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骨形成蛋白-2基因转染NIH3T3细胞诱导成骨的实验研究

骨形成蛋白 - 2 (bonemorphogeneticprotein - 2 ,BMP - 2 )是BMP家族中活性较强 ,能单独诱导成骨的因子[1] 。将BMP - 2与各种人工植骨材料复合修复相对较小的骨缺损已取得了良好的效果。但是BMP - 2作为外源性蛋白植入体内 ,与机体组织液接触容易被稀释和代谢 ,其半衰期短 ,往往难以满足临床骨缺损修复的需要。近年来 ,运用基因治疗的方法以增加机体内源性BMP的合成和分泌 ,为骨缺损修复提供了新思路[2 ,3] 。我们将BMP - 2基因转染小鼠NIH3T3成纤维细胞 ,并将转染细胞悬液注射于裸鼠股四头肌内 ,观察其体内成骨情况。1 材料与方法1.1材料重组质粒pCI BMP 2 [4 ] ;碱性磷酸酶 (alkalinephosphatase ,ALP)检测试剂盒 ;骨钙素 (osteocalcin ,OC)放免检测试剂盒 ;脂质体转染试剂盒 (Lipofec tamine)和...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国医学装备》2014年10期
中国医学装备

绿色荧光蛋白融合人核糖核酸酶抑制因子病毒感染NIH3T3细胞的研究

图1本室构建的pLNCX-EGFP-C1-hRI质粒Study on NIH3T3 cells infected by retrovirus encoding EGFP fusion of human ribonucleaseinhibitor protein/LI Kun,Ding Ning//China Medical Equipment,2014,11(10):20-22.李坤1丁宁1近些年来,随着肿瘤的发病机制在基因水平上的逐步阐明,对肿瘤进行基因治疗正成为肿瘤治疗的又一重要策略。目前对肿瘤的基因治疗,是指通过操作遗传物质(无论是人类本身的或外源的)来干预肿瘤的发生、发展和进程,包括纠正人自身基因结构或功能上的错乱,杀灭病变细胞或增强机体清除病变细胞的能力等,从而达到治疗肿瘤的目的。其中深入了解靶基因的功能,寻找要害靶分子,对之实施打击或补充是研究的重要内容。核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibito...  (本文共3页) 阅读全文>>

《中国中药杂志》2007年16期
中国中药杂志

桂皮醛对NIH3T3细胞周期及相关蛋白表达的影响

桂皮醛是中药肉桂的主要成分,肉桂在治疗慢性皮肤溃疡愈合方面具有重要的作用。成纤维细胞增殖调控障碍可能是慢性皮肤溃疡难愈合的重要因素之一。笔者前期研究结果表明,桂皮醛对大鼠慢性皮肤溃疡疮缘成纤维细胞[1]和NIH3T3细胞具有促增殖作用[2]。细胞增殖最终取决于增殖细胞在细胞外信号影响下细胞周期的有序进展,如果细胞周期本身的调控机制障碍及调节细胞周期的细胞外信号紊乱都会导致病态的发生。本实验以NIH3T3细胞为模型,从细胞周期、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)以及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达等方面对桂皮醛的促增殖作用机制进行初步探讨。1材料1.1主要试剂与仪器DMEM培养基(G ibco公司);胎牛血清(fetal bovine serum,FBS,天津TBD公司);胰蛋白酶,溴化丙锭(propid ium iod ide,PI,B ioti-um公司);倒置显微镜、BX51型多功能显微镜(日本O lympus公司);流式...  (本文共3页) 阅读全文>>

《生物化学与生物物理学报》1970年20期
生物化学与生物物理学报

鸡平滑肌肌球蛋白轻链激酶在NIH3T3细胞中的表达

鸡平滑肌肌球蛋白轻链激酶在NIH3T3细胞中的表达汪渊*(安徽医科大学生化教研室,分子生物学实验室,合肥230032)桂淑玉(安徽医科大学附属医院,合肥230022)D.M.Waterson(DepartmentofPharmacology,VanderbiltUniversity,Nashvile,TN37232USA)摘要肌球蛋白轻链激酶(MLCK)在调节平滑肌细胞收缩过程中具有十分重要的作用。本文通过将MLCKcDNA插到质粒pBKrsv中构建成pBKrsv-MLCK,并转染至NIH3T3细胞中。DNA-PCR、RT-PCR和Westernblot分析表明转染细胞可表达MLCK。活性分析表明所表达的MLCK具有生物学活性。为进一步研究MLCK在信号传导、调节平滑肌收缩等作用奠定了基础。关键词肌球蛋白轻链激酶;pBKrsv;表达;NIH3T3细胞收稿日期:1996-03-21;接受日期:1996-06-10。*通讯联系人。调...  (本文共6页) 阅读全文>>

《中华内分泌代谢杂志》2001年03期
中华内分泌代谢杂志

小鼠过氧化物酶体增殖体激活受体γ_2重组逆转录病毒载体在NIH3T3细胞中的表达

脂肪组织在维持机体的能量代谢平衡和糖、脂代谢的稳定等方面具有重要的生理功能。脂肪细胞增殖及分化异常可导致肥胖及脂肪发育不良等疾病的发生 ,已日趋成为世界性的健康问题 ,而且是冠心病、高血压、2型糖尿病及高脂血症等许多严重疾病的共同致病基础。深入细致地研究脂肪细胞的分化、发育过程及其调控机制对阐明肥胖和其相关疾病的病因及其发病机制具有十分重要的意义。过氧化物酶体增殖体激活受体γ2 (PPARγ2 )在脂肪细胞中特异表达并在脂肪细胞分化早期即开始起十分重要的作用〔1 3〕。本研究采用逆转录病毒介导小鼠PPARγ2 (mPPARγ2 )基因在靶细胞中表达 ,为进一步研究PPARγ2 的功能奠定基础材料和方法一、主要材料1.细胞与质粒 :大肠杆菌DH5α菌株、pcDNA3质粒、pGCEN逆转录病毒载体均由上海第二医科大学生物化学教研室馈赠。2 .细胞 :PA317细胞由上海市免疫学研究所馈赠。NIH3T3细胞购自中国科学院上海细胞生物研...  (本文共4页) 阅读全文>>

《中国医科大学学报》2005年03期
中国医科大学学报

蛋白激酶在NIH3T3细胞中对促成熟因子的作用

细胞周期各时段有两个重要的调控点:G1/S和G2/M。促成熟因子(maturationpromotingfactor,MPF)是调节细胞进、出M期所必需的蛋白激酶,通过促进靶蛋白的磷酸化而改变其生理活性[1]。而蛋白激酶C(proteinkinaseC,PKC)可以影响G1/S期过渡。在G2/M期过渡中,核纤层蛋白B1(laminB1)可直接作为PKCβⅡ的磷酸化靶蛋白而发挥作用。核纤层蛋白磷酸化使核纤层解聚而导致核被膜破裂。PKCβⅡ的特异性抑制剂Chelerythine可以抑制有丝分裂中的染色体凝集和微管形成。应该指出的是,G2/M期的关键调节物p34cdc2/cyclinB却不受这种抑制剂的影响[2]。本实验检测G2/M期MPF两种亚基p34cdc2和cyclinB在NIH3T3细胞中的蛋白表达,研究PKC激活剂1油酰2乙酰甘油(1oleoyl2acetylglycerol,OAG)对MPF的影响,探讨对细胞周期特别是对G...  (本文共2页) 阅读全文>>