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人MAGE-3基因片段的克隆与测序

肿瘤免疫治疗的关键是发现并利用肿瘤特异性抗原。近年来,随着肿瘤抗原鉴定方法学的进展,越来越多的肿瘤抗原在分子水平得以鉴定。其中,人黑色素瘤抗原MAGE家族倍受人们关注。国外出现了不少以该家族成员的抗原表位肽段和这些肽处理过的树突状细胞来免疫动物和应用于患者,并取得了一定的疗效。最近几年发展起来的DNA疫苗则可以激发出强大的细胞免疫,并在一些动物模型中取得了令人鼓舞的结果[1]。而肿瘤抗原基因的克隆和测序是研究肿瘤免疫治疗性疫苗的基础。作者采用OligoV6.0基因分析软件,对人MAGE-3基因序列进行分析后设计引物,成功地扩增和克隆了MAGE-3基因片段(210~623位碱基),为下一步对其表达的研究奠定了基础。1材料与方法1.1材料1.1.1组织和载体肺癌组织标本取自解放军155中心医院。质粒载体pGEM-TEasy购自Promega公司。1.1.2酶类及主要生化试剂限制性内切酶XhoⅠⅡ、禽源性反转录酶(AMV)、TaqDN...  (本文共4页) 阅读全文>>

《山东师大学报(自然科学版)》2001年03期
山东师大学报(自然科学版)

烟草MnSOD cDNA基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

在低温、干旱、大气污染等胁迫下 ,植物细胞中会产生大量的活性氧 ,如超氧根阴离子 (O2 · - )、过氧化氢 (H2 O2 )、羟自由基 (OH·)等[1 ] .这些含氧化合物的化学性质极为活跃 ,可直接作用于DNA、蛋白质和脂类 ,破坏细胞正常的代谢活动 ,对植物造成氧化胁迫[2 ] .植物体内有效清除活性氧的保护反应机制分为非酶促和酶促两类 .直接参与清除活性氧的抗氧化物有抗坏血酸、谷光甘肽、α 生育酚、类胡萝卜素等 ;参与抗氧化保护反应的酶类有超氧化物岐化酶 (SODS)、抗坏血酸过氧化物酶 (APXS)、单脱氢抗坏血酸还原酶 (MDAR)、谷光甘肽还原酶 (GR)等 .SODS 是抵御自由基介导的氧化损伤的第一道防线 ,可通过Haber -Weiss反应清除植物体内多余的超氧根阴离子( 2O2 · - +2H+H2 O2 +O2 ) [1 ] .在高等植物中 ,SODS 根据其辅基部位结合的金属离子不同分为三类 :C...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国病毒学》1960年30期
中国病毒学

流行性出血热病毒M基因片段的结构与特性

流行性出血热病毒M基因片段的结构与特性董关木,俞永新(中国药品生物制品检定所,北京100050)TheStructureandCharacterizationofMGenomeSegmentofHFRSVirusbongGuanmu;YuYongxin(InstitutefortheControlofPharmaceuticalandBiologicaolProducts,Beijing100050)KeywordsHFRSvirus,Mgenomewrent,Glycoprotein关键词流行性出血热病毒,M基因片段,糖蛋白汉坦病毒(Hantavirus)是引起肾综合征出血热(HFRS)的病原体,是布尼亚病毒科的新成员,它至少有四个血清型,即汉滩(HantaanⅠ型),汉城(SeoulⅡ型),Puumala(PuuⅢ型)和ProspectHill(PHⅣ型),最近还发现了3~4种新的血清型,汉但病毒肺综合症(Hantaviru...  (本文共6页) 阅读全文>>

《实验生物学报》1988年02期
实验生物学报

三个与agropine合成相关的基因在大肠杆菌微细胞中的表达

OctoPine型Ti质粒T一DNA区有两个,TR和TL。TR区编码五个基因〔”,其中三个与在植物中表达agroPine相关。它们是基因0,、1声和2,。虽然从植物化学tz]、转录产物在内切酶谱上的定位[“J和遗传学分析〔‘J,已推测三个基因的功能分别是:基因2,的产物催化由葡萄糖和谷氨酸或谷酞胺结合生成fruetopinie aeid或fructoPine的反应,基因1产的产物催化把上述产物还原成manopinie aeid和manoPine的反应,基因o,的产物催化由manopinieaeid环化成agropine的反应。要研究这些基因产物具体的催化功能,还需要取得相应的酶蛋白。为了达到这个目的,办法之一就是把这些基因的读码片段克隆在适当的载体中,导入大肠杆菌,进行表达;然后,从大肠杆菌中分离出它们的表达产物,用作抗原,制备抗体,从累积agr叩ine的植物组织中分离出这些酶蛋白来。因此,我们把oetoPine型Ti质粒pTI...  (本文共9页) 阅读全文>>

《癌症》1989年01期
癌症

EB病毒基因片段的生物学活性——Ⅰ、基因片段转染、细胞转化与裸鼠成瘤的研究

EBV基因以何种途径进入宿主细胞,如何整合于细胞DNA,是否激活癌基因,从而导致宿主细胞发生恶性转化这些癌变过程中的关键性问题尚待解决。 EBV-一DNA由于病毒感染,通过细胞表面的E BV受体进入细胞内,或者,由于携带EBV基因的日淋巴细胞与宿主细胞发生细胞融合现象,导致E BV基因转翰入宿主细胞DNA中。这两种假说尚待证实。此外,以基因片段转染宿主细胞的基因转移,是导致细胞转化的一种重要形式〔‘、2’ 本实验应用基因片段转染,转化细胞克隆选择,成瘤试验,回复培养和异种移植等体外一体内相结合的实验方法,分析EBV基因片段对宿主细胞转染诱导恶性转化的作用,为探讨痛变与控制提供新线索。 材料与方法 一、基因片段、细胞及裸最 EBV基因片段:由联邦德国Munieh分子生物学研究所提供。由限制性内切醉BamH肺切的目的基因片段一EB、仁esBamHI一w重复序列及其邻近序列,经分子克隆制序建立重组体后转染JM103菌株,培养扩增;然后...  (本文共5页) 阅读全文>>

权威出处: 《癌症》1989年01期
《科学通报》1989年04期
科学通报

紫云英根瘤菌基因文库的构建和结瘤基因片段的分离

根瘤菌(Rhizobi。二)与寄主豆科植物的共生涉及到根瘤菌和植物之间的识别;根瘤菌的浸染;根瘤的形成;根瘤菌类菌体的发育等一系列复杂的过程. 在首偕根瘤菌(R.molilo,i)中决定引起根瘤的结瘤基因(nod gene),目前已经鉴定出nodA,B,C,D.因为这类基因在多种根瘤菌中都被找到,而且在功能上可以互补,所以称为共同性结瘤基因(。。mmon nod).相邻的是一组与寄主专一性有关的nod基因,称为hsn基因,除了这两组与结瘤过程有关的基因外,还有决定固氮作用的基因,包括固氮酶结构基因(nifKDH),调节基因(nifA)和一些功能还不明而对固氮必需的基因,称为fix基因.上述基因构成了根瘤菌共生固氮基因组LI]. 紫云英(A:,;。ga坛,;汤icus)是中国南方广泛种植的一种绿肥作物.我国对紫云英根瘤菌(R hizobiuma:tragal,s)遗传学研究刚刚开始.我们用紫云英根瘤菌Ral59的总DNA和广谱性可...  (本文共4页) 阅读全文>>