋白基因突变导致肽链表达失衡而产生的单基因遗传病,多由α-珠蛋白基因的缺失突变所导致,是我国南方各省最常见、危害最大的遗传病之一[1],轻型患者由于临床无症状而往往极易被漏诊,重症α-珠蛋白生成障碍性贫血患者临床表现严重,但目前尚无有效治疗措施。只有通过遗传咨询,产前基因诊断来杜绝α-珠蛋白生成障碍性贫血患儿的出生。本文对184例可疑α-珠蛋白生成障碍性贫血患者进行基因诊断,结果如下。1材料与方法1.1材料2003年1月~2007年12月来我院就诊患者,经血常规检查发现为小细胞低色素性贫血,然后对其作血红蛋白电泳分析,血红蛋白A2≤3.5%,或出现HbH、HbBart′s带,初筛疑为α-珠蛋白生成障碍性贫血184例,正常对照30例。1.2方法标本提取:抽取患者静脉血1.8ml按1:9注入枸橼酸钠抗凝管中,从抗凝血中提取人基因组DNA,按操作...  (本文共2页) 阅读全文>>

第三军医大学
第三军医大学

纳米金新型基因芯片检测系统的优化研究及其在临床病原微生物快速检测中的应用

基因芯片技术具有高速度、高效率、高通量的特点,为临床生物的检测提供了良好的应用前景。目前通用的基因芯片技术有多种,但分别都存在着或者灵敏度不高,或者检测技术复杂,或者条件和设备要求高的问题限制了该技术在临床检测中的应用。本研究采用我室新研制出的纳米放大基因芯片检测的专利技术,并在前期课题的基础上,进一步优化研究纳米金新型基因芯片检测系统,从而实现芯片技术和纳米技术的更有机结合,以充分利用纳米金与银反应可将信号放大106倍的优势取代目前通用的荧光、同位素、酶标等信号报告材料,使之具有设备简单,技术稳定易于掌握,灵敏度高,应用范围广等特点,达到使基因芯片的检测技术能够用于普通实验室甚至野战条件等复杂环境的目的。在此基础上,进一步针对基因芯片检测样品的制备技术,分别结合核糖体分型技术及限制性差异显示技术,研制通用引物一次PCR法及限制性酶切非PCR法,以分别构建针对临床常见致病性细菌及包含非细菌的支原体、衣原体、真菌、病毒等检测的两种...  (本文共131页) 本文目录 | 阅读全文>>

吉林大学
吉林大学

男性人乳头瘤病毒基因芯片检测方法的建立及临床应用

本课题的目的是建立一种适合临床男性人乳头瘤病毒(HPV)基因亚型检测的新方法,同时选择一种易于采集、提高男性HPV阳性检出率、适合基因膜芯片法的标本类型,并对深圳计划生育门诊中男性HPV感染的流行型别和分布状况进行检测分析。通过计算机辅助,参考经典通用引物(MY09/11)和加以改进的PGMY09/11设计23种HPV基因亚型的PCR扩增引物,根据Genbank中的HPV的型特异性序列设计及合成探针,制备可同时对18种高危型:HPV-16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 53, 56, 58, 59, 66, 68, 73, 83, MM4和5种低危型:6, 11, 42, 43, 44进行分型检测的特定纸质膜芯片。通过PCR反应,经过PCR产物与HPV膜条(探针条)杂交、显色后,HPV膜条的PC点显示蓝点才是有效膜条,根据其他蓝点显示位置判读HPV基因亚型(单一感染和多重感染)。对膜杂交结果显...  (本文共117页) 本文目录 | 阅读全文>>

《中国兽医学报》2019年01期
中国兽医学报

基因芯片检测技术在禽类病原检测方面的研究进展

*Corresponding author,E-mail:xintian@sicau.edu.cn相对病毒分离、血清学方法等传统的病毒诊断技术,分子生物学已广泛地应用于禽类病毒的检测。反转录聚合酶链式反应RT-PCR、多重PCR、实时荧光定量PCR是目前常用的分子生物学检测手段。然而随着基因重组、变异等现象时常发生,禽类病毒不断逃避免疫保护导致了强毒株的出现[1]。利用传统PCR检测手段不能满足不断增加的禽流感病毒的不同亚型进行检测[2-3]。因此,急需构建一种既快速又敏感的禽类病原检测方法。基因芯片(gene chip)是继PCR后,随着人类基因组计划的研究发展应运而生的,又称DNA微阵列。该技术的原理为将DNA或寡核苷酸探针以一定的顺序和密度固定在载体(如玻片、硅片、塑料片、NC膜等)上,与用放射性核素或荧光染料标记的核酸分子进行杂交,通过杂交信号检测、分析,获得样品中大量的基因表达信息,从而完成对目标基因的检测。由于该技术...  (本文共5页) 阅读全文>>